一种积雪草酸替诺福韦二吡呋酯的化合物及其制备方法技术

本发明专利技术涉及一种积雪草酸替诺福韦二吡呋酯的化合物及其制备方法。本发明专利技术使用的制备方法操作简便、产率和纯化程度高，无毒害副产物，其可用剂型为常见口服剂型，优选片剂和胶囊剂，其新药用途表现为同时具有对抗乙型肝炎病毒和保护肝脏的能力，是一个较有潜力的保肝型抗乙型肝炎药物。

【技术实现步骤摘要】
一种积雪草酸替诺福韦二吡呋酯的化合物及其制备方法
本专利技术属于医药领域，具体涉及一种积雪草酸替诺福韦二吡呋酯的化合物，包含其制备方法，还涉及该化合物的药用用途。
技术介绍
富马酸替诺福韦二吡呋酯(tenofovirdisoproxilfumarate,TDF)由美国吉利德科学公司开发，是一种新型核苷酸类逆转录酶抑制剂(NRTIs)，是替诺福韦的口服前体药物，能够有效抑制HIV-1、HIV-2病毒和肝DNA病毒，具有显著的抗病毒能力，孕妇也可使用，是国内外临床治疗HIV病毒和HBV病毒的主要用药。其具体结构式如下：其中，美国吉利德科学公司在中国申请专利CN2007101962653、CN988074354和CN971974608，分别公开了富马酸替诺福韦的化合物、剂型、合成方法及盐式化合物。专利CN101870713A和专利103641858B报道了两种改良的富马酸替诺福韦二吡呋酯的合成工艺，专利CN101781335B公布了富马酸替诺福韦酯的一种晶型及制备方法，专利CN204502513公开了一种制备富马酸替诺福韦二吡呋酯的工艺。关于富马酸替诺福韦二吡呋酯的专利在国内外都有了相应的申请。尽管富马酸替诺福韦酯的市场价值非常大，但随着越来越多的应用临床，其仍然存在一些副作用，例如，严重肝肿大伴脂肪变性和急性肾衰等。富马酸替诺福韦二吡呋酯经患者肾脏代谢造成的肾脏损伤和HIV/HBV共感染患者的治疗不确定性也逐渐显现。综上，寻求比富马酸替诺福韦二吡呋酯更少健康损伤且更良好药效的药物是有必要的。积雪草酸(Asiaticacid，AA)又名亚细亚酸，具有乌苏烷型骨架，是中药积雪草提取物中的五环三萜烯类组分。专利CN101176731B公开了积雪草酸在抗纤维化方面的应用，而专利CN103816164B则公开了一种积雪草酸盐在制备抗抑郁药物中的应用。其结构式如下：近年研究表明，AA具有广泛的药理活性，如肝保护、肾保护、抗抑郁、治疗皮肤创伤、慢性溃疡等。一方面，积雪草酸能够减轻大小鼠酒精肝、D-氨基半乳糖/脂多糖(D-GalN/LPS)和高血脂等造成的肝损伤、减缓肝纤维化进程；另一方面，积雪草酸又能够减轻高糖诱导的氧化应激损伤，缓解高糖诱导的系膜细胞氧化应激损伤以及减少细胞外基质的分泌，对糖尿病肾病大鼠起肾保护作用的同时又能缓解肾组织纤维化进程。积雪草酸与药物联用成盐也有良好的前景。专利CN102755330B，CN102755329B和CN102755328B公布了积雪草酸盐气雾剂、颗粒剂和微乳胶囊等剂型的制备方法。例如，将AA与13-正辛基小蘗碱(13-B-8-AA)和13-正辛基巴马汀(B-AA)成盐，作用于小鼠白血病细胞L1210、人慢性髓原细胞K562及人肺腺癌细胞A549，发现成盐后的化合物抑制肿瘤生长的作用增强；AA与有抗炎、杀菌、抗癌活性的稀土硝酸盐1∶1配合后对肿瘤细胞抑制率显著增加。如上，替诺福韦二吡呋酯具有显著的抗乙肝病毒的能力，积雪草酸具有肝保护、肾保护、抗抑郁、抑制肿瘤细胞等功效，然而将两者结合起来用于药用的相关报道却没有见到。本专利技术人出于寻求更有效地药物和更有利于患者的目的，将二者通过合成方式有机的结合起来，验证了本专利技术的设想。综上，用积雪草酸替代富马酸与替诺福韦酯联合成盐，可将富马酸替诺福韦改良成更具潜力的具有保肝保肾功能的抗HIV病毒和HBV病毒的药物。
技术实现思路
本专利技术提供一种积雪草酸替诺福韦二吡呋酯的化合物，即积雪草酸替诺福韦酯，其具体结构式如下所示：式(III)中X＝1-2，即X值可为1至2之间的任意值，其中本专利技术优选值为1。本专利技术的另一个目的是提供上述活性化合物积雪草酸替诺福韦二吡呋酯的制备方法，其具体制备方法如下：将积雪草酸和替诺福韦二吡呋酯以适当比例加热搅拌溶于适当溶剂后，升至一定温度反应，反应完毕后冷却至一定温度，搅拌析晶一定时间，过滤，并用适当溶剂洗涤滤饼，干燥即获得积雪草酸替诺福韦二吡呋酯。上述制备方法中所述的溶剂没有特殊限制，以能溶解积雪草酸和替诺福韦二吡呋酯，同时又能使积雪草酸替诺福韦酯析出为佳，本专利技术选用的溶剂包括异丙醇、丙酮、甲醇、DMSO等单一或者混合溶剂，出于经济与环保的考虑，本专利技术特别优选溶剂为异丙醇。上述制备方法中所述的适当投料比例，其特征在于积雪草酸：替诺福韦二吡呋酯为1-4:1，本专利技术特别优选的比例为1：1。本专利技术发现替诺福韦可以与积雪草酸反应生成稳定的盐，而且对替诺福韦的纯度要求不高，且收率高，产品稳定性好、纯度高。在制备工艺上也容易做到。为更好地说明本专利技术的制备工艺的可操作性和稳定性，利用实施例1的样品，按照吉利德公司的富马酸替诺福韦酯(商品名：Viread)的处方制备样品1的相应制剂，与市售的富马酸替诺福韦酯原料药、Viread进行稳定性实验比对，具体比对数据如下：样品0天10天30天60天实施例199.85％99.85％99.82％99.78％外购原料药99.90％99.88％99.82％99.75％实施例1制剂99.84％99.83％99.81％99.79％Viread99.87％99.84％99.80％99.75％由上表可以看出，积雪草酸替诺福韦二吡呋酯原料与其制备的制剂皆较富马酸替诺福韦二吡呋酯具有较好的稳定性。本专利技术的目的还在于提供上述活性化合物的功效和用途，其特征在于其既有抗HBV病毒能力，又有保肝保肾的保健功效。为了更好说明上述功效，本专利技术通过以下实验进行验证:1、通过HepG2.2.15细胞的HBsAg和HBeAg抑制率实验来检测积雪草酸替诺福韦酯的抗病毒能力。杜制可改良的尹格尔培养基(DMEM,GIBCO):胎牛血清(GIBCO)，G418(GIBO)0.38g/L，Hepcs(Sigma公司产品)2.38g/L，0.3％L-谷氨酰胺；，噻唑兰(MTT)(Sigma公司产品)用DMEM配成0.4g/L，二甲基亚砜(DMSO)(如臬市化学试剂厂)，HBeAg，HBsAg固相放射免疫试剂测定盒(北京北方生物技术研究所)，2.2.15细胞(引自军事医学科学院五所)。将长满HepG2.2.15细胞的培养瓶用0.06％胰蛋白酶-EDTA消化2-3min，弃消化液，加培养液轻轻吹打,将细胞配制成1×104/ml种于细胞培养板中,24孔板1ml/孔，于37℃，5％CO2培养48h，贴壁后用于实验。将积雪草酸、富马酸替诺福韦和积雪草酸替诺福韦酯分别用培养基配成1.25，5，20μg/mL、3种浓度,分别加于24孔板,1ml/孔,每种浓度3孔,另设正常对照,培养于37℃,5％CO2培养箱内，每4天收取培养液,并换加原浓度药液继续培养，将收集的培养液-20℃冻存，于第12天收集完培养液，即进行HBsAg和HBeAg放射免疫测定，将第4、8、12天收集的培养液同时测定,用γ计数器测定每孔药液cpm值。实验重复3次。计算公式:药物对抗原抑制百分率(％)＝细胞对照cpm-给药组cpm/细胞对照cpm-空白对照cpm×100％。表1积雪草酸替诺福韦酯对HepG2.2.15细胞HBsAg和HBeAg分泌抑制率的影响上述实验结果表明，积雪草酸基本无抗病毒活性，而所合成的积雪草酸替诺福韦酯HepG2.2.15细胞HBsAg和HBeAg的抑制率与富马本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种积雪草酸替诺福韦二吡呋酯的化合物结构如下：

