用于增强T细胞功能的方法技术

本发明专利技术公开了用于增强T细胞功能的方法，该方法的特点是抑制所述T细胞中的程序性死亡‑1配体1(PD‑L1)和/或程序性死亡‑1配体2(PD‑L2)的表达。也公开了通过所述功能增强方法制备的功能增强的T细胞。还公开了包含所述功能增强的T细胞的治疗剂。所述T细胞可增强对癌症的免疫应答，和可用于对癌症有效的免疫疗法以及传染病和自身免疫性疾病的治疗或预防。

Methods for enhancing the function of T cells

The invention discloses a method for enhancing the function of T cells, the characteristic of this method is the inhibition of programmed death in T cells 1 ligand 1 (PD L1) and / or programmed death ligand 2 (PD 1 L2) expression. Functional enhanced T cells prepared by the functional enhancement method are also disclosed. A therapeutic agent comprising the functional enhanced T cell is also disclosed. The T cell can enhance an immune response to cancer, and can be used for immunotherapy against cancer, as well as for the treatment or prevention of infectious diseases and autoimmune diseases.

【技术实现步骤摘要】
用于增强T细胞功能的方法本申请为分案申请，原申请的申请日为2010年3月5日，申请号为201080020173.X(PCT/JP2010/053666)，专利技术名称为“用于增强T细胞功能的方法”。
本专利技术涉及通过抑制T细胞的程序性死亡-1配体1(ProgrammedDeath-1Ligand1，PD-L1)和/或程序性死亡-1配体2(ProgrammedDeath-1Ligand2，PD-L2)的表达来增强T细胞功能的方法，等等。专利技术背景经由B7：CD28共刺激分子家族的信号强烈地参与T细胞反应的活化、抑制和调节。已知属于B7：CD28共刺激分子家族的PD-1(程序性死亡1)分子与PD-L1和PD-L2反应，并负调控T细胞反应(非专利文献1)。首先，据认为在T细胞上表达的PD-1与在抗原呈递细胞或癌细胞上表达的PD-L1，或者在抗原呈递细胞上的PD-L2反应以抑制T细胞的活化。另一方面，已知PD-L1也表达于T细胞上。最近，证实了以下可能性，即PD-L1不仅与PD-1也与B7-1(CD80)结合，并且存在于T细胞上的PD-L1向所述T细胞发送负信号(非专利文献2)。然而，完全未知在免疫反应中表达于T细胞上的PD-L1所起的生理学和病理学作用。关于PD-L2，目前只知道它只在诱导时表达于得自骨髓的树突状细胞、巨噬细胞、B1B细胞和肥大细胞上，不清楚它在T细胞上的表达。因此，还不完全了解生理性地或强制地表达于T细胞上的PD-L2所起的作用。已证实如下可能性：来自共刺激分子(其代表为CTLA4或PD-1)的免疫应答抑制信号，通过抑制自身反应T细胞在初始阶段的引发或效应子功能诱导耐受(免疫耐受)，同时与来自共刺激分子(其代表为T细胞受体(TCR)或CD28)的免疫应答活化信号相平衡，从而保护组织免受自身反应T细胞伤害，并在另一方面调控传染免疫或肿瘤免疫。另外，据认为某些肿瘤或病毒利用共刺激分子通过直接或间接的机制来抑制T细胞的活化和增殖，以弱化针对它们的免疫反应。此外，据认为归因于T细胞功能紊乱的部分疾病中，共刺激分子的异常是引起T细胞功能紊乱的原因。现有技术文献非专利文献非专利文献1：KeirM，和另外三人，Annu.Rev.免疫学，第26卷,第677-704页(2008)非专利文献2：ButteM，和另外四人，Immunity，第27卷，第111-122页(2007)专利技术简述本专利技术要解决的问题本专利技术的目标是提供用于增强T细胞功能的方法，和具有经增强功能的T细胞。解决所述问题的方法本专利技术人发现通过人工调控T细胞的PD-L1和/或PD-L2的表达来调控T细胞免疫应答是可能的。具体而言，本专利技术人发现抗肿瘤T细胞中PD-L1和/或PD-L2表达的减少增强所述T细胞的抗肿瘤作用，从而使本专利技术得以完成。