一种ASE‑HPLC法测定酸枣仁中斯皮诺素含量的方法技术

本发明专利技术公开了一种ASE‑HPLC法测定酸枣仁中斯皮诺素含量的方法，属于化学检测领域。旨在提供一种耗时短且可达到理想效果的ASE萃取法与HPLC检测法结合的方法。该方法采用ASE法对酸枣仁粉末进行萃取，其中所述的ASE法包括先用正己烷，再用甲醇萃取，并收集甲醇萃取液；采用HPLC法对甲醇萃取液中的斯皮诺素含量。本发明专利技术可代替药典方法对酸枣仁中斯皮诺素的含量测定，以及对酸枣仁中的斯皮诺素的含量监控。

【技术实现步骤摘要】
一种ASE-HPLC法测定酸枣仁中斯皮诺素含量的方法
本专利技术属于化学检测领域，尤其是一种ASE-HPLC法测定酸枣仁中斯皮诺素含量的方法。
技术介绍
《中国药典》2015年版一部制备供试品方法为取本品粉末(过四号筛)约1g，精密称定，置索氏提取器中，加石油醚(60～90℃)适量，加热回流4小时，弃去石油醚液，药渣挥去溶剂，转移至锥形瓶中，加入70％乙醇20ml，加热回流2小时，滤过，滤渣用70％乙醇5ml洗涤，合并洗液与滤液，回收溶剂至干，残渣加甲醇溶解，转移至5ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。该方法回流时间长，对技术人员的专业水平要求较高。
技术实现思路
针对上述不足，本专利技术旨在提供一种耗时短且能达到同样效果的ASE-HPLC法测定酸枣仁中斯皮诺素含量的方法。为了解决上述技术问题，本专利技术提供的技术方案是这样的：一种ASE-HPLC法测定酸枣仁中斯皮诺素含量的方法，依次包括下述步骤：步骤1：采用ASE法对酸枣仁粉末进行萃取，其中所述的ASE法包括先用正己烷，再用甲醇萃取，并收集甲醇萃取液；步骤2：采用HPLC法对甲醇萃取液中的斯皮诺素含量。优选地，所述的步骤1包括下述子步骤：步骤S1：将酸枣仁样品粉碎，过筛，取1g与1g硅藻土混合均匀；步骤S2：将步骤1所得的混合物装于放有滤膜的10mlASE萃取池中，加硅藻土至与池口平行；步骤S3：用25ml正己烷萃取除杂，再用25ml甲醇萃取，用甲醇定容至50ml。优选地，步骤S3所述的除杂步骤的参数为：温度为80℃，时间为8min，次数为1次，冲洗体积为60％，吹扫时间为60s。优选地，步骤S3所述的萃取步骤的参数为：温度为100℃，时间为8min，次数为1次，冲洗体积为60％，吹扫时间为60s。优选地，步骤1所述的HPLC法的检测参数为：色谱柱为ThermoAQ；柱温为40℃；流速为0.3mL/min；流动相为乙腈-水；检测波长为335nm。优选地，所述的色谱柱的规格为1.7μm，50×2.1mm。优选地，所述的流动相采用梯度洗脱的方法加入，其中具体的参数如下：洗脱总时间为30min；第0～10min，流动相中乙腈-水的体积比为12～19：88～81；第10～16min，流动相中乙腈-水的体积比为19～20：81～80；第16～22min，流动相中乙腈-水的体积比为20～100：80～0；第22～30min，流动相中乙腈-水的体积比为100：0。本专利技术与传统方法相比，具有以下优点：1、本专利技术提高了温度降低溶剂的黏度，减少溶剂进入样品基体的阻止，增加了溶剂进入样品基体的扩散，降低溶剂和样品基体之间的表面张力，使溶剂溶解待测物的容量增加；2、由于液体对溶质的溶解能力远大于气体对溶质的溶解能力，所以萃取液体的沸点随压力升高而提高，从而使溶剂在高温高压下仍保持在液态；3、本专利技术曾对快速溶剂萃取使用的溶剂进行考察，有论文提到使用70％乙醇提取斯皮诺素相对含量较高，杂质较少，故对使用甲醇和70％乙醇进行了溶剂考察，结果显示甲醇与70％乙醇提取斯皮诺素含量一致，且杂质峰基本相同，故采用甲醇提取溶剂；4、本专利技术主要考察萃取次数对结果的影响，实验中用ASE单次萃取的方法对样品重复提取三次，分别接收每次的样品液，分析其结果，结果表明萃取一次几乎完全，故萃取次数采用1次以节省时间；5、本专利技术所述的ASE提取方法的重复性良好。附图说明图1为斯皮诺素对照品的色谱图；图2为采用ASE法萃取所得的斯皮诺素的色谱图；图3为采用药典方法萃取所得的斯皮诺素的色谱图；图4为以斯皮诺素对照品的浓度(mg)-峰面积进行的线性回归图。具体实施方式下面结合具体实施方式，对本专利技术的权利要求书做进一步的详细说明，但不构成对本专利技术的任何限制，任何在本专利技术权利要求保护范围内所做的有限次修改，人在本专利技术的权利要求保护范围之内。实施例11、仪器设备及试剂1.1仪器：电子分析天平(XA205DU)、ASE350快速溶剂萃取仪(美国DIONEX公司)、ThermoU3000UHPLC液相色谱仪。1.2试剂：水：符合GB/T6682规定的一级水；乙腈：色谱纯；正己烷、甲醇：分析纯。2、方法2.1对照品溶液的制备：取斯皮诺素对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含0.2mg的溶液，即得。2.2供试品溶液的制备2.2.1《中国药典》2015年版一部制备供试品方法：取本品粉末(过四号筛)约1g，精密称定，置索氏提取器中，加石油醚(60～90℃)适量，加热回流4小时，弃去石油醚液，药渣挥去溶剂，转移至锥形瓶中，加入70％乙醇20ml，加热回流2小时，滤过，滤渣用70％乙醇5ml洗涤，合并洗液与滤液，回收溶剂至干，残渣加甲醇溶解，转移至5ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。2.2.2快速溶剂萃取法(ASE)制备供试品方法：步骤S1：将酸枣仁样品粉碎，过筛，取1g与1g硅藻土混合均匀；步骤S2：将步骤1所得的混合物装于放有滤膜的10mlASE萃取池中，加硅藻土至与池口平行；步骤S3：用25ml正己烷萃取除杂，再用25ml甲醇萃取，用甲醇定容至50ml。2.3ASE萃取条件所述的除杂步骤的参数为：温度为80℃，时间为8min，次数为1次，冲洗体积为60％，吹扫时间为60s；所述的萃取步骤的参数为：温度为100℃，时间为8min，次数为1次，冲洗体积为60％，吹扫时间为60s。2.4色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂。HPLC法的检测参数为：色谱柱为ThermoAQ，1.7μm，50×2.1mm；柱温为40℃；流速为0.3mL/min；流动相为乙腈-水；检测波长为335nm。优选地，所述的流动相采用梯度洗脱的方法加入，其中具体的参数如下：洗脱总时间为30min；第0～10min，流动相中乙腈-水的体积比为12～19：88～81；第10～16min，流动相中乙腈-水的体积比为19～20：81～80；第16～22min，流动相中乙腈-水的体积比为20～100：80～0；第22～30min，流动相中乙腈-水的体积比为100：0。2.5测定法照高效液相色谱法(通则0512)测定；分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。2.6标准限值要求本品按干燥品计算，含斯皮诺素(C28H32O15)不得少于0.080％。2.7计算(外标法)式中：CR—对照品溶液浓度，单位为微克每升(mg/L)；AX—供试品的峰面积；AR—对照品峰面积。注意：使用前萃取池底部应拆卸清理干净，否则容易引起压力不稳；萃取池底部的滤纸应在密封圈内，否则引起渗漏；萃取池装样时松紧适中，太松容易导致提取液过多；开机前检查气瓶气压是否达到1Mpa；使用结束后清理干净，萃取池要及时晾干(容易生锈)。3、结果3.1线性关系步骤SS1：取斯皮诺素对照品，精密称定，加甲醇制成每1ml约含0.2mg的溶液，即得；步骤SS2：然后分别精密吸取该溶液0.1μl、0.5μl、1μl、1.5μl、2μl进入HPLC测定，并依照上述方法测定，结果详见表1；步骤SS3：以浓度(mg)-峰面积进行线性回归，详见图4；步骤SS4：求得回归方程：y＝6685.2191x-7.740本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种ASE‑HPLC法测定酸枣仁中斯皮诺素含量的方法,其特征在于,依次包括下述步骤:步骤1:采用ASE法对酸枣仁粉末进行萃取，其中所述的ASE法包括先用正己烷，再用甲醇萃取，并收集甲醇萃取液；步骤2：采用HPLC法对甲醇萃取液中的斯皮诺素含量。

