一种中药龙胆的质量检测方法技术

本发明专利技术提供了一种中药龙胆的质量检测方法。利用粉碎、过筛、甲醇超声提取、定容、过滤的样品前处理手段将龙胆处理后，通过电喷雾质谱得到裂环烯醚萜苷类成分的指纹图谱，根据其指纹图谱确定龙胆所含的裂环烯醚萜苷类成分的种类；利用高效液相色谱法测定裂环烯醚萜苷类化合物的含量。综合其指纹图谱及含量测定数据，可以对龙胆的质量进行评价。该质量检测方法准确、快捷、方便、有效。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于中药
，具体涉及中药龙胆的质量检测方法。
技术介绍
中药龙胆是龙胆科植物条叶龙胆(Ge""a"a ma似/whca Kitag.)、龙 胆((7e油'朋"5caZ ra Bge.)、三花龙胆(Ge油'朋a加^7ora Pall.)或坚龙胆 (Ge",/"""hg^cemFranch.)的干燥根及根茎，前三种习称"龙胆"， 后一种习称"坚龙胆"。其中条叶龙胆又称东北龙胆，龙胆又名为粗 糙龙胆。龙胆性寒，味苦，归肝胆经，具清热燥湿，泻肝胆火之功效，属 清热燥湿药。用于湿热黄疸，阴肿阴痒，带下，湿疹瘙痒，目赤耳聋，惊 风抽搐等症。龙胆为常用中药，中医取其苦寒之性，泻肝胆实火，除下 焦湿热。研究发现，龙胆的根及根茎含有环烯醚萜，裂环环烯醚萜及 其苷类，生物碱，黄酮，留体，香豆素，内酯，糖及其苷类，酚性成 分，微量元素，鞣质，有机酸，挥发油等挥发成分。裂环环烯醚砲及 其苷类为中药龙胆最主要的药效活性成分，以龙胆苦苷为主，是保肝 利胆、健胃、抗炎等药理作用的基础性成分。在临床上，龙胆是龙胆 泻肝汤、泻青丸、当归龙荟丸等方剂的主药，具泻肝胆实火、清下焦湿热之功。近年来用于健胃、抗肿瘤。龙胆在国际上龙胆亦为天然药， 被收载为苦味健胃剂。现在市场上中药龙胆品种众多，而各品种之间 的化学成分及含量均有差异，若化学成分和含量不能达到质量要求， 势必会影响临床应用的安全性以及有效性。为确保中药使用的安全有效，对中药材进行准确可靠的质量检测是十分必要。(参考文献YangShaoyun (杨绍云)，Wang Weiwei (王薇薇)，Li Zhiping (李志平).C/w力e^ rratfeowa//^^ Drags.(中草药)，1981， 12(6). 7.)
技术实现思路
本专利技术的目的是提供。该方法利用 龙胆粗提物的电喷雾质谱作为指纹图谱，利用高效液相色谱法确定龙 胆中裂环烯醚萜苷类化合物的含量，保证了质量检测方法的准确性和 质量检测标准的先进性。实施本专利技术的技术方案如下将中药龙胆粉碎过60-80目筛，称取已粉碎的龙胆50-200 mg 置50 ml锥形瓶中，以体积百分比浓度为50%-100%的甲醇作为溶 媒，加入甲醇5-20 ml,超声提取l-3次，20-40 min/次，超声提取温 度20-50。C，过滤，合并上述提取液并浓縮至l-2ml，甲醇定容至10 ml，摇匀，即为供试样品溶液；样品的电喷雾指纹图谱通过如下步骤得到取50-100pL供试样 品溶液，用甲醇稀释10倍后，作电喷雾质谱分析；电喷雾质谱实验 条件如下电喷雾电离源，喷雾电压3.5-5.5 kV，毛细管温度180-220 °C，流动注入泵进样流速2-8 pl/min;扫描范围质荷比(m/z) 50-2000， 利用正离子电喷雾质谱确认裂环烯醚萜苷的种类，正离子条件下，在m/z 