一种龙胆草多糖的脱色方法技术

本发明专利技术公开了一种龙胆草多糖的脱色方法，其工艺流程为：龙胆草粉碎→过筛→石油醚脱脂→80℃水浴提取→浓缩提取液→醇沉24h→过滤→乙醇﹑丙酮洗涤→干燥→称重→龙胆粗多糖→溶解→上样→收集流出液→浓缩→冷冻干燥→脱色后的多糖。最佳工艺条件为；上样量为5BV,上样流速为3BV/h,上样浓度为5 mg/mL。在此优化条件下进行验证试验，龙胆草多糖的脱色率为80.40%，多糖保留率为80.60%。本脱色方法条件温和，能有效除去粗多糖中的色素，且树脂还可以重复利用，在使用5次后，对龙胆草粗多糖的脱色效果还是较好，所以该柱层析脱色法便于实现工业化生产。

Method for decoloring gentian polysaccharide

The invention discloses a method for decoloring gentian polysaccharide, its process is: gentian crushing, sifting, petroleum ether degreasing, 80 DEG C water bath extraction, concentrated extract, alcohol, ethanol, acetone and 24h filtering, washing, drying, weighing and gentian polysaccharide, dissolving, sample, collect the outflow of polysaccharide liquid, concentrating, freeze drying and after bleaching. The optimum conditions for; the sample was 5BV, the sample flow rate was 3BV/h, the concentration of sample was 5 mg/mL. Under the optimized condition, the decolorization rate of the polysaccharide was 80.40%, and the polysaccharide retention rate was 80.60%. The decolorization method is mild, can effectively remove the crude polysaccharide in the pigment, and the resin can be repeatedly used, in the use of 5 times, the decolorization effect of gentian polysaccharide is better, so the column decoloration method convenient to industrialized production.

