本发明专利技术属于海洋生物技术领域，具体涉及海参多肽及其制备方法与应用。本发明专利技术所述海参多肽具有SEQ ID NO:1～13之一所示的氨基酸序列。本发明专利技术所述海参多肽F2组分包括具有SEQ ID NO:1～11所示的氨基酸序列；本发明专利技术所述海参多肽F3组分包括具有SEQ ID NO:12～13所示的氨基酸序列。本发明专利技术所述制备方法能够充分利用海参丰富资源得到海参多肽F2、F3组分。实验结果表明本发明专利技术所述制备方法制得的具有SEQ ID NO:1～13之一所示的氨基酸序列的海参多肽以及海参多肽F2、F3组分均具有很好的抗氧化、抗衰老作用，可以用于制备抗氧化、抗衰老药物或保健品，具有良好的经济和社会效应。
【技术实现步骤摘要】
海参生物活性肽在制备抗氧化、延衰保健食品和化妆品中的应用
本专利技术属于海洋生物
，具体涉及海参多肽及其制备方法与应用。
技术介绍
传统医学对延年益寿和神经保护有悠久的研究历史，而丰富的海洋生物资源种类则为之提供了庞大的资源库，包含肽类、蛋白质类、多糖类、生物碱类、萜类、大环聚酯类等数万种新型化合物已经被人们发现。其中，肽类是海洋生物活性物质中数量最庞大的一类化合物，达数万种之多，包括海洋肽类毒素与海洋生物活性肽等。由于海洋生物生存的特定环境，海洋生物多肽的结构与陆生动植物肽(糖肽)有很大不同，多为小分子环肽，含有种类丰富的活性基团，使海洋生物活性肽除了分子量小无免疫原性的特点外，还具备优良的生物稳定性及生物利用度。研究表明生物活性肽具有多种药理活性，具有预防和治疗神经退行性疾病或延缓衰老的潜能，包括抑制脂质过氧化反应、诱导自噬抑制多种致病因子、减少阿尔茨海默病秀丽线虫Aβ沉积等。因此，发掘海洋生物资源中具有抗氧化、延缓衰老、神经保护作用的多肽类活性成分有助于促进海洋生物资源的综合开发与利用。海参是棘皮动物门海参纲动物的总称，英文俗名为SeaCucumber，是一种高蛋白低脂肪珍贵海味，同人参、燕窝、鱼翅齐名，也是世界八大珍品之一。海参营养丰富，具有补肾壮阳、益肾补肺、温阳利水的功效。海参体壁组织富含胶原蛋白，其中谷氨酸(Glu)含量高，Glu为谷胱甘肽的良好来源，可提高机体的抗氧化能力，在保健品和化妆品领域具有较好的开发应用价值。虽然海参多肽生物学活性显著，但目前关于其功效相关物质基础的研究却鲜有报道。因此，根据前期研究基础，鉴定具有抗氧化、延缓衰老功能的海参活性多肽成分，有利于推动活性肽在抗衰老及衰老相关疾病领域的应用，为开发基于海洋生物资源的抗氧化活性肽及探索其在食品、医学上的应用奠定基础。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术的目的在于提供具有抗氧化、延缓衰老作用的海参多肽及其制备方法与应用。为实现本专利技术的目的，本专利技术采用如下技术方案。一种海参多肽，具有SEQIDNO:1～13之一所示的氨基酸序列。在一些实施方案中本专利技术还提供了一种海参多肽F2组分包括下述序列：(1)具有SEQIDNO:1所示的氨基酸序列；(2)具有SEQIDNO:2所示的氨基酸序列；(3)具有SEQIDNO:3所示的氨基酸序列；(4)具有SEQIDNO:4所示的氨基酸序列；(5)具有SEQIDNO:5所示的氨基酸序列；(6)具有SEQIDNO:6所示的氨基酸序列；(7)具有SEQIDNO:7所示的氨基酸序列；(8)具有SEQIDNO:8所示的氨基酸序列；(9)具有SEQIDNO:9所示的氨基酸序列；(10)具有SEQIDNO:10所示的氨基酸序列；(11)具有SEQIDNO:11所示的氨基酸序列。本专利技术还提供了一种海参多肽F3组分，包括下述序列：(1)具有SEQIDNO:12所示的氨基酸序列；(2)具有SEQIDNO:13所示的氨基酸序列。本专利技术还提供了所述海参多肽F2的制备方法，取海参体壁匀浆后依次经胰蛋白酶和木瓜蛋白酶水解后，加入乙醇沉淀多糖，离心取上清液，超滤收集截留分子量小于3kDa的组分，凝胶层析分离后收集70～90min内的洗脱组分。本专利技术还提供了所述海参多肽F3的制备方法，取海参体壁匀浆后依次经胰蛋白酶和木瓜蛋白酶水解后，加入乙醇沉淀多糖，离心取上清液，超滤收集截留分子量小于3kDa的组分，凝胶层析分离后收集90～110min内的洗脱组分。其中，所述海参体壁为新鲜的海参解刨，去内脏，体壁用水清洗3～4次得到。在一些实施方案中，本专利技术所述海参多肽的制备方法中，所述胰蛋白酶水解前还包括将匀浆后得到的肉糜干燥后加水重溶的步骤。其中，所述肉糜干燥后的重溶时水的加入量为干燥的肉糜的体积的20倍。本领域技术人员可以按照公知的干燥的方法对海参体壁匀浆后得到的肉糜进行干燥。优选采用冷冻干燥。在一些实施方案中，所述胰蛋白酶水解具体为调节pH至8.0，加入胰蛋白酶37～55℃水解2～10小时，灭酶。进一步的，作为优选，所述胰蛋白酶的活力为2500U/mg，每克原料干粉中胰蛋白酶的加入量为3000U。