一株松色二胞菌BN‑h1以及生物菌降解剂及其制备方法和应用技术

本发明专利技术涉及一株松色二胞菌(Diplodia pinea)BN‑h1和含有松色二胞菌BN‑h1的生物菌降解剂及其制备方法及应用，其中松色二胞菌BN‑h1，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.13727，保藏日期为2017年3月7日。本发明专利技术的松色二胞菌BN‑h1可以降解最高浓度为1200mg/L的氨氮，同时使氨氮降解效率达到90％以上。

A pine color two Aeromonas BN H1 and biological degradation agent and preparation method and application thereof

The invention relates to a pine color two bacterium (Diplodia pinea BN H1 and) containing loose color two Aeromonas H1 BN biological degradation agent and its preparation method and application of the loose color two Aeromonas BN H1, preserved in general center Chinese microbial microbe preservation management committee, Paul Tibet number of CGMCC No.13727, the collection date is March 7, 2017. The invention of the loose color two strains of BN H1 can degrade the highest concentration of 1200mg/L ammonia, and the ammonia degradation efficiency can reach above 90%.

【技术实现步骤摘要】
一株松色二胞菌BN-h1以及生物菌降解剂及其制备方法和应用
本专利技术涉及真菌领域，特别涉及一株松色二胞菌以及生物菌降解剂及其制备方法和应用。
技术介绍
城市垃圾卫生填埋是目前我国城市垃圾集中处置的主要方式，垃圾填埋场在使用期直至报废以后都会产生大量的渗滤液。近年来，随着我国经济的快速发展，垃圾渗滤液产量越来越大，氨氮含量越来越高，已经成为学者们关注的环境问题之一。氨氮含量是污水水质的一项重要指标，是水相环境中氮的主要形态，也是造成水体富营养化的主要因素之一，高浓度的氨氮会使水中溶解氧下降，鱼类大量死亡，甚至会导致湖泊的干涸灭亡，对农业生产和水产养殖带来极大的损失，因此，如何有效地降解水体中氨氮的含量又不会造成二次污染成为人们研究的热点。其中利用微生物进行氨氮的降解是众多方法之中比较成熟的一种，这种方法利用了“硝化-反硝化”的原理，及亚硝化细菌和硝化细菌相互作用完成。传统理论认为，硝化反应与反硝化反应是两个不同的生物反应过程，硝化反应是指在微生物作用下将NH4+-N氧化为NO2--N(亚硝化作用)再进一步氧化为NO3--N(硝化作用)的过程，反硝化反应是NO3--N经微生物作用还原为N2的过程，硝化作用在好氧条件下进行，反硝化作用在厌氧下进行。污水处理技术一般采用物理处理法、化学处理法、生物化学或生物处理法，但自19世纪以来世界各国污水处理厂90％以上采用生物处理技术，因为使用微生物降解水体中过高的氨氮含量具有传统方法所不可比拟的优越性，其处理效率更高，并且不会产生二次污染，所需仪器简单易操作，该项技术有着非常大的发展潜力和应用前景。
技术实现思路
本专利技术的目的在于培养一种能够降解高氨氮的松色二胞菌，这种松色二胞菌可以降解高达1200mg/L浓度的氨氮，同时使氨氮降解效率达到90％以上。本专利技术的目的是通过以下技术方案实现的。根据本专利技术的一个方面，专利技术人经过筛选，选育出一株真菌。经过对比，该真菌的发育树，与已登记松色二胞菌(Diplodiapinea)的序列同源性最高，达到100％，因而可以确定其为一株松色二胞菌，命名为松色二胞菌(Diplodiapinea)BN-h1，目前已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC)。保藏单位地址为中国·北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，保藏编号为CGMCCNo.13727，保藏日期为2017年3月7日。该松色二胞菌为可降解污水和渗滤液中氨氮以及臭气中氨气的菌剂，能有效降解浓度为0～1200mg/L的氨氮，并且能在好氧条件下同时进行硝化和反硝化反应降解氨氮。根据本专利技术的第二方面，提供一种生物菌降解剂，其包含松色二胞菌BN-h1。根据本专利技术的第三方面，提供一种生物菌降解剂的制备方法，包括以下步骤：(1)将松色二胞菌BN-h1单菌落接种到种子培养基中培养，制成生物菌降解剂母液。(2)将母液加入到发酵培养基中发酵培养，制成生物菌降解剂。其中，种子培养基的组成为：红糖19.02g/L，柠檬酸钠8.17g/L，K2HPO414g/L，KH2PO46g/L，(NH4)2SO44.72g/L，MgSO4·7H2O0.2g/L，微量元素2mL/L，其余为水。发酵培养基的组成为：红糖19.02～57.06g/L，柠檬酸钠8.17～24.51g/L，K2HPO414g/L，KH2PO46g/L，(NH4)2SO44.72～14.16g/L，MgSO4·7H2O0.2g/L，微量元素2mL/L，其余为水。其中，步骤(1)包括：培养温度为25～35℃，培养基的初始pH值为6.5～8.5，转速为150～200rpm，发酵时间72小时。步骤(2)包括：发酵温度25℃～35℃，发酵培养基的初始pH值为6.5～8.5，转速150～200转/分钟，发酵培养36～60小时。其中，种子培养基和发酵培养基的C/N比均为9～11:1，在此比例下可达到高效率降解。其中，硫酸铵为培养基的唯一氮源，红糖和柠檬酸钠均为培养基的碳源，红糖和柠檬酸钠的添加比例为3～5:1时，氨氮降解效果最佳。红糖和柠檬酸钠的结合在提供碳源的基础上，对培养基的酸碱度还起一个调节作用，使得富集培养基、分离培养基、种子培养基和发酵培养基的pH值均为7.0～8.0。其中，制备方法还包括位于步骤(1)之前的松色二胞菌BN-h1的分离纯化步骤，步骤中：富集培养基的组成为：红糖19.02～29.68g/L，K2HPO414g/L，KH2PO46g/L，(NH4)2SO44.72～6g/L，MgSO4·7H2O0.2g/L，微量元素2mL/L，其余为水。分离培养基的组成为：红糖19.02～29.68g/L，K2HPO414g/L，KH2PO46g/L，(NH4)2SO44.72～6g/L，MgSO4·7H2O0.2g/L，微量元素2mL/L，琼脂20g/L，其余为水。其中，微量元素的组成为：EDTA·2Na5～57.1g/L，ZnSO4·7H2O3.9g/L，CaCl2·2H2O7g，MnCl2·4H2O5.1g/L，FeSO4·7H2O5g/L，(NH4)6Mo7O24·4H2O1.1g/L，CuSO4·5H2O1.6g/L，CoCl2·6H2O1.6g/L，其余为水。根据本专利技术的第四方面，提供松色二胞菌BN-h1或生物菌降解剂在治理污水、渗滤液和臭气污染中的应用。本专利技术的有益效果在于：松色二胞菌BN-h1在降解氨氮的过程中，没有亚硝态氮和硝态氮积累，可以同步进行硝化与反硝化，氨氮的降解速率高，最高达到90％以上。附图说明通过阅读下文优选实施方式的详细描述，各种其他的优点和益处对于本领域普通技术人员将变得清楚明了。附图仅用于示出优选实施方式的目的，而并不认为是对本专利技术的限制。而且在整个附图中，用相同的参考符号表示相同的部件。在附图中：图1示出了根据本专利技术实施方式的一株松色二胞菌BN-h1的培养形态特征图片；图2示出了根据本专利技术实施方式的一株松色二胞菌BN-h1的发育树图片。具体实施方式下面将参照附图更详细地描述本公开的示例性实施方式。虽然附图中显示了本公开的示例性实施方式，然而应当理解，可以以各种形式实现本公开而不应被这里阐述的实施方式所限制。相反，提供这些实施方式是为了能够更透彻地理解本公开，并且能够将本公开的范围完整的传达给本领域的技术人员。本专利技术经筛选得到一株降解污水及渗滤液中高浓度氨氮以及臭气中高含量氨气的松色二胞菌(Diplodiapinea)BN-h1，其氨氮降解能力达到90％以上，该菌株以及包含该菌株的生物菌降解剂对受污染的高氨氮含量的污水和渗滤液和臭气的治理能力较好，能有效解决污水和渗滤液的恶臭以及臭气污染，为环境治理做出贡献。本专利技术的松色二胞菌BN-h1菌株具有以下主要特征：一、松色二胞菌BN-h1菌株的培养形态特征如图1所示，该松色二胞菌(Diplodiapinea)BN-h1具有下述形态特征：乳白色偏黄，在平板上生长速度较快，凸起生长，边缘整齐，菌体湿润光滑，正反颜色相同，较易挑出，在液体培养基中生长较快，培养基混浊。二、松色二胞菌BN-h1的发育树用MEGA5.0做其发育树，发现BN-h1的基因序列与已登记松色二胞菌(Diplodiapinea)的序列同源性可达100％，因此本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种松色二胞菌(Diplodia pinea)BN‑h1，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.13727，保藏日期为2017年3月7日。