100-1000范围内，存在m/z 379， m/z381， m/z 395， m/z 735， m/z805， m/z821离子；高效液相色谱技术条件如下C18色谱柱条件为150 mmx4.6 mm, 5 pm，柱温20-35 °C;流动相为甲醇和水，甲醇与水体积比 80:20-30:70，洗脱时间30-60 min;紫外检测器检测波长190-400 nm; 样品进样量5-20裂环烯醚萜苷含量测定方法如下分别精密称量1 mg的标准对 照品为龙胆苦苷、当药苷和当药苦苷，分别加甲醇溶解并定容至2ml 容量瓶中，配成标准对照品溶液；高效液相色谱测定条件如下C18色谱柱(150 mmx4.6 mm, 5 pm);柱温20。C;流动相甲醇和水，甲醇与水体积比80:20，等度 洗脱时间30mm;紫外检测器检测波长190 nm。各标准对照品分别 以2、 4、 6、 8、 10.ul进样，测得各标准对照品的高效液相色谱峰面 积，以所得各标准对照品峰面积为纵坐标，各对应标准对照品含量为 横坐标绘制标准曲线，计算得线性回归方程；然后按照标准品的高效液相色谱实验条件对供试样品溶液进行 测定，样品进样量为5nl，得到各标准对照品对应色谱峰的峰面积， 根据标准曲线测得供试样品中龙胆苦苷、当药苷、当药苦苷的含量。有益效果本专利技术利用软电离质谱技术对龙胆的粗提物进行检 测，根据得到的龙胆粗提物的电喷雾指纹图谱中裂环烯醚萜苷的个数 及强度，对龙胆的质量进行初步评价。该指纹图谱可以清晰反映出由 于产地、采收季节所带来的裂环烯醚萜苷种类的不同。本专利技术考虑到龙胆中最主要的药效活性成分是裂环烯醚萜苷类化合物，并且以其中 的龙胆苦苷、当药苷、当药苦苷三种裂环烯醚萜苷类化合物为主，因 此本专利技术以这三种裂环烯醚萜苷作为标准对照品，通过高效液相色谱 测定，得到各标准对照品的标准曲线及线性回归方程，然后对供试样 品溶液进行高效液相色谱测定，得到各标准对照品对应色谱峰的峰面 积，根据标准曲线测得供试样品中龙胆苦苷、当药苷、当药苦苷的含本专利技术给出的方法的样品前处理过程简单，提取效率高。利用中 药龙胆提取物的电喷雾质谱作为指纹图谱，通过裂环烯醚萜苷种类可 以清晰地看出不同产地、不同季节采收的龙胆质量差异，再结合高效 液相色谱对中药龙胆提取物中木脂素类化合物的含量测定结果，可以 对中药龙胆的质量进行评价。 具体实施例方式实施例1: (1)供试样品溶液制备 将中药龙胆粉碎，过60目筛，称取已粉碎的龙胆50 mg置50 ml 锥形瓶中，加入体积百分比浓度为50。/。的甲醇5ml，超声提取1次， 20 min/次，超声提取温度20。C 。过滤，合并上述提取液并浓縮至1 ml， 甲醇定容至10 ml，摇匀，即为供试样品溶液。(2)供试样品的电喷雾指纹图谱取供试样品溶液，用甲醇稀释10倍后，作电喷雾质谱分析。电 喷雾质谱实验条件如下电喷雾电离源，喷雾电压3.5kV，毛细管温度180°C，流动注入泵进样流速2 jnl/min;扫描范围质荷比(m/z) 50-2000，利用正离子电喷雾质谱确认裂环烯醚萜苷的种类。正离子 条件下，在m/z 100-1000范围内，存在m/z379， m/z381， m/z395， m/z735， m/z805， m/z821离子。(3)裂环烯醚萜苷含量测定 高效液相色谱实验条件如下C18色谱柱(150 mmx4.6 mm, 5 pm);柱温2(TC;流动相甲醇和水，甲醇与水体积比80:20，等度 洗脱时间30min;紫外检测器检测波长190 nm;样品进样量5 pl。 