球形棕囊藻的培养方法技术

球形棕囊藻的培养方法，涉及赤潮藻。将培养到对数期的有菌球形棕囊藻藻液接入无菌f/2培养基中，在含f/2的三角瓶中接入藻种培养；将藻液全部接入含无菌f/2培养基的三角瓶中培养到对数期；将藻液全部接入含处理后海水的已消毒养藻缸中，加入营养盐：10mL溶液1，5mL溶液2，1mL溶液3；光照周期12h/12h，通气量为9L/min条件下培养，早晚各监测荧光值，荧光强度100对应细胞个数1000个/μL；生长一天后，向养藻缸中添加处理后海水6L，与等量的营养盐。早晚各监测一次波长440/680nm处的荧光值；每天向养藻缸中添加20mL溶液1；早晚各监测荧光值，直到长至细胞浓度。

Method for culturing spherical brown algae

A method for culturing spherical brown algae relates to red tide algae. Medium to log phase bacteria phaeocystisglobosa algae liquid aseptic access f/2 culture medium and cultured in flask containing f/2 access algae algae liquid; flask will all access f/2 medium containing sterile culture to logarithmic phase; the algae liquid containing water treatment after all access has been sterilized keep algae the tank, adding nutrients: 1 10mL solution, 2 5mL solution, 3 1mL solution; photoperiod 12h/12h, aeration of 9L/min under the condition of cultivation, sooner or later the monitoring of fluorescence, fluorescence intensity of 100 corresponding cell number 1000 / L growth; a day later, add 6L to keep algae treated water cylinder in equal amounts of nutrients and. In the morning and evening, the fluorescence value of 440/680nm at the first wavelength is monitored. 20mL solution 1 is added to the algal tank every day, and the fluorescence value is monitored until the cell concentration in the morning and evening.