【技术特征摘要】
1.一种积雪草酸替诺福韦二吡呋酯的化合物结构如下：2.根据权利要求1所述的化合物，其特征在于：X值可为1至2之间的任意值。3.根据权利要求1所述的化合物，其特征在于：X值为1。4.一种制备权利要求1-3的积雪草酸替诺福韦二吡呋酯的制备方法，其特征在于：具体步骤是将积雪草酸和替诺福韦二吡呋酯以适当比例加热搅拌溶于适当溶剂后，升至一定温度反应，反应完毕后冷却至一定温度，搅拌析晶一定时间，过滤，并用适当溶剂洗涤滤饼，干燥即获得积雪草酸替诺福韦二吡呋酯。5.根据权利要求4所述的一种积雪草酸替诺福韦二吡呋酯的制备方法，其特征在于：所述的适当溶剂为异丙醇、丙酮、甲醇、DMSO等单一或者混合溶剂。6.根据权利要求4所述的一种积雪草酸替诺福韦二吡呋酯的制备方法，其特征在于：所述的适当溶剂为异丙醇。7.根据权利要求4所述的一种积雪草酸替诺福韦二吡呋酯的制备方法，其特征在于：积雪草酸：替诺福韦二吡呋酯的比例为1-4:1。8.根...

【专利技术属性】
技术研发人员：黄志宁，姚建堤，陈仕魁，郑鲤峰，于舟，冯彬，胡晓菲，
申请(专利权)人：福建广生堂药业股份有限公司，
类型：发明
国别省市：福建,35