一种渤丰3号杨无菌苗叶片基因编辑体系的建立方法技术

本发明专利技术公开了一种渤丰3号杨无菌苗叶片基因编辑体系的建立方法，属于组织培养及基因编辑技术领域。本发明专利技术通过5‑AU处理，建立和优化渤丰3号杨高效遗传转化体系，选择特异的sgRNAs靶点，构建编辑载体184kUV‑PDS1和184kUV‑PDS3，农杆菌转化渤丰3号杨无菌苗叶片，得到白化芽。本发明专利技术使用sgRNA1结合5‑AU预培养1d，在渤丰3号杨无菌苗叶片中实现了86.11％的遗传转化效率和53.13％的基因编辑效率。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及组织培养及基因编辑，特别是涉及一种渤丰3号杨无菌苗叶片基因编辑体系的建立方法。

技术介绍

1、植物遗传转化是分子设计育种的关键步骤，如基因工程和基因组编辑。其主要方法包括农杆菌介导的叶盘转化法、基因枪法、peg介导转化法、电击法、花粉管通道法、病毒介导转化法和纳米介导转化法等。其中，农杆菌介导的叶盘转化法利用根癌农杆菌的t-dna转移能力，将外源基因整合到植物基因组中，该操作由于简便性已被应用于大多数植物中进行基因工程的研究。如实现了64.18％的高效农杆菌介导的籼稻'中恢161'(oryzasativa subsp.indica'zhonghui 161')遗传转化；在大麻(cannabis sativa l.)中实现了稳定的农杆菌遗传转化体系，并成功敲除了pds基因。

2、尽管如此，植物叶盘法转化效率的不稳定仍是限制遗传转化和基因编辑技术发展的重要问题。这是因为不同植物物种、同一物种内的不同基因型以及同一基因型不同外植体的不同发育阶段对遗传转化率均不同。如同样的农杆菌遗传转化体系，狭叶杨(populusangustifolia本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种sgRNA，其特征在于，所述sgRNA的序列靶向敲除渤丰3号杨PDS基因；所述sgRNA包括sgRNA1或sgRNA3；所述sgRNA1的靶向结构域序列为5’-TTTGCAATGCCAAATAAGCC-3’；所述sgRNA3的靶向结构域序列为5’-GAGAAAGTGAAGTTTGCAAT-3’。

2.一种靶向敲除渤丰3号杨PDS基因的基因编辑载体，其特征在于，其包含编码权利要求1所述的sgRNA的核苷酸序列。

3.如权利要求2所述的基因编辑载体，其特征在于，所述基因编辑载体包括184kUV-PDS1基因编辑载体和184kUV-PDS3基因编辑载体；所述18...

【技术特征摘要】

1.一种sgrna，其特征在于，所述sgrna的序列靶向敲除渤丰3号杨pds基因；所述sgrna包括sgrna1或sgrna3；所述sgrna1的靶向结构域序列为5’-tttgcaatgccaaataagcc-3’；所述sgrna3的靶向结构域序列为5’-gagaaagtgaagtttgcaat-3’。

2.一种靶向敲除渤丰3号杨pds基因的基因编辑载体，其特征在于，其包含编码权利要求1所述的sgrna的核苷酸序列。

3.如权利要求2所述的基因编辑载体，其特征在于，所述基因编辑载体包括184kuv-pds1基因编辑载体和184kuv-pds3基因编辑载体；所述184kuv-pds1基因编辑载体是由184kuv载体连接sgrna1构成；所述184kuv-pds3基因编辑载体是由184kuv载体连接sgrna3构成。

4.一种包含权利要求2或3所述的基因编辑载体的宿主菌，其特征在于，所述宿主菌包括农杆菌gv3101。

5.如权利要求1所述的sgrna或权利要求2或3所述的基因编辑载体或权利要求4所述的宿主菌在获得渤丰3号杨的转基因白化植株中的应用。

6.一种渤丰3号杨无菌苗叶片遗传转化体系...

【专利技术属性】
技术研发人员：张冰玉，杨文华，褚延广，张明艳，苏晓华，李虹，范成明，胡赞民，
申请(专利权)人：中国林业科学研究院林业研究所，
类型：发明
国别省市：