【技术特征摘要】
1.一种松色二胞菌(Diplodiapinea)BN-h1，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCCNo.13727，保藏日期为2017年3月7日。2.一种生物菌降解剂，其包含如权利要求1所述的松色二胞菌BN-h1。3.一种如权利要求2所述的生物菌降解剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)将松色二胞菌BN-h1单菌落接种到种子培养基中培养，制成生物菌降解剂母液；(2)将母液加入到发酵培养基中发酵培养，制成生物菌降解剂。4.如权利要求3所述的生物菌降解剂的制备方法，其特征在于，种子培养基的组成为：红糖19.02g/L，柠檬酸钠8.17g/L，K2HPO414g/L，KH2PO46g/L，(NH4)2SO44.72g/L，MgSO4·7H2O0.2g/L，微量元素2mL/L，其余为水；发酵培养基的组成为：红糖19.02～57.06g/L，柠檬酸钠8.17～24.51g/L，K2HPO414g/L，KH2PO46g/L，(NH4)2SO44.72～14.16g/L，MgSO4·7H2O0.2g/L，微量元素2mL/L，其余为水。5.如权利要求3所述的生物菌降解剂的制备方法，其特征在于，步骤(1)包括：培养温度为25～35℃，培养基的初始pH值为6.5～8.5，转速为150～200rpm，发酵时间72小时；步骤(2)包括：发酵温度25℃～35℃，发酵培养基的初始pH值为6.5～8.5，转速150～200转/分钟，发酵培养36～60小时。6.如...

【专利技术属性】
技术研发人员：靳永胜，秦文，郝芳华，靳静晨，王若岩，蒋煦，付裕，杨依林，苑仁绅，
申请(专利权)人：北京环氧环保科技发展有限公司，北京农学院，
类型：发明
国别省市：北京,11