【技术实现步骤摘要】
球形棕囊藻的培养方法
本专利技术涉及赤潮藻——球形棕囊藻，尤其是涉及其在20L大体积环境中稳定培养的球形棕囊藻的培养方法。
技术介绍
赤潮(redtide)又称有害藻华，是指在某一海域内,海洋中的浮游微藻、原生动物或细菌等在适宜的环境条件下大量繁殖或聚集，引起水质变坏、海水变色的海洋生态异常现象[1]。赤潮作为一种全球性的水污染，它不仅给海洋环境、海洋渔业和海水养殖造成严重危害，给世界经济带来了无法估量的损失，而且威胁人类的生存[2]。我们只有在充分了解赤潮的成因、赤潮对人类的危害、赤潮对世界经济的影响等诸多方面以后，才能更好防止赤潮的发生[2]。1.赤潮成因赤潮爆发是一种具有长远历史的生态现象，但近些年随着我国工业的发展，这种现象发生开始变得更加频繁。沿海的工业、农业、水产养殖及生活污水的过度排放，大量的废水污水随径流汇集到江河湖海中，促使近海海水水体氮、磷等大量营养盐类激增，造成了近海海水水体的富营养化和海域水体的环境污染；当营养盐达到一定浓度，加上20～30℃的适宜海水温度及不同的光照强度，就会使得不同赤潮生物不断增长和繁殖；此外，海水盐度为27‰～30‰，也是引发赤潮的重要条件；海区地理位置、地理特征也是爆发赤潮的影响因素，如浅海区内弯都是赤潮多发的海域[3]。并非满足了以上条件就一定能形成赤潮，适宜在该环境下生长的藻类也是必不可少的，能够引起赤潮的藻类种类繁多。有260种海洋浮游生物能生成赤潮,不同海区不同环境条件下,赤潮爆发时的优势藻、规模数量各不相同[4]。2.球形棕囊藻及其培养GlennF.Cota[5]等在文献中描述到球形棕囊藻是一种不同寻常的浮游植物，它能引发的大规模赤潮，它复杂的生活史，和它特别的理化性质都注定了其不同寻常。该种浮游植物能在非常广的温度和盐度范围生长，从赤道到极地都有其身影。黄思明[6]等描述到球形棕囊藻赤潮是我国东南沿海典型的高发赤潮藻种之一，球形棕囊藻在赤潮爆发过程中会产生大量的胶质、糖和溶血毒素，同时消耗大量溶解氧，造成水产品的大量死亡；而且其释放的二甲基丙磺酸(DMSP)和二甲基硫醚(DMS)对海洋生态环境产生较大的影响。由此可见，对球形棕囊藻的防治是很有必要的。沈萍萍[7]等的研究表明，球形棕囊藻具有一个比较复杂的异型生活史,介于两种不同的细胞形态之间:群体和单细胞。单细胞又有几种不同的形式:具有鞭毛的细胞,不动细胞,小游动细胞等。在实验室三角瓶中培养时，球形棕囊藻的生长周期很长，一般大于30天。王艳[8]等的研究表明磷是球形棕囊藻生长的首要影响因子，硝酸盐也是影响球形棕囊藻生长速率的重要影响因子，氮磷比例同样影响球形棕囊藻的生长；此外，不同株系的球形棕囊藻对硝酸盐的需求有很大差别。Fe、微量元素以及维生素对球形棕囊藻的生长影响不明显，但在某些条件下Fe不足会限制藻的光和作用，维生素等能影响藻的生物量。故在球形棕囊藻培养中，氮磷等大量元素的添加量直接影响藻的生长情况。传统方法仅适用于无菌、小体积环境下培养藻种，在20L大体积有菌环境中培养很困难。逐级放大培养球形棕囊藻，获得大体积高密度藻液，有利于我们后期模拟赤潮爆发过程，揭示其发生机制，为研发球形棕囊藻的调控技术提供了重要的技术支持。参考文献：[1]汪艳涛,高强,姜少慧.赤潮灾害监测预报与减灾对策研究进展[J].中国渔业经济,2013(04):161-167.[2]秦志高.海洋中的赤潮现象及其防治对策[J].南通航运职业技术学院学报,2005(03):46-48.[3]侯静,胡成丽.浅谈近年我国赤潮的发生概况及防治措施[J].现代交际,2014(06):98.[4]苟钊训,任春艳.赤潮的成因及其预报初探[J].聊城大学学报(自然科学版),2003(04):82-85.[5]Cota,G.F.,Smith,W.O.,Mitchell,B.G.PhotosynthesisofphaeocystisintheGreenlandSea[J].LimnologyandOceanography,1994,39(4):948-953.[6]黄思明,尹平河,玲,赵.一株芽孢杆菌对球形棕囊藻的溶藻效果[J].暨南大学学报(自然科学与医学版),2013,23(3):337-342.[7]沈萍萍,吕颂辉.球形棕囊藻的生长特性及生活史研究[J].水生生物学报,2000,24(6):635-643.[8]王艳,齐雨藻,李韶山.球形棕囊藻生长的营养需求研究[J].水生生物学报,2007,31(1):24-29.
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供球形棕囊藻的培养方法。本专利技术包括以下步骤：1)将培养到对数期的有菌球形棕囊藻藻液接入新鲜无菌f/2培养基中，在含f/2的三角瓶中接入藻种，培养；2)将步骤1)中的600mL藻液全部接入含4L无菌f/2培养基的5L三角瓶中培养到对数期；3)将步骤2)中的4.6L藻液全部接入含10L处理后海水的已消毒养藻缸中，向其中加入营养盐：10mL溶液1，5mL溶液2，1mL溶液3；在温度20℃，光照2000～3000Lux，光照周期12h/12h，通气量为9L/min条件下培养，早晚各监测一次波长为440/680nm处的荧光值，荧光强度100对应细胞个数1000个/μL；4)生长一天后，向步骤3)养藻缸中添加处理后海水6L，以及与步骤3)等量的营养盐，早晚各监测一次波长440/680nm处的荧光值；5)每天向养藻缸中添加20mL溶液1；早晚各监测一次波长440/680nm处藻液的荧光值，直到长至所需细胞浓度。在步骤1)中，所述对数期可为10天，所述在含f/2的三角瓶可在含400mLf/2的1L三角瓶中接入200mL藻种；所述培养的条件可在温度20℃，光照强度1400～1500Lux，光照周期12h/12h条件下培养10天。在步骤2)中，所述培养的条件可在温度20℃，光照4000Lux，光照周期12h/12h下培养到对数期10天。在步骤3)中，所述处理后海水的获得方法可为：将实验室pH为7.9～8.1、盐度为25％～30‰的陈海水用2μm膜过滤，每50L海水添加3mL的8％NaClO液体处理过夜，添加1.2gNa2S2O3解氯2h，获得处理后海水。所述消毒养藻缸的获得方法可为：(1)将藻缸清洗干净后，用0.8％NaClO对藻缸进行多次喷雾，等待1天，得养藻缸；(2)将步骤(1)所述养藻缸用自来水清洗后，再次进行喷雾0.8％NaClO处理；(3)在接藻前，用清水冲洗步骤(2)所述养藻缸内部，再喷雾75％乙醇消毒，待缸晾干后，用75％乙醇消毒后的塑料膜覆盖养藻缸。在步骤4)中，所述营养盐溶液的制备方法可为：(1)溶液1：称取NaNO3150g，NaH2PO410g，定容至1L蒸馏水中，标准添加量为10mL/20L；(2)溶液2：称取Na2EDTA·2H2O8.72g，Cl3·6H2O6.3g，uSO4·5H2O0.02g，ZnSO4·7H2O0.04g，CoCl2·6H2O0.02g，Cl2·4H2O0.36g，NaMoO4·2H2O0.012g，定容至500mL蒸馏水中，标准添加量为5mL/20L；(3)溶液3：称取VB10.2g，VB7(生物素)1mg，VB121mg，定容至100mL蒸馏水中，标准本文档来自技高网...