裂环烯醚萜苷含量测定方法如下分别精密称量1 mg的标准对 照品龙胆苦苷、当药苷、当药苦苷，分别置于2 ml容量瓶中，加甲 醇溶解并定容至刻度，配成标准对照品溶液。高效液相色谱测定，各 标准对照品分别以2、 4、 6、 8、 10pl进样，测得各标准对照品的高 效液相色谱峰面积。以所得各标准对照品峰面积为纵坐标，各对应标 准对照品含量为横坐标绘制标准曲线，计算得线性回归方程。然后按 照标准品的高效液相色谱实验条件对供试样品溶液进行测定，样品进 样量为5 pi,,得到各标准对照品对应色谱峰的峰面积，根据标准曲 线测得供试样品中龙胆苦苷、当药苷、当药苦苷的含量。实施例2:(1)供试样品溶液制备将中药龙胆粉碎，过80目筛，称取已粉碎的龙胆本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种中药龙胆的质量检测方法，其特正在于，步骤和条件如下：将中药龙胆粉碎过６０－８０目筛，称取已粉碎的龙胆５０－２００ｍｇ置５０ｍｌ锥形瓶中，以体积百分比浓度为５０％－１００％的甲醇作为溶媒，加入甲醇５－２０ｍｌ，超声提取１－３次，２０－４０ｍｉｎ／次，超声提取温度２０－５０℃，过滤，合并上述提取液并浓缩至１－２ｍｌ，甲醇定容至１０ｍｌ，摇匀，即为供试样品溶液；　样品的电喷雾指纹图谱通过如下步骤得到：取５０－１００μＬ供试样品溶液，用甲醇稀释１０倍后，作电喷雾质谱分析；电 喷雾质谱实验条件如下：电喷雾电离源，喷雾电压３．５－５．５ｋＶ，毛细管温度１８０－２２０℃，流动注入泵进样流速２－８μｌ／ｍｉｎ；扫描范围质荷比（ｍ／ｚ）５０－２０００，利用正离子电喷雾质谱确认裂环烯醚萜苷的种类，正离子条件下，在ｍ／ｚ１００－１０００范围内，存在ｍ／ｚ３７９，ｍ／ｚ３８１，ｍ／ｚ３９５，ｍ／ｚ７３５，ｍ／ｚ８０５，ｍ／ｚ８２１离子；　高效液相色谱技术条件如下：Ｃ１８色谱柱条件为１５０ｍｍ×４．６ｍｍ，５μｍ，柱温２０－３５℃；流动相为甲醇和水，甲醇与水 体积比８０∶２０－３０∶７０，洗脱时间３０－６０ｍｉｎ；紫外检测器检测波长：１９０－４００ｎｍ；样品进样量５－２０μｌ；　裂环烯醚萜苷含量测定方法如下：分别精密称量１ｍｇ的标准对照品为龙胆苦苷、当药苷和当药苦苷，分别加甲醇溶解并定容至 ２ｍｌ容量瓶中，配成标准对照品溶液；　高效液相色谱测定条件如下：Ｃ１８色谱柱（１５０ｍｍ×４．６ｍｍ，５μｍ）；柱温２０℃；流动相：甲醇和水，甲醇与水体积比８０∶２０，等度洗脱时间３０ｍｉｎ；紫外检测器检测波长：１９０ｎｍ；各标准对照 品分别以２、４、６、８、１０μｌ进样，测得各标准对照品的高效液相色谱峰面积，以所得各标准对照品峰面积为纵坐标，各对应标准对照品含量为横坐标绘制标准曲线，计算得线性回归方程；　然后按照标准品的高效液相色谱实验条件对供试样品溶液进行测定， 样品进样量为５μｌ，得到各标准对照品对应色谱峰的峰面积，根据标准曲线测得供试样品中龙胆苦苷、当药苷、当药苦苷的含量。...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：宋凤瑞，齐静静，邢俊鹏，刘志强，刘淑莹，
申请(专利权)人：中国科学院长春应用化学研究所，
类型：发明
国别省市：82[中国|长春]