The invention discloses a scanning electron microscope sample processing method for a sensory appendage of a termite head. Will be placed in a special wind termite washing device, vacuum pumping device into a special auxiliary air after washing, vacuum operation to termite sink, previously attached to the anatomy, and has a stereoscopic vision and ultrasonic cleaning instrument before rinsing, then after fixation and after rinsing and stepwise gradient dehydration, and then placed in special thimbles and closed in the critical point drying box critical point drying, Taiwan stick in the stereoscope, part of the sample under the objectives of the organization, further analysis of two kind of stick, and will not use conductive silver glue two stick samples samples of non target observation area and stick like tape are connected to silver glue drying after full range spraying treatment. The present invention solves many problems of pollution and difficult to sample surface subsidence, shrinkage in the fixative sample and tissue samples of different parts of occlusion, were observed in the electron microscope in the sample charge and discharge technology mentioned in the background, to solve the problem of low cost, and has great application value.
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及了一种生物样品处理方法,尤其是涉及一种白蚁头部感觉附肢的扫描电镜样品处理方法。
技术介绍
白蚁是世界五大害虫之一,可对房屋建筑、绿化及经济林木、水库堤坝、农林作物、名胜古迹、地下电缆、船舶桥梁、文物档案、家具衣服等造成破坏,不仅造成严重的经济损失,还给人们的生命安全带来严重威胁。目前全世界已知白蚁近3000种,我国已知白蚁近500种,近几十年来,随着全球气候不断变暖,我国白蚁危害也日趋严重,每年因白蚁危害造成的经济损失重大。白蚁的头部着生有触角、下颚须、下唇须等重要的感觉附肢,在白蚁感受外界各种机械及化学信息、觅食、取食等行为过程中起着重要作用,然而目前对于白蚁感觉器官的研究较少,相关方法也尚需进一步完善。虽然扫描电镜的样品处理技术已比较成熟,但在利用扫描电镜技术对我国几种主要危害白蚁的触角及口器进行研究过程中,我们仍然遇到了许多技术问题。首先,是样品表面污染的问题:(1)白蚁一般营土栖或木栖的穴居生活,生活环境相对密闭,在将其从木材或泥土取出过程中,白蚁身体表面都可能存有污秽;(2)按照传统的昆虫样品扫描电镜技术处理路线,一般活体昆虫在被杀死或麻痹后需立即在固定液中解剖下所需部位,而后投入醛类固定剂中进行固定,而刚刚死亡或处于麻痹状态的白蚁,在被解剖下头部及相关感觉附肢后,体内溢出物都非常多,很容易污染样品表面,从而极大地影响实验结果和数据统计。其次,是样品在固定液中难以下沉的问题:无论是白蚁整体还是其局部解剖组织,在将其放入醛类固定剂中进行前固定时,总是漂浮在固定剂液面之上,即使对其进行抽真空操作,也很难下沉,而且在对样品进行抽真空操作 ...
【技术保护点】
一种白蚁头部感觉附肢的扫描电镜样品处理方法,其特征在于方法包括以下步骤:1)将白蚁放置于两面通风的特制风洗装置(1)中,用冷风源向特制风洗装置(1)吹风进行风洗以除去白蚁体表的浮沉和污秽;2)将经风洗的白蚁投入盛有醛类固定液的特制辅助抽真空装置(2)中,进行抽真空操作,使得白蚁下沉到电镜样品处理前固定液中;3)将已沉入前固定液中的白蚁置于4℃进行充分前固定,前固定结束后取出虫体在冰上进行解剖,然后将解剖后获得的目的组织放入0-4℃缓冲液中在体视镜视野中进行漂洗,漂洗至在体视镜视野下观察不到白蚁样品表面存有体内溢出物质;4)将漂洗后的样本放入0-4℃的缓冲液中,用超声清洗仪进行脱气清洗,期间更换新的缓冲液重复多次,直到将白蚁样品表面清洗干净;5)将白蚁样品进行后固定,再经后漂洗及逐级脱水处理后放入特制滤纸筒(3)中并封闭特制滤纸筒(3),再将特制滤纸筒(3)放入临界点干燥框中并与临界点干燥框内壁牢固紧贴,进行临界点干燥;6)放样前,滤纸筒(3)和临界点干燥框下部先用纯脱水剂浸润;7)在体视镜下对充分干燥后的白蚁样品进行贴台粘样,用解剖镊和解剖针解剖下样品的目标组织二次粘样;8)用精细解剖 ...
【技术特征摘要】
1.一种白蚁头部感觉附肢的扫描电镜样品处理方法,其特征在于方法包括以下步骤:1)将白蚁放置于两面通风的特制风洗装置(1)中,用冷风源向特制风洗装置(1)吹风进行风洗以除去白蚁体表的浮沉和污秽;2)将经风洗的白蚁投入盛有醛类固定液的特制辅助抽真空装置(2)中,进行抽真空操作,使得白蚁下沉到电镜样品处理前固定液中;3)将已沉入前固定液中的白蚁置于4℃进行充分前固定,前固定结束后取出虫体在冰上进行解剖,然后将解剖后获得的目的组织放入0-4℃缓冲液中在体视镜视野中进行漂洗,漂洗至在体视镜视野下观察不到白蚁样品表面存有体内溢出物质;4)将漂洗后的样本放入0-4℃的缓冲液中,用超声清洗仪进行脱气清洗,期间更换新的缓冲液重复多次,直到将白蚁样品表面清洗干净;5)将白蚁样品进行后固定,再经后漂洗及逐级脱水处理后放入特制滤纸筒(3)中并封闭特制滤纸筒(3),再将特制滤纸筒(3)放入临界点干燥框中并与临界点干燥框内壁牢固紧贴,进行临界点干燥;6)放样前,滤纸筒(3)和临界点干燥框下部先用纯脱水剂浸润;7)在体视镜下对充分干燥后的白蚁样品进行贴台粘样,用解剖镊和解剖针解剖下样品的目标组织二次粘样;8)用精细解剖针蘸取导电银胶将非二次粘样样品的非目标观察区域与粘样胶带进行连接;9)待银胶干燥后,对白蚁样品及样品台进行偶数次对称喷金处理。2.根据权利要求1所述的一种白蚁头部感觉附肢的扫描电镜样品处理方法,其特征在于:所述步骤3)中的充分前固定的时间为24h-7d。3.根据权利要求1所述的一种白蚁头部感觉附肢的扫描电镜样品处理方法,其特征在于:所述步骤7)和8)中的精细解剖针为据实验所需选用不同型号昆虫针用不同目数砂纸磨制而成。4.根据权利要求1所述的一种白蚁头部感觉附肢的扫描电镜样品处理方法,其特征在于:所述步骤9)喷金处理具体...
【专利技术属性】
技术研发人员:付丙鲜,张大羽,戎念杭,
申请(专利权)人:浙江农林大学,
类型:发明
国别省市:浙江;33
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