在一些实施方案中，所述木瓜蛋白酶水解具体为调节pH至5.5，加入木瓜蛋白酶50～80℃水解2～10小时，灭酶。进一步的，作为优选，所述木瓜蛋白酶的活力为6000U/mg，每克原料干粉中木瓜蛋白酶的加入量为3000U。在一些实施方案中，所述乙醇沉淀多糖具体为先加入乙醇初步沉淀，然后加入乙醇至乙醇终浓度为60～80v/v％，静置12～20小时。进一步的，所述加入乙醇初步沉淀为按乙醇：酶解液体积比为3:5的比例加入乙醇。其中，所述乙醇沉淀多糖时加入的乙醇优选为95％乙醇。静置后离心收集上清液即获得本专利技术所述海参多肽。其中，所述离心为5000～10000rpm的转速离心10～20min。作为优选，所述离心为4℃条件下6000rpm离心15min。在一些优选实施方案中，本专利技术所述制备方法还包括上清液超滤，收集截留分子量小于3kDa的组分的步骤。进一步的，所述超滤具体为上清液加入截留分子量为3kDa超滤离心管，在6000rpm～8000rpm下离心。本领域技术人员还可以按照公知的方法对乙醇沉淀多糖后离心收集的上清液以及超滤收集的组分进行干燥。优选采用冷冻干燥。在一些实施方案中，本专利技术所述海参多肽的制备方法中，所述超滤前还包括对干燥后海参多肽加水重溶的步骤。其中，所述干燥后海参多肽的重溶优选为配制成浓度为10mg/mL的溶液。作为优选，所述的制备方法中，所述凝胶层析分离具体为于葡聚糖凝胶层析色谱柱对MW<3kDa海参多肽组分进行分离，以2mL的上样体积和20mg/mL的浓度进行进针加样，以水为流动相、1mL/min的速度进行洗脱，紫外检测器在280nm处检测多肽组分的特征峰。百草枯是一种联吡啶阳离子类除草剂，在体内能诱导产生活性氧自由基，从分子水平上氧化多种生命物质，使机体处于氧化胁迫环境，进而出现早衰现象。本专利技术将所述海参多肽、分子量小于3kDa的海参多肽组分以及凝胶层析分离得到的F1～F5组分分别加入到成虫初期的野生型秀丽线虫中培养，加入百草枯对秀丽线虫进行氧化胁迫造模，定时统计秀丽线虫存活的比率，检测对百草枯诱导的氧化胁迫的影响，结果显示本专利技术所述海参多肽、分子量小于3kDa的海参多肽组分以及凝胶层析分离得到的F1～F5组分均可以显著延长秀丽线虫的氧化胁迫存活率，提高秀丽线虫耐氧化胁迫条件的能力，以F2组分和F3组分的效果更佳。自由基是机体氧化反应中产生的有害化合物，具有强氧化性，可损害机体的组织和细胞，进而引起慢性疾病及衰老效应。因此，通过测定对自由基的清除率，可以反映以清除活性氧自由基为主的抗氧化能力。本专利技术分别将所述凝胶层析分离得到的F2组分、F3组分加水溶解配制成各受试浓度的多肽样品溶液，加入DPPH溶液，测定吸光度，计算DPPH自由基清除率。结果显示，本专利技术所述海参多肽F2组分、F3组分均能够有效地清除体外DPPH自由基，而且呈现浓度依赖性。表明本专利技术所述海参多肽F2组分、F3组分均有较好的体外抗氧化效果。活性氧类(ROS)是生物有氧代谢过程中的一种副产品，具有较强的氧化活性，在体内主要包括超氧阴离子(O2本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种海参多肽，其特征在于，具有SEQ ID NO:1～13之一所示的氨基酸序列。
【技术特征摘要】
1.一种海参多肽，其特征在于，具有SEQIDNO:1～13之一所示的氨基酸序列。2.一种海参多肽，其特征在于，包括下述序列：(1)具有SEQIDNO:1所示的氨基酸序列；(2)具有SEQIDNO:2所示的氨基酸序列；(3)具有SEQIDNO:3所示的氨基酸序列；(4)具有SEQIDNO:4所示的氨基酸序列；(5)具有SEQIDNO:5所示的氨基酸序列；(6)具有SEQIDNO:6所示的氨基酸序列；(7)具有SEQIDNO:7所示的氨基酸序列；(8)具有SEQIDNO:8所示的氨基酸序列；(9)具有SEQIDNO:9所示的氨基酸序列；(10)具有SEQIDNO:10所示的氨基酸序列；(11)具有SEQIDNO:11所示的氨基酸序列。3.一种海参多肽，其特征在于，包括下述序列：(1)具有SEQIDNO:12所示的氨基酸序列；(2)具有SEQIDNO:13所示的氨基酸序列。4.权利要求2所述海参多肽的制备方法，其特征在于，取海参体壁匀浆后依次经胰蛋白酶和木瓜蛋白酶水解后，加入乙醇沉淀多糖，离心取上清液，超滤收集截留分子量小于3kDa的组分，凝胶层析分离后收集70～90min内的洗脱组分。5.权利要求3所述海参多肽的制备方法，其特征在于，取海参体壁匀浆后依次经胰蛋白酶和木瓜蛋白酶水...
【专利技术属性】
技术研发人员：梁明，马忠华，郭晓蕾，黄泽波，秦垂新，毛新亮，贾伟章，
申请(专利权)人：无限极中国有限公司，
类型：发明
国别省市：广东,44
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