Obtain the invention discloses a method used in molecular marker detection of hybrid rapeseed purity of DNA and the method of the invention germination through the hybrid rapeseed deep plate in the successful implementation of the seed germination process of seamless and DNA extraction, it can not only improve the efficiency of access to DNA, but also saves manpower and material resources the cost of the experiment, compression. At the same time on the basis of this, the present invention further simplify the alkaline lysis step DNA, and with a high flux grinder Fast& use Fluid Management sample mixing apparatus, the million copies of DNA samples extracted from ideas completed within 10 hours. This invention is a set of intensive program fast batch low cost to obtain cotyledon DNA samples, the efficiency through the application of the invention can greatly improve the gain applied to molecular marker identification of hybrid rapeseed purity DNA.
【技术实现步骤摘要】
应用于分子标记检测油菜杂交种纯度的DNA批量获取方法
本专利技术涉及植物生物
,具体地指一种应用于分子标记检测油菜杂交种纯度的DNA批量获取方法。
技术介绍
油菜是典型的异花授粉作物,杂种优势强,目前我国大部分油菜种植区所种植的油菜品种多为杂交种。油菜杂交品种在出售前,都要进行严格的纯度鉴定。随着生物技术的不断发展,分子标记检测手段越来越多的被使用到油菜杂交种纯度鉴定中来。由于油菜种子较小,而纯度鉴定需要单粒确定基因型杂合度,因此油菜杂交种纯度鉴定需要的样品数量相对较大。由于目前尚无法实现低成本批量获取油菜单粒干种子DNA,因此分子标记检测油菜杂交种纯度一般分两个步骤,第一步种子发芽,获取单粒种子子叶样本第二步子叶DNA提取检测。虽然目前提取DNA的方法有多种,但都无法避免人工单个子叶取样,并分装至离心管的环节。由于此环节主要由人工手动完成,所以大大降低了DNA获取的效率,无法快速、批量和低成本的获取DNA。本专利技术通过油菜种子深孔板内发芽的方法,成功实现种子发芽与DNA提取过程的无缝对接,不但显著提高了获取DNA的效率,同时也节约了人力和物力,压缩了实验成本。同时在此基础之上,本专利技术进一步简化现有碱裂解法提取DNA步骤,且配合Fast&FluidManagement样品混匀仪的使用,成功实现了万份DNA样品提取10小时内完成。该专利技术是快速批量低成本获取油菜子叶DNA样品的一整套集约化方案,通过本专利技术的应用可以大大提高获取用于分子标记鉴定油菜杂交种纯度的DNA的效率。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种应用于分子标记检测油菜杂 ...
【技术保护点】
一种应用于分子标记检测油菜杂交种纯度的DNA批量获取方法,其特征在于:包括以下步骤:1)首先配置琼脂糖凝胶并冷却,得到粘稠液态状的琼脂糖凝胶,然后向深孔板的每个小孔内加入粘稠液态状的琼脂糖凝胶;2)将待检测的油菜杂交种样品直接播种于含有琼脂糖凝胶的小孔中,并将深孔板置于培养箱中培养4~7天;3)待孔内油菜子叶展开时,每孔加入钢珠一颗,并随后向每孔中加入NaOH溶液;4)将深孔板水浴中加热,水浴完成后在其上加盖乳胶封口膜,对油菜杂交种子叶进行研磨;5)将研磨好的深孔板取出,打开封口膜,每孔内加入Tris‑HCl溶液,离心取上清即为样品DNA。
【技术特征摘要】
1.一种应用于分子标记检测油菜杂交种纯度的DNA批量获取方法,其特征在于:包括以下步骤:1)首先配置琼脂糖凝胶并冷却,得到粘稠液态状的琼脂糖凝胶,然后向深孔板的每个小孔内加入粘稠液态状的琼脂糖凝胶;2)将待检测的油菜杂交种样品直接播种于含有琼脂糖凝胶的小孔中,并将深孔板置于培养箱中培养4~7天;3)待孔内油菜子叶展开时,每孔加入钢珠一颗,并随后向每孔中加入NaOH溶液;4)将深孔板水浴中加热,水浴完成后在其上加盖乳胶封口膜,对油菜杂交种子叶进行研磨;5)将研磨好的深孔板取出,打开封口膜,每孔内加入Tris-HCl溶液,离心取上清即为样品DNA。2.根据权利要求1所述应用于分子标记检测油菜杂交种纯度的DNA批量获取方法,其特征在于:所述步骤1)中,琼脂糖凝胶浓度为1~2g/L。3.根据权利要求2所述应用于分子标记检测油菜杂交种纯度的DNA批量获取方法,其特征在于:所述步骤1)中,每孔中琼脂糖凝胶添加量为0.1~0.2ml。4.根据权利要求2或3所述应用于分子标记检测油菜杂交种纯度的DNA批量获取方法,其特征在于:所述步骤2...
【专利技术属性】
技术研发人员:俎峰,李霞,罗延青,赵凯琴,王敬乔,陈苇,符明联,李根泽,
申请(专利权)人:云南省农业科学院经济作物研究所,
类型:发明
国别省市:云南,53
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