食品中B族维生素的检测方法技术

本发明专利技术公开了一种检测方法，具体涉及一种食品中B族维生素的检测方法。本发明专利技术食品中B族维生素的检测方法包括以下步骤：(1)将食品样品进行前处理，得到上样液；(2)采用HPLC‑MS/MS进行分析：采用HPLC‑MS/MS分别测定B族维生素标准溶液和步骤(1)得到的上样液，将上样液的测定结果与B族维生素标准溶液的测定结果进行比较，对食品样品中的B族维生素进行定性或定量。本发明专利技术B族维生素的分离度较高，分离效果较好；并且本发明专利技术检测B族维生素的灵敏度和准确度均较高、检出限较低，能同时用于食品中8种以上B族维生素的检测。

【技术实现步骤摘要】
食品中B族维生素的检测方法
本专利技术涉及一种检测方法，具体涉及一种食品中B族维生素的检测方法。
技术介绍
B族维生素是维持人体正常机能与代谢活动不可或缺的水溶性维生素，它在人体内无法自行制造合成，必须额外补充。然而紧张的生活、工作压力中，不当的饮食习惯或因某些特定药物的使用，以及B族维生素本身溶于水的属性，均会使人体内的B族维生素快速被消耗。中国2015年11月18日公开的专利(公布号：CN105067721A)报道了采用高效液相法测定B族维生素的方法，但其采用的检测器为紫外检测器，检测的灵敏度较低。
技术实现思路
本专利技术的目的在于克服上述现有技术的不足之处而提供一种灵敏度和准确度均较高的食品中B族维生素的检测方法，该方法能同时检测8种以上B族维生素。为实现上述目的，本专利技术采取的技术方案为：一种食品中B族维生素的检测方法，其包括以下步骤：(1)将食品样品进行前处理，得到上样液；(2)采用HPLC-MS/MS进行分析：采用HPLC-MS/MS分别测定B族维生素标准溶液和步骤(1)得到的上样液，将上样液的测定结果与B族维生素标准溶液的测定结果进行比较，对食品样品中的B族维生素进行定性或定量；HPLC-MS/MS进行分析时，HPLC的条件为：色谱柱为C18柱；流动相由水相和有机相组成，所述水相由水、甲酸和甲醇组成，且所述甲酸和甲醇与水的体积比均为0.1～0.3％；所述有机相由甲酸和甲醇组成，且所述有机相中，甲酸与甲醇的体积比为0.1～0.3％；在流速为0.5～0.6mL/min的条件下进行梯度洗脱；HPLC-MS/MS进行分析时，质谱检测的条件为：采用电喷雾离子源，检测器为三重四级杆串联质谱检测器。本专利技术检测食品中B族维生素时，由于分离过程中采用了特定的固定相和流动相，本专利技术B族维生素的分离度较高，分离效果较好。并且，流动相中加入的新型离子对试剂可以延长待测物质在色谱柱上的保留时间。同时，本专利技术采用三重四级杆串联质谱作为检测器，本专利技术检测B族维生素的灵敏度较高、检出限较低，具体地：维生素B1的检出限为0.005ug/mL，核黄素的检出限为0.001ug/mL，维生素B6的检出限为0.025ug/ml，维生素B12的检出限为0.025ug/mL，烟酸的检出限为0.020ug/mL，泛酸的检出限为0.007ug/mL，生物素的检出限为0.005ug/mL，叶酸的检出限为0.005ug/mL。本专利技术检测食品中B族维生素的准确度较高，且能同时用于食品中8种以上B族维生素的检测。作为本专利技术所述食品中B族维生素的检测方法的优选实施方式，所述水相中，甲酸和甲醇与水的体积比均为0.1％；所述有机相中，甲酸与甲醇的体积比为0.1％。在水相中加入甲酸，可提高离子化效率，从而提高仪器对目标物的检测灵敏度。