【技术实现步骤摘要】
一种龙胆草多糖的脱色方法
本专利技术涉及中药化学领域，特别是涉及龙胆多糖的提取和采用D941阴离子交换树脂对龙胆草多糖溶液的一种脱色方法。
技术介绍
龙胆草(GentianascabraBge),又名地胆草﹑龙胆﹑草龙胆，药用部分为龙胆科龙胆属植物龙胆干燥的根和茎，是一种常用的中草药。龙胆草在我国的产地分布较广，主要分布在贵州﹑云南﹑四川﹑湖南﹑陕西等地。龙胆草具有清热燥湿﹑清肝泻胆的药用功效，有着广泛的用途，如中成药“龙胆泻肝丸”就是用龙胆草为主要原料制成的。研究发现龙胆汤对病毒性脑炎,肝胆湿热型带状疱疹,突发性耳聋,湿热型带下病,单纯疱疹性角膜炎的系统评价,面瘫，宫颈炎合并Hpv感染等疾病均有一定的疗效。龙胆草中有很多有效成份，如黄酮类﹑口山酮类﹑生物碱类﹑多糖等。其中龙胆多糖为龙胆草中非常重要的有效活性成分内之一,实验显示龙胆多糖有明显的生理活性,具有抗肿瘤﹑抗氧化﹑抗凝血﹑保肝﹑降血脂﹑调节免疫力等作用。目前植物多糖的生理活性及功能越来越受到人们的重视，也成为当今保健品和新药开发的重要研究方向之一，目前对龙胆多糖的研究相对较少，主要是集中在对龙胆粗品的研究。龙胆粗多糖中含有很多的杂质，其中色素为其中主要的杂质之一，由于色素会影响到后续的分离纯化和结构鉴定等方面，所以脱色是非常重要的步骤。目前多糖的脱色方法很多，主要有过氧化法﹑吸附法(DEAE纤维素﹑活性炭﹑硅藻土﹑树脂法等)﹑金属络合法﹑离子交换树脂法等。其中过氧化氢氧化法和金属络合法容易造成多糖的部分降解，并且氧化色素后的杂质会留在多糖溶液中，需要通过透析去除；活性炭法易造成多糖的损失，脱色时间较久，处理后的活性炭再生困难；DEAE纤维素的价格较贵，成本较高；其中离子交换树脂法用于多糖的脱色方法在欧美国家已经比较普遍，色素大多带阴离子，所以可以用阴离子交换树脂将其去除。本专利技术通过单因素试验和响应面法研究D941阴离子交换树脂对龙胆多糖色素的去除工艺，并确定最佳纯化的工艺条件，并对树脂的再生实验，以考察树脂的重复利用性，以期为工业化生产和进一步的开发利用提供参考。
技术实现思路
本专利技术提供了一种D941阴离子交换树脂对龙胆草多糖的脱色工艺。本专利技术的目的在于：提供一种龙胆草多糖的脱色方法，脱色方法方便，无污染，成本低，且D941阴离子交换树脂可以重复利用，脱色效果较好，且多糖的损失较少，适合工业化生产。本专利技术的技术解决方案是通过以下技术方案实现的：首先将龙胆草粉碎并过筛，然后以其干粉为材料按以下工艺流程进行，一﹑龙胆草粗多糖的提取(1)脱脂：取龙胆草粉末以料液比1：20加入石油醚，在80℃水浴回流2～4h,减压过滤，将龙胆草粉末放入通风橱中待石油醚挥发完全后，再放入35℃烘箱中烘干，得到脱脂龙胆草粉末。(2)提取：称取一定量的龙胆草粉末，按料液比1：25(g/mL)的料液比加入去离子水，80℃水浴提取2h，过滤。(3)浓缩：将提取液在旋转蒸发仪上浓缩至原体积的1/5。(4)醇沉：取浓缩液，加入4倍体积的无水乙醇，醇沉24h,过滤。(5)干燥：用无水乙醇﹑丙酮依次洗涤沉淀，自然干燥。(6)复溶：称取一定量干燥的龙胆草粗多糖，用去离子水在超声波清洗器中超声助溶，使龙胆草多糖的浓度为2mg/mL～6mg/mL。二﹑龙胆草多糖的脱色(1)称取一定量的龙胆草粗多糖，加入去离子水在超声波清洗仪中超声震荡溶解，使多糖溶液的浓度在2mg/mL～6mg/mL。(2)选用规格为20×400的层析柱，加入30cm3的处理好的D941离子交换树脂，并先加入3～4倍体积的去离子水进行平衡，将配制好的多糖溶液从柱端上样，收集流出液，减压浓缩，冷冻干燥后得到脱色后的龙胆多糖。控制上样浓度为2mg/mL～6mg/mL，上样流速为0.5BV/h～4BV/h，上样量为1BV～9BV；。本专利技术中，D941树脂的处理方法如下：(1)新买的D941树脂的预处理将新的D941树脂湿法装柱，打开活塞，倒入适量清水洗去杂质，再关闭活塞，加入2倍树脂体积量的饱和食盐水，浸泡树脂12h,然后将食盐水放出，再用适量清水冲洗干净。关闭活塞，加入3倍树脂体积量的4％的NaOH,浸泡4h，再将放尽后用去离子水清洗至流出液为中性；用同样的方法再加入3倍树脂体积量的4％的HCl,浸泡4h，然后用去离子水清洗至中性,最后用去离子水浸泡以备用。(2)D941树脂的再生处理将用过的树脂用水冲洗洗至流出液为无色，关闭活塞，用4倍树脂体积的4％的NaOH浸泡24h，再用去离子水冲洗至排出的水为中性，再加入3倍树脂体积量的4％的HCl,浸泡24h，然后用去离子水清洗至中性即可重新使用。按照本专利技术方法得到最佳脱色条件为多糖上样量为5BV,上样流速为3BV/h,上样多糖浓度为5mg/mL。，龙胆多糖的脱色率为80.40％％，多糖保留率为80.60％。脱色前的龙胆粗多糖颜色为深棕色，脱色后的龙胆粗多糖为浅黄色，脱色效果明显。附图说明图1单因素实验确定不同上样量对D941树脂脱色效果的影响；图2单因素实验确定不同上样流速对D941树脂脱色效果的影响；图3单因素实验确定不同上样浓度对D941树脂脱色效果的影响；图4上样流速和上样浓度交互作用对龙胆多糖脱色工艺影响的响应面图；图5上样量和上样浓度交互作用对龙胆多糖脱色工艺影响的响应面图；图6上样量和上样流速交互作用对龙胆多糖脱色工艺影响的响应面图；图7D941树脂使用次数与脱色率和多糖保留率的关系。具体实施方式为了使本
的人员能较好地理解本专利技术的方案，下面结合附图对本专利技术的技术方案作进一步的说明。本专利技术提供了一种D941离子交换树脂法脱除龙胆多糖色素的方法，其工艺流程如下：龙胆草粉碎→过筛→石油醚脱脂→80℃水浴提取→浓缩提取液→醇沉24h→过滤→乙醇﹑丙酮洗涤→干燥→称重→龙胆粗多糖→溶解→上样→收集流出液→浓缩→冷冻干燥→脱色后的多糖。具体技术方案如下：1)龙胆草粗多糖的制备用植物粉碎机将龙胆草粉碎，过60目药筛，称干燥的龙胆草粉末以料液比为1:20(g/mL)加入石油醚，在80℃水浴回流2～4h,抽滤，待沉淀挥发完溶剂后，放入35℃烘箱中烘干。将脱脂后的龙胆草粉末以1：25(g/mL)的料液比加入去离子水，80℃水浴提取2h,先用药筛过滤一次，再抽滤一次，浓缩过滤液，加入4倍体积的乙醇后，放于冰箱中过夜醇沉。然后再减压过滤，并用无水乙醇和丙酮依次清洗沉淀后，放在干燥器中自然干燥，得到龙胆草粗多糖。2)龙胆草多糖色素吸光度的测定对龙胆草粗多糖进行全波扫描，结果表明该溶液在可见光区无最大吸收波长。由于该溶液呈现橙黄色，根据互补色原理可知，溶液主要吸收的是蓝色波段的可见光。所以选择了处于该波段中央的450nm为检测波长。3)最优脱色条件的单因素试验称取一定质量的龙胆草粗多糖并加入一定量的水，放入超声波清洗器中超声复溶，备用。选用的层析柱，填好30cm3已处理好的D941树脂，并加入3～4倍体积的去离子水进行平衡后备用。上样，收集流出液。以脱色率和多糖保留率为评价指标，从上样量﹑上样流速﹑上样浓度3个方面确定最佳的脱色条件。①最佳上样量的确定在上样浓度均为5mg/mL,上样流速为3BV/h的条件下，以不同的多糖溶液上样量(1BV﹑2BV﹑3BV﹑4BV﹑5BV﹑6BV﹑7本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种龙胆草多糖的脱色方法，其特征在于：首先将龙胆草粉碎并过筛，然后以其干粉为材料按以下工艺流程进行，一﹑粗多糖的提取（1）脱脂：取龙胆草粉末以料液比1：20加入石油醚，在80℃水浴回流2～4h,减压过滤，将龙胆草粉末放入通风橱中待石油醚挥发完全后，再放入35℃烘箱中烘干，得到脱脂龙胆草粉末；（2）提取：称取一定量的龙胆草粉末，按料液比1：25（g/mL）的料液比加入去离子水，80℃水浴提取2h，过滤；（3）浓缩：将提取液在旋转蒸发仪上浓缩至原体积的1/5；（4）醇沉：取浓缩液，加入4倍体积的无水乙醇，醇沉24h,过滤；（5）干燥：用无水乙醇﹑丙酮依次洗涤沉淀，自然干燥；（6）复溶：称取一定量干燥的龙胆草粗多糖，用去离子水在超声波清洗器中超声助溶，使龙胆草多糖的浓度为2mg/mL～6mg/mL；二﹑粗多糖的脱色（1）选用的层析柱，湿法装柱，填入处理好的D941树脂，将配好的龙胆草粗多糖溶液上柱；（2）收集流出液，将流出液在旋转蒸发仪上浓缩，冷冻干燥，得到脱色后的龙胆草多糖。

