一种利用琼脂糖凝胶亲和层析色谱提取医药级超高纯度乳酸链球菌素的方法技术

一种利用琼脂糖凝胶亲和层析色谱提取医药级超高纯度乳酸链球菌素的方法，它涉及一种利用制备超高纯度乳酸链球菌素的方法。本发明专利技术解决目前生产上利用常规提取方法制备Nisin纯度不高的问题。它包括：选择Nisin生物效价≧8500IU/mL的发酵液，在经过两级大小孔径不同的超滤膜超滤浓缩后，经过活性炭脱色，泡沫分离浓缩，沉淀，离心沉淀分离；然后先用酸与盐的混合溶液平衡色谱柱，再用平衡缓冲液溶解将生物效价≥15000IU/mg的发酵液离心沉淀配制成1.0～50.0g/L的样品走柱液溶液，在经过洗脱液洗脱后，沉淀Nisin，对得到的Nisin沉淀进行2～3次丙酮洗涤，洗涤后进行冷冻干燥和胶体磨打磨。

【技术实现步骤摘要】
一种利用琼脂糖凝胶亲和层析色谱提取医药级超高纯度乳酸链球菌素的方法
本专利技术涉及本专利技术涉及一种利用制备超高纯度乳酸链球菌素的方法，尤其是可以利用此方法制备药品级高纯度乳酸链球菌素。
技术介绍
乳酸链球菌素(英文名称Nisin)亦称乳酸链球菌肽，是乳酸链球菌产生的一种多肽物质，由34个氨基酸残基组成，分子量约为3500Da。由于Nisin可抑制大多数革兰氏阳性细菌，如肉毒梭菌、金黄色葡萄球菌、溶血链球菌、利斯特氏菌，并对芽孢杆菌的芽孢有强烈的抑制作用，因此被作为食品防腐剂广泛应用于食品行业。通常，产芽孢的细菌耐热性很强，如鲜乳采用135℃、2秒超高温瞬时灭菌，非芽孢细菌的死亡率为100％，芽孢细菌的死亡率90％，还有10％的芽孢细菌不能杀灭。若鲜乳中添加0.03-0.05g/kgNisin就可抑制芽孢杆菌和梭状芽孢杆菌孢子的发芽和繁殖。根据研究结果表明，乳酸链球菌素的抗菌作用是通过干扰细胞v膜的正常功能，造成细胞膜的渗透，养分流失和膜电位下降，从而导致致病菌和腐败菌细胞的死亡。Nisin作为新型的高效、无毒、安全的天然食品防腐剂，进入人体后被机体蛋白酶消化分解为氨基酸，被机体吸收本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种利用琼脂糖凝胶亲和层析色谱提取医药级超高纯度乳酸链球菌素的方法，其特征在于它是按照以下步骤进行：以生物效价≥15000IU/mg的乳酸链球菌素粗制半成品为原料，再经过琼脂糖凝胶亲和色谱层析柱进行乳酸链球菌素纯化，最后经过冷冻干燥制成超高纯度乳酸链球菌素纯品；其中，生物效价≥15000IU/mg的乳酸链球菌素粗制半成品的制备方法如下：一、利用陶瓷膜对乳酸链球菌素最终发酵活力≥8500IU/mL的发酵液进行固液分离，分离得到清液进行下一步处理；其中，分离前发酵液的pH预先调至2.5，并在70℃下恒速搅拌30min；二、利用孔径不同的两级膜对上步骤得到的清液进行第一级和第二级的分离和浓缩，第一级...

【技术特征摘要】
1.一种利用琼脂糖凝胶亲和层析色谱提取医药级超高纯度乳酸链球菌素的方法，其特征在于它是按照以下步骤进行：以生物效价≥15000IU/mg的乳酸链球菌素粗制半成品为原料，再经过琼脂糖凝胶亲和色谱层析柱进行乳酸链球菌素纯化，最后经过冷冻干燥制成超高纯度乳酸链球菌素纯品；其中，生物效价≥15000IU/mg的乳酸链球菌素粗制半成品的制备方法如下：一、利用陶瓷膜对乳酸链球菌素最终发酵活力≥8500IU/mL的发酵液进行固液分离，分离得到清液进行下一步处理；其中，分离前发酵液的pH预先调至2.5，并在70℃下恒速搅拌30min；二、利用孔径不同的两级膜对上步骤得到的清液进行第一级和第二级的分离和浓缩，第一级分离后浓缩倍数为4～8倍，第二级分离后浓缩倍数为8～14倍，得到的浓缩液进行下一步处理；所述的两级膜为卷式超滤膜，其中，第一级膜孔径为10000～100000；第二级膜孔径为1000～10000；三、利用竹制或椰壳制颗粒状活性炭对上述一次浓缩液进行脱色处理，得到脱色后浓缩液；四、利用泡沫分离法对步骤三得到的脱色后浓缩液进行乳酸链球菌素的二次浓缩分离，在泡沫分离过程中以2～6个碳原子数的食品级分析纯正烷醇对泡沫进行消泡处理，得到的消泡浓缩液加入0.5～1.5倍体积的相同的正烷醇，在转速为10～50转/min的条件下搅拌30～60min，静置12～24h，待沉淀完全后进行下一步离心处理；五、利用三项转鼓离心分离机对上步得到的消泡浓缩液进行离心浓缩，离心转速为8000～12000r/min，离心时间为5～10min，离心后收集固相物即为乳酸链球菌素粗制半成品原料，其生物效价≥15000IU/mg，水分含量为10％～30％；所述的经过琼脂糖凝胶亲和色谱层析柱进行乳酸链球菌素纯化的操作步骤为：一、用pH为2.50～3.50的平衡缓冲液，以0.001～0.100L/min的流速对琼脂糖凝胶亲和层析色谱柱进行柱平衡，当流出液的pH与平衡缓冲液的pH相同时停止柱平衡；二、取生物效价≧15000IU/mg的乳酸链球菌素粗制半成品，溶解于平衡缓冲液中，配制成浓度为1.0～50.0g/L的样品走柱液，在经过步骤一柱平衡后的琼脂糖凝胶色谱柱上对样品走柱液进行走柱处理以吸附乳酸链球菌素分子，当流出液中的乳酸链球菌素的生物效价≧50IU/mL，则琼脂糖凝胶层析色谱吸附达到饱和；三、乳酸链球菌素走样吸附达到饱和后，再用平衡缓冲液顶柱，清除柱层空隙中没有完全被吸附的样品走柱液，当流出液的pH与平衡缓冲液的pH相同时，停止顶柱处理；四、用pH在2.00～3.00之间的洗脱液对步骤三处理后的琼脂糖凝胶亲和层析色谱柱进行分离产物洗脱，以0.001～0.100L/min的流速对色谱柱进行柱洗脱，在洗脱过程中分三段对洗脱液进行收集：第一段为光吸收130以下收集，第二段为光吸收130到峰值再降到80之间收集，第三段为光吸收80到20之间收集，当流出液的pH与洗脱液相同时停止洗脱；其中，平衡缓冲液是酸...

【专利技术属性】
技术研发人员：梁恒宇，张钦革，陈傲冰，王贵元，郭坤，张良，
申请(专利权)人：安泰生物工程股份有限公司，
类型：发明
国别省市：黑龙江,23