一种高效的人皮肤组织多能干细胞的制备方法技术

本发明专利技术公开了一种高效的人皮肤组织多能干细胞的制备方法，具体步骤为：包被瓶制备：包被瓶置4℃冰箱中保存备用；皮肤干细胞制备：取脸颊或下巴皮肤组织，去除脂肪组织；组织块置于无菌平皿中，过夜消化；对真皮层小块消化；将上述细胞悬液用过滤器过滤；留用贴壁细胞；培养箱中培养；用吸管反复吹打瓶底，使细胞脱落；将上述细胞按1:3的比例分瓶传代，继续培养，细胞传至2‑5代，即可。本发明专利技术具有细胞得率高、分化效率高等优点。

Method for preparing efficient human skin tissue pluripotent stem cell

The invention discloses a preparation method of high efficient human skin tissue of pluripotent stem cells, which comprises the following steps: coating bottle preparation: coated bottles of 4 DEG C and stored in the refrigerator for standby; skin stem cell preparation: cheek and chin skin, remove the fat tissue; sterile Petri dish, for the night digestive tissue block is placed on the dermis; small digestion; the cell suspension with filter retention; adherent cells; culture medium; Straw by repeated pipetting bottle, the cell loss; the cells according to the ratio of 1:3 bottle passage cultured cells to the 2 generation 5, can. The invention has the advantages of high cell yield and high differentiation efficiency.

【技术实现步骤摘要】
一种高效的人皮肤组织多能干细胞的制备方法
本专利技术涉及细胞工程领域，具体来说是一种高效的人皮肤组织多能干细胞的制备方法。
技术介绍
源于成人组织的多能干细胞是组织工程和再生医学领域的重要来源，其易于获得，而且具有广泛的医疗应用前景。尽管胚胎多能干细胞在再生医学领域具有极大的潜力，但由于异种细胞移植的伦理问题，使其在临床上的应有受到限制。诱导多能干细胞(iPS)是另一个潜在的来源，然而iPS细胞具有潜在的致癌性，也使其在临床应用变得困难起来。表皮干细胞是皮肤组织特异性干细胞，具有潜在多能性。其来源于胚胎的外胚层，有较原始的分化能力，具有非成熟细胞的特征，细胞体积小，细胞器少，处于静止状态，主要位于皮肤的基底细胞层，以及毛囊外根鞘隆突部。其具有多能性，可分化为神经细胞、脂肪细胞、软骨细胞等组织细胞。表皮干细胞在基因治疗、细胞治疗、组织工程中具有重要的研究和应用价值。关于表皮干细胞的研究研究已经成为生命科学和组织工程、再生医学领域研究的前沿之一。尽管皮肤干细胞是一种重要的来源，然而，随着年龄的增长，人皮肤中的干细胞却随之减少，其分化能力也逐渐减弱。近来，有研究发现，来源于人脸颊或下巴的皮本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种高效的人皮肤组织多能干细胞的制备方法，其特征在于：具体步骤为：一、包被瓶制备：(1)、将人Ⅳ型胶原溶解并用PBS稀释至0.1g/L制成包被液；(2)、取5ml包被液加入培养瓶中，平放，置4℃冰箱中过夜；(3)、弃上清，置于超净工作台中干燥；(4)、包被瓶置4℃冰箱中保存备用；二、皮肤干细胞制备：(5)、取脸颊或下巴皮肤组织，去除脂肪组织；(6)、将皮肤切成0.5mm×0.5mm的小块，用PBS冲洗三次；(7)、组织块置于无菌平皿中，真皮面朝下，用含有1U/ml中性蛋白酶Ⅱ的消化液，4℃，过夜消化；(8)、用眼科镊子分离表皮，并弃之，然后将真皮层切成1mm

【技术特征摘要】
1.一种高效的人皮肤组织多能干细胞的制备方法，其特征在于：具体步骤为：一、包被瓶制备：(1)、将人Ⅳ型胶原溶解并用PBS稀释至0.1g/L制成包被液；(2)、取5ml包被液加入培养瓶中，平放，置4℃冰箱中过夜；(3)、弃上清，置于超净工作台中干燥；(4)、包被瓶置4℃冰箱中保存备用；二、皮肤干细胞制备：(5)、取脸颊或下巴皮肤组织，去除脂肪组织；(6)、将皮肤切成0.5mm×0.5mm的小块，用PBS冲洗三次；(7)、组织块置于无菌平皿中，真皮面朝下，用含有1U/ml中性蛋白酶Ⅱ的消化液，4℃，过夜消化；(8)、用眼科镊子分离表皮，并弃之，然后将真皮层切成1mm3的小块；(9)、用含体积分数为0.5％Ⅰ型胶原酶的消化液，于37℃，对真皮层小块轻摇消化1h；(10)、再加入等量的DMEM/F12培养基，终止消化，再将细胞悬液以180g离心10min；(11)将上述细胞悬液用过滤器过滤，去除残余的组织块，调整细胞密度为1×105/ml；(12)、将上述细胞悬液接种于包被有Ⅳ型胶原的T25培养瓶中，置于37℃、5％CO2培养箱中，贴壁10-20min后，吸弃上清液，留用贴壁细胞；(13)、再向T25培养瓶中加入10ml细胞培养液，置于37℃、5％CO2的饱和湿度的培养箱中培养，每2-3天换液一次；(14)、细胞融合度达到80％以上后，吸干培养液，用PBS液轻洗细胞两次；(15)、培养瓶内加入体积分数为0.25％胰蛋白酶消化液...

【专利技术属性】
技术研发人员：韦玉军，陆宝石，李航，吴远航，苏军，
申请(专利权)人：安徽安龙基因医学检验所有限公司，
类型：发明
国别省市：安徽,34