通过实时PCR从细胞裂解物定量HBV cccDNA的高通量新方法技术

本发明专利技术提供了(1)能够用于乙型肝炎病毒(HBV)环状DNA(cccDNA)的高效实时qPCR的新DNA引物组和(2)使用这个新DNA引物组通过实时qPCR从细胞定量HBV cccDNA的高通量新方法。它还提供了这种方法在实验感染的肝细胞中监测cccDNA水平和评价对HBV的治疗效果中的用途。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】通过实时PCR从细胞裂解物定量HBVcccDNA的高通量新方法专利
本专利技术涉及(1)可以用于乙型肝炎病毒(HBV)共价闭合型环状DNA(cccDNA)的高度高效实时qPCR的新DNA引物组和(2)使用这个新DNA引物组通过实时qPCR从细胞定量HBVcccDNA的高通量新方法。它还涉及这种方法在实验感染的肝细胞中监测cccDNA水平和评价对HBV的治疗效果中的用途。专利技术背景由于cccDNA在HBV生物学中发挥重要作用，所以已经建立许多实验系统以研究靶向cccDNA的潜在候选药物。为了提供cccDNA的可控细胞模型，Ladner等人(Ladner,S.K.,Otto,M.J.,Barker,C.S.,Zaifert,K.,Wang,G.H.,Guo,J.T.,Seeger,C.,King,R.W.,AntimicrobAgentsChemother.1997年8月；41(8):1715-20)已经插入了在tet启动子系统的转录性控制下的HBV病毒基因组。另外，插入物的长度超过HBV全基因组的长度，这提供了在Nt(核苷酸)1805-1900的序列重叠(Cai等人,Antimi本文档来自技高网...

【技术保护点】
反向引物，在其3’最末端包含识别乙型肝炎病毒(HBV)基因组(SEQ ID NO:1)的核苷酸序列中至少16个连续核苷酸的序列。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2014.12.31 CN PCT/CN2014/0958541.反向引物，在其3’最末端包含识别乙型肝炎病毒(HBV)基因组(SEQIDNO:1)的核苷酸序列中至少16个连续核苷酸的序列。2.根据权利要求1所述的反向引物，其中反向引物在其3’最末端包含识别HBV基因组的核苷酸序列中从SEQIDNO:1的核苷酸1996至核苷酸2278的至少16个连续核苷酸的序列。3.根据权利要求1或2所述的反向引物，其中反向引物的长度是16至200个核苷酸、17至35个核苷酸、18至30个核苷酸、21至30个核苷酸、24至30个核苷酸或21至24个核苷酸。4.根据权利要求1至3中任一项所述的反向引物，其中反向引物在5’至3’方向包含选自以下的序列：SEQIDNO:10:R02005-2025(反向互补物)5’-AAGGCTTCCCGATACAGAGCT-3’；SEQIDNO:11:R11996-2016(反向互补物)5’-CGATACAGAGCTGAGGCGGTA-3’；SEQIDNO:12:R22001-2021(反向互补物)5’-CTTCCCGATACAGAGCTGAGG-3’；SEQIDNO:13:R32046-2067(反向互补物)5’-CTGAGTGCAGTATGGTGAGGTG-3’；SEQIDNO:14:R42097-2118(反向互补物)5’-CCCACCCAGGTAGCTAGAGTCA-3’；SEQIDNO:15:R52129-2152(反向互补物)5’-TAGGTCTCTAGACGCTGGATCTTC-3’；SEQIDNO:16:R62183-2206(反向互补物)5’-CCACAAGAGTTGCCTGAACTTTAG-3’；SEQIDNO:17:R72188-2210(反向互补物)5’-GAAACCACAAGAGTTGCCTGAAC-3’；SEQIDNO:18:R82210-2233(反向互补物)5’-TCCAAAAGTGAGACAAGAAATGTG-3’；SEQIDNO:19:R92249-2272(反向互补物)5’-CACTCCGAAAGACACCAAATACTC-3’；SEQIDNO:20:R102251-2274(反向互补物)5’-CACACTCCGAAAGACACCAAATAC-3’；SEQIDNO:21:R112257-2278(反向互补物)5’-AATCCACACTCCGAAAGACACC-3’；和SEQIDNO:24:R4(30bp)2097-2126(反向互补物)5’-AATTAACACCCACCCAGGTAGCTAGAGTCA-3’。5.引物对，由权利要求1至4中任一项所述的反向引物和通用正向引物组成，其中通用正向引物的长度是16至200个核苷酸、17至35个核苷酸、18至30个核苷酸、21至30个核苷酸、24至30个核苷酸或21至24个核苷酸，并且通用正向引物识别HBV基因组的DR2的上游。6.对根据权利要求5所述的引物对，其中通用正向引物与从核苷酸1528至核苷酸1548的核苷酸序列SEQIDNO:5具有至少80％序列同一性。7.根据权利要求5所述的引物对，其中通用正向引物在5’至3’方向包含SEQIDNO...

【专利技术属性】
技术研发人员：W·恩格，林赵虎，N·秦，
申请(专利权)人：豪夫迈·罗氏有限公司，
类型：发明
国别省市：瑞士,CH