【技术特征摘要】
1.一种ASE-HPLC法测定酸枣仁中斯皮诺素含量的方法,其特征在于,依次包括下述步骤:步骤1:采用ASE法对酸枣仁粉末进行萃取，其中所述的ASE法包括先用正己烷，再用甲醇萃取，并收集甲醇萃取液；步骤2：采用HPLC法对甲醇萃取液中的斯皮诺素含量。2.根据权利要求1所述的一种ASE-HPLC法测定酸枣仁中斯皮诺素含量的方法，其特征在于，所述的步骤1包括下述子步骤：步骤S1：将酸枣仁样品粉碎，过筛，取1g与1g硅藻土混合均匀；步骤S2：将步骤1所得的混合物装于放有滤膜的10mlASE萃取池中，加硅藻土至与池口平行；步骤S3：用25ml正己烷萃取除杂，再用25ml甲醇萃取，用甲醇定容至50ml。3.根据权利要求2所述的一种ASE-HPLC法测定酸枣仁中斯皮诺素含量的方法，其特征在于，步骤S3所述的除杂步骤的参数为：温度为80℃，时间为8min，次数为1次，冲洗体积为60％，吹扫时间为60s。4.根据权利要求2所述的一种ASE-HPLC法测定酸枣仁中斯皮诺素含量的方法，其特征在于，步骤S3所述的萃...

【专利技术属性】
技术研发人员：王丽丽，廖强，欧妮，韦日伟，陈学松，
申请(专利权)人：广西壮族自治区梧州食品药品检验所，
类型：发明
国别省市：广西,45