细胞内荧光响应标记DNA的光点击探针及其制备方法与应用技术

本发明专利技术公开了一种细胞内荧光响应标记DNA的光点击探针及其制备方法与应用。所述的具有荧光响应的DNA光点击探针，为香豆素四唑化合物W1和W2中的至少一种；所述的W1和W2的结构式如式I和式II所示；本发明专利技术中的探针具有细胞核靶向性，反应基团体积小不干扰核酸代谢过程，并且本反应过程中具有有荧光响应，光诱导实时可控、反应速度快，特异性强、副产物少、反应条件简单温和及操作简单等优点；所述的具有荧光响应的DNA光点击探针可以应用于活细胞核酸标记领域。

Light selective probe for intracellular fluorescent response marker DNA, preparation method and application thereof

The invention discloses an intracellular light response marker DNA light click probe, a preparation method and an application thereof. The DNA light hits fluorescence response, for at least one coumarin four azole compounds W1 and W2; the structure of W1 and W2 such as type I and type II shows; probe of the invention has nuclear targeting, reactive groups small size does not interfere with nucleic acid metabolism and, the reaction process is a light induced fluorescence response, real-time control, fast reaction speed, specificity, less by-products, simple and mild reaction conditions and simple operation; the DNA light hits the probe fluorescence response can be applied to live cells labeled nucleic acid field.

【技术实现步骤摘要】
细胞内荧光响应标记DNA的光点击探针及其制备方法与应用
本专利技术属于核酸标记领域，特别涉及一种细胞内荧光响应标记DNA的光点击探针及其制备方法与应用。
技术介绍
在生命科学研究领域，具有荧光响应的核酸标记技术在研究核酸分子结构以及其在细胞内的合成过程具有非常重要的价值和意义。尤其是利用生物正交反应触发的荧光响应标记方法经成为一种生物分子标记的重要工具，这种标记方法可以在温和的条件下选择性标记和追踪生物分子，并进行灵敏的可视化荧光成像。最初的标记方法有荧光响应的合成后标记，模板介导的连接和DNA或RNA的代谢标记，这些方法是基于一价铜离子催化的叠氮和炔烃的环化加成反应[Gierlich,J.；Burley,G.A.；Gramlich,P.M.；Hammond,D.M.；Carell,T.Org.Lett.2006,8,3639–3642]。为了打破铜离子催化的高毒性[Kennedy,D.C.；McKay,C.S.；Legault,M.C.B.；Danielson,D.C.；Blake,J.A.；Pegoraro,A.F.；Stolow,A.；Mester,Z.；Pezacki,J.P本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种细胞内荧光响应标记DNA的光点击探针，其特征在于：为香豆素四唑化合物W1和W2中的至少一种；所述的W1和W2的结构式如式I和式II所示：

【技术特征摘要】
1.一种细胞内荧光响应标记DNA的光点击探针，其特征在于：为香豆素四唑化合物W1和W2中的至少一种；所述的W1和W2的结构式如式I和式II所示：其中，R为C1-C2烷基、烷基衍生物取代基，含酯基衍生物取代基或芳香烃衍生物取代基。2.根据权利要求1所述的细胞内荧光响应标记DNA的光点击探针，其特征在于：所述的C1-C2烷基、烷基衍生物取代基为甲基、乙基或三氟甲基；所述的含酯基衍生物取代基为乙酸乙酯取代基；所述的芳香烃衍生物取代基为苯甲基、对三氟甲基苯甲基、对甲氧基苯甲基或2,5-二甲氧基苯甲基。3.权利要求1或2所述的细胞内荧光响应标记DNA的光点击探针的制备方法，其特征在于包括如下步骤：(1)将香豆素衍生物加入乙醇水溶液中，接着加入浓盐酸，然后在5℃条件下加入NaNO2水溶液，再在-15℃的条件下滴加到4-甲基((2-(苯磺酰)亚肼基)甲基)苯甲酸盐的吡啶中，恢复室温进行反应，萃取、减压蒸馏、得到W1；(2)将步骤(1)中得到的W1和氢氧化锂在四氢呋喃、甲醇和水的混溶液中加热搅拌反应，反应终止后再调节溶液的pH值至出现紫色沉淀，得到中间体A；(3)将步骤(2)中得到的中间体A、NHS和EDC在DMF中搅拌反应，反应终止后再加入饱和食盐水析出沉淀，得到四唑化合物B；(4)将步骤(3)中得到的四唑化合物B加入到含有三乙胺的DCM和DMSO溶液中，然后加入牛磺酸水溶液搅拌反应，减压蒸馏，加甲醇稀释沉淀过滤后，调pH值至中性，再加入乙醚、过滤、取沉淀，得到W2，即为细胞内荧光响应标记DNA的光点击探针。4.根据权利要求3所述的细胞内荧光响应标记DNA的光点击探针的制备方法，其特征在于：步骤(1)中所述的香豆素衍生物和4-甲基((2-(苯磺酰)亚肼基)甲基)苯甲酸盐按摩尔比为10:9配比计算；步骤(2)中所述的香豆素四唑化合物和氢氧化锂按摩尔比为1:20配比计算；步骤(3)中所述的中间体A、NHS和EDC按摩尔比为1:2:2配比计算；步骤(4)所述的四唑化合物B、三乙胺和牛磺酸按摩尔比为1:2：2配比计算。5.根据权利要求3所述的细胞内荧光响应标记DNA的光点击探针的制备方法，其特征在于：步骤(1)中所述的乙醇水溶液为乙醇和水按体积比1:1配比得到；步骤(1)中所述的...

【专利技术属性】
技术研发人员：张涛，邢达，吴云霞，
申请(专利权)人：华南师范大学，
类型：发明
国别省市：广东,44