作为本专利技术所述食品中B族维生素的检测方法的优选实施方式，所述流速为0.5mL/min；所述梯度洗脱的条件为：时间为0.01分钟时，流动相中水相的体积百分比为95％；时间为0.01-3分钟时，流动相中水相的体积百分比等速率递减，时间为3分钟时，流动相中水相的体积百分比为60％；时间为3-8.5分钟时，流动相中水相的体积百分比等速率递减，时间为8.5分钟时，流动相中水相的体积百分比为5％；时间为8.6～13分钟时，流动相中水相的体积百分比为95％。申请人研究了不同洗脱方式，并考察了多种梯度洗脱条件和多种流速，结果发现：在所述流速和洗脱条件下，B族维生素的分离效果是最好的。作为本专利技术所述食品中B族维生素的检测方法的优选实施方式，所述色谱柱的柱温为40℃。作为本专利技术所述食品中B族维生素的检测方法的优选实施方式，所述色谱柱的规格为150×4.6mm(即色谱柱的长为150mm，内径为4.6mm)，粒径为4μm。作为本专利技术所述食品中B族维生素的检测方法的优选实施方式，所述步骤(2)中，质谱检测时，离子化温度为450～550℃，且采用正离子化模式扫描。作为本专利技术所述食品中B族维生素的检测方法的优选实施方式，所述离子化温度为500℃。作为本专利技术所述食品中B族维生素的检测方法的优选实施方式，所述B族维生素包含维生素B1、核黄素、烟酸、泛酸、维生素B6、叶酸、生物素和维生素B12中的至少一种；所述B族维生素的检测参数如表1所示：表1作为本专利技术所述食品中B族维生素的检测方法的优选实施方式，所述步骤(1)中，食品样品为果泥或果粉时，前处理的方法为：按照每1克食品样品加入6～7.5mL盐酸溶液的比例，向食品样品中加入盐酸溶液，在避光的条件下，加热后进行离心，取上清液，用水稀释后，采用滤膜过滤，得到上样液；所述步骤(1)中，食品样品为奶粉时，前处理的方法为：按照每1克食品样品加入2～2.5mL水的比例，向食品样品中加入温度为35～45℃的水，溶解食品样品后，再加入无水乙醇，无水乙醇与水的体积比为2:1，振荡后离心，取上清液，进行稀释或者浓缩后用滤膜过滤，得到上样液。采用上述前处理方法，能较好地提取食品样品中的B族维生素，且提取效率较高。上述滤膜过滤的目的是除蛋白；食品样品为奶粉时，若样品中B族维生素的含量较高，进行稀释后用滤膜过滤；若样品中B族维生素的含量较低，进行浓缩后用滤膜过滤，例如采用氮吹浓缩。作为本专利技术所述食品中B族维生素的检测方法的优选实施方式，所述滤膜的孔径为0.22μm。作为本专利技术所述食品中B族维生素的检测方法的优选实施方式，所述盐酸溶液中盐酸的浓度为0.1mol/L；所述食品样品为果泥或果粉时，加热的温度为90℃，加热的时间为45分钟。与现有技术相比，本专利技术的有益效果为：本专利技术检测食品中B族维生素时，由于分离过程中采用了特定的固定相和流动相，本专利技术B族维生素的分离度较高，分离效果较好。并且，流动相中加入的新型离子对试剂可以延长待测物质在色谱柱上的保留时间。同时，本专利技术采用三重四级杆串联质谱作为检测器，本专利技术检测B族维生素的灵敏度较高、检出限较低。本专利技术检测食品中B族维生素的准确度较高，且能同时用于食品中8种以上B族维生素的检测。附图说明图1为本专利技术B族维生素的质谱扫描图。其中，B1表示维生素B1，B2表示核黄素，B3表示烟酸，B5表示泛酸，B6表示维生素B6，B7表示生物素，B9表示叶酸，B12表示维生素B12。具体实施方式为更好地说明本专利技术的目的、技术方案和优点，下面将结合具体实施例对本专利技术作进一步说明。