被增溶酶及其用途制造技术

本发明专利技术涉及包含从包涵体增溶，并且保留生物质降解活性的具有生物质降解活性的一种多肽或多种多肽的混合物，以及用于产生和使用所述混合物的方法。本文所述的本发明专利技术提供用于增加可从宿主细胞分离的具有生物质降解活性的重组蛋白的产率的方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】被增溶酶及其用途相关申请本申请要求2014年9月26日提交的美国临时申请号62/055,702的权益；所述美国临时申请的整个内容据此以引用的方式并入。序列表本申请含有已以电子方式以ASCII格式提交，并且据此以引用的方式整体并入的序列表。所述ASCII拷贝于2015年9月1日创建，命名为X2002-7003WO_SL.txt，并且大小是76,946个字节。专利
本专利技术大体上涉及包含从包涵体增溶并具有生物质降解活性的具有生物质降解活性的多肽的混合物，以及用于产生本文所述的混合物的方法。本专利技术也提供用于使用此类混合物例如来加工生物质材料的方法。专利技术背景诸如纤维素酶、木聚糖酶和木质素酶的生物质降解酶对于诸如原料的生物质的降解是重要的。纤维素和木质纤维素材料在许多应用中被大量生产、加工和使用。此类材料常常被使用一次，接着作为废弃物丢弃，或仅被视为是废弃材料，例如污水、甘蔗渣、锯屑和秸杆。专利技术概述重组蛋白在诸如大肠杆菌(E.coli)的宿主细胞中高水平表达可导致重组蛋白在宿主细胞内积聚成不溶性聚集物。这些不溶性聚集物被称为包涵体，并且也可含有其它组分，诸如宿主细胞内源性蛋白本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种混合物，其包含多种具有生物质降解活性的多肽和增溶剂，其中相较于具有生物质降解活性的天然多肽，所述多肽具有至少8‑10％的所述生物质降解活性。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2014.09.26 US 62/055,7021.一种混合物，其包含多种具有生物质降解活性的多肽和增溶剂，其中相较于具有生物质降解活性的天然多肽，所述多肽具有至少8-10％的所述生物质降解活性。2.如权利要求1所述的混合物，其进一步包含一种或多种与包涵体相关的蛋白质。3.如权利要求1所述的混合物，其中所述混合物不包含一种或多种与包涵体相关的蛋白质。4.如前述权利要求中任一项所述的混合物，其进一步包含细胞碎片、一种或多种核糖体组分、一种或多种宿主蛋白质和/或包括DNA和/或RNA的宿主核酸。5.如前述权利要求中任一项所述的混合物，其中所述生物质降解活性是纤维二糖酶活性、木质素酶活性、内切葡聚糖酶活性、纤维二糖水解酶活性或木聚糖酶活性。6.如前述权利要求中任一项所述的混合物，其中所述多肽是部分未折叠的，部分错误折叠的，或部分变性的。7.如权利要求1所述的混合物，其中所述多肽包含与SEQIDNO：1具有至少90％同一性的氨基酸序列。8.如前述权利要求中任一项所述的混合物，其中所述多肽包括来自里氏木霉的Cel3A酶或其功能性变体或片段。9.如权利要求8所述的混合物，其中所述Cel3A酶包含氨基酸序列SEQIDNO：1或与其具有至少90％同一性的氨基酸序列。10.如前述权利要求中任一项所述的混合物，其中所述多肽由包含与SEQIDNO：2或SEQIDNO：3的至少90％同一性的核酸序列编码。11.如前述权利要求中任一项所述的混合物，其中所述多肽是无糖基化的。12.如权利要求1-3或7中任一项所述的混合物，其中所述增溶剂包括尿素，并且任选地，以介于0.2M-6M之间的浓度存在。13.如前述权利要求中任一项所述的混合物，其进一步包含至少一种具有生物质降解活性的额外多肽或产生一种或多种具有生物质降解活性的酶的微生物。14.如权利要求13所述的混合物，其中所述额外多肽选自木质素酶、内切葡聚糖酶、纤维二糖水解酶、纤维二糖酶和木聚糖酶或其任何组合。15.