【技术特征摘要】
1.一种龙胆草多糖的脱色方法，其特征在于：首先将龙胆草粉碎并过筛，然后以其干粉为材料按以下工艺流程进行，一﹑粗多糖的提取（1）脱脂：取龙胆草粉末以料液比1：20加入石油醚，在80℃水浴回流2～4h,减压过滤，将龙胆草粉末放入通风橱中待石油醚挥发完全后，再放入35℃烘箱中烘干，得到脱脂龙胆草粉末；（2）提取：称取一定量的龙胆草粉末，按料液比1：25（g/mL）的料液比加入去离子水，80℃水浴提取2h，过滤；（3）浓缩：将提取液在旋转蒸发仪上浓缩至原体积的1/5；（4）醇沉：取浓缩液，加入4倍体积的无水乙醇，醇沉24h,过滤；（5）干燥：用无水乙醇﹑丙酮依次洗涤沉淀，自然干燥；（6）复溶：称取一定量干燥的龙胆草粗多糖，用去离子水在超声波清洗器中超声助溶，使龙胆草多糖的浓度为2mg/mL～6mg/mL；二﹑粗多糖的脱色（1）选用的层析柱，湿法装柱，填入处理好的D941树脂，将配好的龙胆草粗多糖溶液上柱；（2）收集流出液，将流出液在旋转蒸发仪上浓缩，冷冻干燥，得到脱色后的龙胆草多糖。2.根据权利要求1所述的龙胆草多糖的脱色方法，其特征在于：控制上样浓度为2mg/mL～6mg/mL，上样流速为0.5BV/h～4BV/h，上样量为1BV～9BV。3.根据权利要求1所述的龙胆草多糖的脱色方法，其特征在于：龙胆多糖溶液的最佳上样浓度为5mg/mL。4.根据权利要求1所述的龙胆草多糖的脱色方法，其特征在于：龙胆多糖溶液的最佳上样流速为3BV/h。5.根据权利要求1所述的龙胆草多糖的脱色方法，其特征...

【专利技术属性】
技术研发人员：宫江宁，成鹏程，
申请(专利权)人：贵州师范大学，
类型：发明
国别省市：贵州,52