实施例中所用到的试剂如下：实验用水为符合GB/T6682规定的一级水；甲醇和甲酸均为色谱纯；氨水的浓度为25％(分析纯)；盐酸和无水乙醇均为分析纯。实施例中所用到的标准品如下：维生素B1(盐酸硫胺素，纯度99.5％)、维生素B2(核黄素，纯度99.5％)、维生素B6(吡哆胺，纯度100.0％)、维生素B12(钴胺素，纯度99.5％)、维生素B3(烟酸，纯度99.5％)、维生素B5(泛酸，纯度99.5％)、维生素B7(生物素，纯度99.5％)、维生素B9(叶酸，纯度99.5％)标准品，所述标准品均为Sigma公司产品。实施例中溶液配制方法如下：甲酸与甲醇的体积比为0.1％的有机相：往500mL甲醇中加入0.5mL甲酸，混匀；甲酸和甲醇与水的体积比均为0.1％的水相：往500mL水中加入0.5mL甲酸和0.5mL甲醇，混匀；10％的甲醇本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种食品中B族维生素的检测方法，其特征在于：包括以下步骤：(1)将食品样品进行前处理，得到上样液；(2)采用HPLC‑MS/MS进行分析：采用HPLC‑MS/MS分别测定B族维生素标准溶液和步骤(1)得到的上样液，将上样液的测定结果与B族维生素标准溶液的测定结果进行比较，对食品样品中的B族维生素进行定性或定量；HPLC‑MS/MS进行分析时，HPLC的条件为：色谱柱为C18柱；流动相由水相和有机相组成，所述水相由水、甲酸和甲醇组成，且所述甲酸和甲醇与水的体积比均为0.1～0.3％；所述有机相由甲酸和甲醇组成，且所述有机相中，甲酸与甲醇的体积比为0.1～0.3％；在流速为0.5～0.6mL/min的条件下进行梯度洗脱；HPLC‑MS/MS进行分析时，质谱检测的条件为：采用电喷雾离子源，检测器为三重四级杆串联质谱检测器。

【技术特征摘要】
1.一种食品中B族维生素的检测方法，其特征在于：包括以下步骤：(1)将食品样品进行前处理，得到上样液；(2)采用HPLC-MS/MS进行分析：采用HPLC-MS/MS分别测定B族维生素标准溶液和步骤(1)得到的上样液，将上样液的测定结果与B族维生素标准溶液的测定结果进行比较，对食品样品中的B族维生素进行定性或定量；HPLC-MS/MS进行分析时，HPLC的条件为：色谱柱为C18柱；流动相由水相和有机相组成，所述水相由水、甲酸和甲醇组成，且所述甲酸和甲醇与水的体积比均为0.1～0.3％；所述有机相由甲酸和甲醇组成，且所述有机相中，甲酸与甲醇的体积比为0.1～0.3％；在流速为0.5～0.6mL/min的条件下进行梯度洗脱；HPLC-MS/MS进行分析时，质谱检测的条件为：采用电喷雾离子源，检测器为三重四级杆串联质谱检测器。2.如权利要求1所述的食品中B族维生素的检测方法，其特征在于：所述水相中，甲酸和甲醇与水的体积比均为0.1％；所述有机相中，甲酸与甲醇的体积比为0.1％。3.如权利要求1所述的食品中B族维生素的检测方法，其特征在于：所述流速为0.5mL/min；所述梯度洗脱的条件为：时间为0.01分钟时，流动相中水相的体积百分比为95％；时间为0.01-3分钟时，流动相中水相的体积百分比等速率递减，时间为3分钟时，流动相中水相的体积百分比为60％；时间为3-8.5分钟时，流动相中水相的体积百分比等速率递减，时间为8.5分钟时，流动相中水相的体积百分比为5％；时间为8.6～13分钟时，流动相中水相的体积百分比为95％。4....

【专利技术属性】
技术研发人员：焦红，胡烨敏，刘笑笑，
申请(专利权)人：广州市宜健医学技术发展有限公司，
类型：发明
国别省市：广东,44