如权利要求13或14所述的混合物，其中所述额外多肽选自：a.包含与SEQIDNO：1具有至少90％同一性的氨基酸序列的多肽；b.来自里氏木霉的Cel3A酶或其功能性变体或片段；或c.由包含SEQIDNO：2或SEQIDNO：3(例如由SEQIDNO：2或SEQIDNO：3组成)的核酸序列编码的多肽。16.如权利要求13-15中任一项所述的混合物，其中所述额外多肽是无糖基化的。17.如权利要求13-15中任一项所述的混合物，其中所述额外多肽是糖基化的。18.一种混合物，其包含具有与SEQIDNO：1具有至少90％同一性的氨基酸序列的多种多肽和增溶剂，其中所述多种多肽具有至少20％-40％的包含SEQIDNO：1的天然多肽的活性。19.如权利要求18所述的混合物，其进一步包含一种或多种与包涵体相关的蛋白质。20.如权利要求18所述的混合物，其中所述混合物不包含一种或多种与包涵体相关的蛋白质。21.如权利要求18-20中任一项所述的混合物，其进一步包含细胞碎片、一种或多种核糖体组分、一种或多种宿主蛋白质和/或包括DNA和/或RNA的宿主核酸。22.如权利要求18-21中任一项所述的混合物，其中所述多肽是部分未折叠的，部分错误折叠的，或部分变性的。23.如权利要求18-22中任一项所述的混合物，其中所述多肽由包含与SEQIDNO：2或SEQIDNO：3的至少90％同一性的核酸序列编码。24.如权利要求18-23中任一项所述的混合物，其中所述多肽是无糖基化的。25.如权利要求18-20中任一项所述的混合物，其中所述增溶剂包括尿素，并且任选地，以介于0.2M-6M之间的浓度存在。26.如权利要求18-25中任一项所述的混合物，其进一步包含至少一种具有生物质降解活性的额外多肽或产生一种或多种具有生物质降解活性的酶的微生物。27.如权利要求26所述的混合物，其中所述额外多肽选自木质素酶、内切葡聚糖酶、纤维二糖水解酶、纤维二糖酶和木聚糖酶或其任何组合。28.如权利要求26或27所述的混合物，其中所述额外多肽选自：a.包含与SEQIDNO：1具有至少90％同一性的氨基酸序列的多肽；b.来自里氏木霉的Cel3A酶或其功能性变体或片段；或c.由包含SEQIDNO：2或SEQIDNO：3(例如由SEQIDNO：2或SEQIDNO：3组成)的核酸序列编码的多肽。29.如权利要求26-28中任一项所述的混合物，其中所述额外多肽是无糖基化的。30.如权利要求26-28中任一项所述的混合物，其中所述额外多肽是糖基化的。31.一种用于产生如权利要求1-30中任一项所述的混合物的方法，其包括使表达具有生物质降解活性的所述多肽的细胞或其溶解产物与适于增溶所述多肽的浓度的增溶剂接触。32.如权利要求31所述的方法，其进一步包括溶解所述细胞以获得溶解产物，使所述溶解产物的可溶性部分与不溶性部分分离，以及将所述不溶性部分再混悬于所述增溶剂中。33.如权利要求31或32所述的方法，其中所述增溶剂是尿素，并且任选地，其中所述增溶剂的所述浓度介于0.2M-6M之间。34.如权利要求31-33中任一项所述的方法，其中所述生物质降解活性是纤维二糖酶活性、木质素酶活性、内切葡聚糖酶活性、纤维二糖水解酶或木聚糖酶活性。35.如权利要求31-34中任一项所述的方法，其中所述多肽包含与SEQIDNO：1具有至少90％同一性的氨基酸序列。36.如权利要求31-35中任一项所述的方法，其中所述多肽包括来自里氏木霉的Cel3A或其功能性变体或片段。37.如权利要求31-36中任一项所述的方法，其中所述多肽是无糖基化的。38.一种用于产生具有生物质降解活性的多肽的方法，其包括在细胞中表达所述多肽，以及使所述细胞或其溶解产物与适于增溶所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：M·梅多夫，N·科瑞德，J·林驰，S·兰德里，A·吉田，D·彭泽伦，T·C·马斯特曼，
申请(专利权)人：希乐克公司，
类型：发明
国别省市：美国,US