一种中华鳖卵巢细胞分离及体外培养方法技术

本发明专利技术公开了一种中华鳖卵巢细胞分离及体外培养方法，包括以下步骤：(1)选取性未成熟的雌鳖，经灭菌后取出离体卵巢组织，将离体卵巢组织用磷酸盐缓冲液冲洗破碎后，置于容器中；(2)采用胶原酶和胰酶对冲洗后的离体卵巢组织先后进行消化处理，然后离心收集细胞；(3)将收集的细胞置于处理过的细胞培养容器中并加入完全培养基进行培养；(4)待细胞增殖铺满细胞培养容器底部后，用胰酶消化传代培养或冷冻保存，即获得中华鳖卵巢细胞。该方法步骤新颖、简洁方便、重复性强，能获得高成活率的中华鳖卵巢细胞系。

【技术实现步骤摘要】
一种中华鳖卵巢细胞分离及体外培养方法
本专利技术属于卵巢细胞分离及体外培养
，具体涉及一种中华鳖卵巢细胞分离及体外培养方法。
技术介绍
迄今为止，国内研究者尝试了龟鳖类动物各种体组织的细胞培养，包括胚胎原代细胞培养、龟的脑和肝脏、脾脏、肾脏及心脏等组织细胞的培养。其中除了心脏组织的纤维细胞培养获得了稳定的细胞系，其它组织细胞的培养基本培养不过10代就出现“自发转化”现象或衰退，进而细胞无法继续传代培养。即使是已获得稳定细胞系的心脏纤维细胞系，相对其它动物细胞系而言，同样是生长缓慢,对温度、传代时间等有较强的依赖性。无法获得生长良好的稳定的龟鳖动物细胞系主要是源于没有开发出适于龟鳖类细胞生长的细胞培养基及培育条件。龟鳖动物作为传统的滋补品，因为具有极高的药用、营养及观赏价值而被过度开发利用，以致其野生物种资源日益匮乏，甚至濒临灭绝。很多龟鳖动物，如黄喉拟水龟及鼋等其野生自然资源极为有限，已成为濒危保护物种。尽管通过多年努力及经验积累，已经在各种龟鳖类珍稀物种的人工繁育方面取得了突破性进展。然而国内外对这些物种的种质保存、细胞工程育种技术等方面的研究还极为有限，从而严重阻碍了这些物本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种中华鳖卵巢细胞分离及体外培养方法，其特征是包括以下步骤：(1)选取性未成熟的雌鳖，经灭菌后取出离体卵巢组织，将离体卵巢组织用磷酸盐缓冲液冲洗破碎后，置于容器中；(2)采用胶原酶和胰酶对冲洗后的离体卵巢组织先后进行消化处理，然后离心收集细胞；(3)将收集的细胞置于处理过的细胞培养容器中并加入完全培养基进行培养；(4)待细胞增殖铺满细胞培养容器底部后，用胰酶消化传代培养或冷冻保存，即获得中华鳖卵巢细胞。

【技术特征摘要】
1.一种中华鳖卵巢细胞分离及体外培养方法，其特征是包括以下步骤：(1)选取性未成熟的雌鳖，经灭菌后取出离体卵巢组织，将离体卵巢组织用磷酸盐缓冲液冲洗破碎后，置于容器中；(2)采用胶原酶和胰酶对冲洗后的离体卵巢组织先后进行消化处理，然后离心收集细胞；(3)将收集的细胞置于处理过的细胞培养容器中并加入完全培养基进行培养；(4)待细胞增殖铺满细胞培养容器底部后，用胰酶消化传代培养或冷冻保存，即获得中华鳖卵巢细胞。2.根据权利要求1所述的中华鳖卵巢细胞分离及体外培养方法，其特征是：步骤(1)中选取性未成熟的1～2冬龄雌鳖。3.根据权利要求1所述的中华鳖卵巢细胞分离及体外培养方法，其特征是：步骤(1)中灭菌处理时采用体积百分含量为60～90％的酒精。4.根据权利要求1所述的中华鳖卵巢细胞分离及体外培养方法，其特征是：步骤(2)中所述胶原酶的浓度为0.5～2mg/mL，所述胶原酶购自sigma公司，消化...

【专利技术属性】
技术研发人员：徐红艳，朱新平，李伟，
申请(专利权)人：中国水产科学研究院珠江水产研究所，
类型：发明
国别省市：广东,44