更确切地说，本专利技术涉及：[1]用于增强T细胞功能的方法，包括抑制所述T细胞的程序性死亡-1配体1(PD-L1)和/或程序性死亡-1配体2(PD-L2)的表达；[2][1]的用于增强T细胞功能的方法，其中所述T细胞是细胞毒性T细胞或调节性T细胞；[3][2]的用于增强T细胞功能的方法，其中所述调节性T细胞是辅助性T细胞、调控T细胞(controllingTcell)或Th17细胞；[4][1]的用于增强T细胞功能的方法，其中所述功能增强是T细胞干扰素-γ(IFN-γ)的产生增强；[5][1]的用于增强T细胞功能的方法，其中通过针对PD-L1和/或PD-L2的siRNA抑制PD-L1和/或PD-L2的表达；[6]具有经增强的功能的T细胞，所述T细胞在PD-L1和/或PD-L2的表达方面受到抑制；[7][6]的具有经增强的功能的T细胞，其中所述T细胞是细胞毒性T细胞或调节性T细胞；[8][7]的具有经增强的功能的T细胞，其中所述调节性T细胞是辅助性T细胞、调控T细胞或Th17细胞；[9][6]的具有经增强的功能的T细胞，其中所述功能增强是T细胞干扰素-γ(IFN-γ)的产生增强；[10][6]的具有经增强的功能的T细胞，其中通过针对PD-L1和/或PD-L2的siRNA抑制PD-L1和/或PD-L2的表达；和[11]用于对[6]-[10]中任一项的具有经增强功能的T细胞显示敏感性的疾病的治疗剂，其包含所述T细胞作为活性成分。本专利技术优点本专利技术提供了用于增强T细胞功能的方法，具有经增强的功能的T细胞，等等。该T细胞增强针对癌症的免疫应答，并可用于有效的癌症免疫疗法，或可用于传染病或自身免疫性疾病的治疗或预防。附图简述[图1]图1是分析CD8阳性T细胞的PD-L1表达的图。[图2]图2是分析CD8阳性T细胞的PD-L1表达的图。[图3]图3是分析CD8阳性T细胞的PD-L2表达的图。[图4]图4是显示CD8阳性T细胞的干扰素γ(IFN-γ)浓度的图。[图5]图5是显示CD4阳性T细胞的IFN-γ浓度的图。[图6]图6是分析LCL的PD-L1表达的图。[图7]图7是分析LCL的PD-L2表达的图。[图8]图8是显示CD8阳性四聚体-阳性T细胞的比例的图。优选实施方案详述本文中，“T细胞的经增强的功能”意为改良所述T细胞的效应子功能。所述T细胞的经增强的功能(其不限制本专利技术)，包括在所述T细胞的增殖速率上的提高、在细胞因子产量上的增加、或细胞毒性的改良。此外，所述T细胞的经增强的功能包括在受抑制状态例如无反应性(无应答性)状态或休眠状态下所述T细胞的耐受性的消除和抑制，更确切地说，所述T细胞从所述受抑制状态转变到所述T细胞对来自外界的刺激作出反应的状态。本专利技术中，“无反应性”包括免疫细胞对刺激(例如，通过活化受体或细胞因子的刺激)的无应答性。无反应性可因例如暴露于免疫抑制剂或暴露于高剂量的抗原而发生。这种无反应性通常是抗原特异性的，和甚至在完成暴露于所耐受的抗原之后仍持续。例如，T细胞中的无反应性的特点在于不产生细胞因子(例如，白细胞介素(IL)-2)。T细胞的无反应性发生在当T细胞暴露于抗原时缺乏第二个信号(共刺激信号)的情况下接收到第一个信号(经由TCR或CD-3的信号)的时候。本文中，“PD-L1”意指PD-1的配体1，它是表达于所谓的抗原呈递细胞(例如活化的单核细胞或树突状细胞)上的共刺激分子，也被称作B7-H1。GenBank检索号AF233516显示了人PD-L1的核苷酸序列，NM021893显示了小鼠PD-L1核苷酸序列(Freeman等人.(2000)J.Exp.Med.192：1027)。本文中，“PD-L2”意指PD-1的配体2，也被称作B7-DC。GenBank检索号NM_025239显示了人PD-L2的核苷酸序列，NM_021896显示了小鼠PD-L2的核苷酸序列(NatureImmunology,2001,第2卷,第3期,第261-267页)。本文中，“T细胞”也被称作T淋巴细胞，意指在参与免疫应答的淋巴细胞中的得自胸腺的细胞。T细胞包括CD8阳性T细胞(细胞毒性T细胞：CTL)、CD4阳性T细胞(辅助性T细胞)、抑制性T细胞、调节性T细胞(例如调控T细胞)、效应细胞、幼稚T细胞、记忆T细胞、表达TCRα和β链的αβT细胞、和表达TCRγ和δ链的γδT细胞中的任一种。T细胞包括T细胞的前体本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种用于增强T细胞功能的方法，包括抑制所述T细胞的程序性死亡‑1配体1 (PD‑L1)和/或程序性死亡‑1配体2 (PD‑L2)的表达的步骤，其中所述步骤离体进行，并且其中通过针对PD‑L1和/或PD‑L2的siRNA抑制PD‑L1和/或PD‑L2的表达，所述siRNA直接导入T细胞中或在T细胞中转录，其中与其中不抑制PD‑L1和/或PD‑L2表达的对照T细胞相比，所述功能增强是T细胞干扰素‑γ (IFN‑γ)的产生增强达30%或更多。

【技术特征摘要】
2009.03.06 JP 2009-0535361.一种用于增强T细胞功能的方法，包括抑制所述T细胞的程序性死亡-1配体1(PD-L1)和/或程序性死亡-1配体2(PD-L2)的表达的步骤，其中所述步骤离体进行，并且其中通过针对PD-L1和/或PD-L2的siRNA抑制PD-L1和/或PD-L2的表达，所述siRNA直接导入T细胞中或在T细胞中转录，其中与其中不抑制PD-L1和/或PD-L2表达的对照T细胞相比，所述功能增强是T细胞干扰素-γ(IFN-γ)的产生增强达30%或更多。2.权利要求1的用于增强T细胞功能的方法，其中所述T细胞是细胞毒性T细胞或者调节性T细胞。3.权利要求2的用于增强T细胞功能的方法，其中所述调节性T细胞是辅助性T细胞、调控T细胞或Th17细胞。4.一种具有经增强的功能的T细胞，其在PD-L1和/或PD-L...

【专利技术属性】
技术研发人员：珠玖洋，池田裕明，岩村康一，峰野纯一，加藤郁之进，
申请(专利权)人：国立大学法人三重大学，宝生物工程株式会社，
类型：发明
国别省市：日本,JP