【技术保护点】
球形棕囊藻的培养方法，其特征在于包括以下步骤：1)将培养到对数期的有菌球形棕囊藻藻液接入新鲜无菌f/2培养基中，在含f/2的三角瓶中接入藻种，培养；2)将步骤1)中的600mL藻液全部接入含4L无菌f/2培养基的5L三角瓶中培养到对数期；3)将步骤2)中的4.6L藻液全部接入含10L处理后海水的已消毒养藻缸中，向其中加入营养盐：10mL溶液1，5mL溶液2，1mL溶液3；在温度20℃，光照2000～3000Lux，光照周期12h/12h，通气量为9L/min条件下培养，早晚各监测一次波长为440/680nm处的荧光值，荧光强度100对应细胞个数1000个/μL；4)生长一天后，向步骤3)养藻缸中添加处理后海水6L，以及与步骤3)等量的营养盐，早晚各监测一次波长440/680nm处的荧光值；5)每天向养藻缸中添加20mL溶液1；早晚各监测一次波长440/680nm处藻液的荧光值，直到长至所需细胞浓度。

【技术特征摘要】
1.球形棕囊藻的培养方法，其特征在于包括以下步骤：1)将培养到对数期的有菌球形棕囊藻藻液接入新鲜无菌f/2培养基中，在含f/2的三角瓶中接入藻种，培养；2)将步骤1)中的600mL藻液全部接入含4L无菌f/2培养基的5L三角瓶中培养到对数期；3)将步骤2)中的4.6L藻液全部接入含10L处理后海水的已消毒养藻缸中，向其中加入营养盐：10mL溶液1，5mL溶液2，1mL溶液3；在温度20℃，光照2000～3000Lux，光照周期12h/12h，通气量为9L/min条件下培养，早晚各监测一次波长为440/680nm处的荧光值，荧光强度100对应细胞个数1000个/μL；4)生长一天后，向步骤3)养藻缸中添加处理后海水6L，以及与步骤3)等量的营养盐，早晚各监测一次波长440/680nm处的荧光值；5)每天向养藻缸中添加20mL溶液1；早晚各监测一次波长440/680nm处藻液的荧光值，直到长至所需细胞浓度。2.如权利要求1所述球形棕囊藻的培养方法，其特征在于在步骤1)中，所述对数期为10天。3.如权利要求1所述球形棕囊藻的培养方法，其特征在于在步骤1)中，所述在含f/2的三角瓶是在含400mLf/2的1L三角瓶中接入200mL藻种。4.如权利要求1所述球形棕囊藻的培养方法，其特征在于在步骤1)中，所述培养的条件在温度20℃，光照强度1400～1500Lux，光照周期12h/12h条件下培养10天。5.如权利要求1所述球形棕囊藻的培养方法，其特征在于在步骤2)中，所述培养的条件是在温度20℃，光照400...

【专利技术属性】
技术研发人员：郑天凌，陈瑶，郑伟，
申请(专利权)人：厦门大学，
类型：发明
国别省市：福建,35