一种抑制狭窄和／或复发性狭窄的方法，包括给患者以有效剂量的对糖蛋白Ⅱｂ／Ⅲａ和α↓［ｖ］β↓［３］玻连蛋白受体为特异性的化合物。（*该技术在2016年保护过期，可自由使用*）
【技术实现步骤摘要】
本专利技术所属技术领城在凝血块的形成过程中，血小板的凝聚起着主导作用，在正常的情况下，凝血块是为了防止血细胞从血管中漏出。但是，在某些病状下，凝血块会限制或者完全地阻止血液的流通，导致细胞坏死。例如，在动脉粥样化的位点发生的血小板凝聚及其随后形成的血栓是形成众多疾病，例如，心胶痛、急性心肌梗塞以及在成功地进行了凝血溶解和血管成形后的再次阻塞的重要原因。急性心脏病患者一般都接受溶血制剂，例如组织血纤维蛋白溶酶原激活因子和链激酶的治疗，这些制剂将溶解凝血中的血纤维蛋白。与血纤维蛋白作用相伴随的主要的并发症是血小板凝聚所引发的再次闭塞，它还能够造成心脏的进一步受损。由于糖蛋白(GP)IIb/IIIa受体是已知的引起血小板凝聚的主要因素，那么，封闭这些受体的制剂就被认为是能够减少甚至完全防止在凝血溶解治疗后的再次闭塞并从而提高溶血的速率。这些制剂还被认为是可以用在其它的血管闭塞性和血栓栓塞的疾病中。封闭血小板凝聚的一种方法是使用对GPIIb/IIIa受体为特异性的单克隆抗体。在欧洲专利申请第205,207和206,532号中，揭示了鼠单克隆抗体，命名为7E3，该抗体抑制血小板的凝聚并表现为可用于治疗人的血栓疾病。已知的是鼠单克隆抗体具有的某些特性能够严重地限制它们在人体治疗中的应用。作为外源性蛋白，鼠抗体能够刺激那些降低或者损害其治疗效率和/或在患者身上引起变应性和过敏性反应的免疫反应。在血栓栓塞疾病中，需要重复使用这些治疗制剂，因而就会提高这类免疫反应的发生率。包括非人体来源的结合区与人体来源的恒定区的嵌合性抗体已被提出并被认为是消除鼠抗体的这些免疫反应的一种措施，见Proc.Natl.Acad.Sci.USA，(81)6851(1984)和PCT申请NO.PCT/GB85 00392。由于恒定区主要负责抗体分子的免疫反应性，那么带有人体来源的恒定区的嵌合性抗体就被推测为很少引起人体的抗鼠反应。然而，无法预测的是把人体来源的恒定区与具有所需要的特异性的鼠结合区相结合是否一定能够使所得到的嵌合性抗体的免疫反应被降低和/或改善其结合能力(例如，免疫致病性的程度和/发生次数)。与本专利技术相关的
技术介绍
本专利技术涉及包括有非人体来源可变区或抗原结合区与人体来源恒定区的血小板特异性嵌合免疫球蛋白。这种嵌合免疫球蛋白可以是对GPIIb/IIIa受体或其它血小板成分为特异性的。这些抗体可与血小板结合并且防止血小板凝聚，从而用作抗血栓剂使用在防止或降低在各种临床情况下(例如，溶解血栓治疗之后以及伴随着血管成形术)发生的血管闭塞及复发性闭塞和在防止血管狭窄及重复性狭窄之中。在另一个实施方案中，与GPIIb/IIIa和玻连蛋白受体相结合的试剂被用于减少和防止堵塞、复发性堵塞(例如，急性堵塞)、狭窄和/或重复性狭窄。本专利技术的抗血小板抗体还可以用于造影。附图的简要说明附图说明图1是使用克隆化的可变区作为探针对7E3单克隆抗体的mRNA的重链和轻链的Northern分析。图2A和2B是质粒β7E3VKhCK(图2A)和p7E3VHhCG4(图2B)，它们各自带有对嵌合性7E3免疫球蛋白的轻链和重链进行编码的嵌合性基因结构。图3是由载体p7E3VKhCK和p7E3VHhCG4编码的嵌合性7E3免疫球蛋白与血小板的结合。图4是嵌合性7E3(c7E3)免疫球蛋白对血小板凝聚的抑制。图5是说明血浆抗体浓度(ng/Ml)对时间(天数)的点阵图解，表明在三位长期冠心病患者接受5分钟静脉渗透0.20-mg/kg剂量的c7E3 Fab后，c7E3 Fab(γ1，κ)的迅速从血浆中消失的速度。图6A-6C是在使用了抗体(γ1，κ)两小时后一次施给嵌合性7E3Fab(0.15mg/kg，0.20mg/kg或0.25mg/kg)浓缩药丸对血小板活性的效果的总结。当对受体封闭(图6A)，血小板凝聚(图6B)，和失血时间(图6C)进行分析后，这些剂量对血小板活性的作用得到证实，其中的线条是平均值。图7A-7C表明在进行血管成形术之前以0.25mg/kg浓缩药丸剂量给药c7E3 Fab(γ1，κ)的抗血小板效果的作用时间。其中的线条表明的是在基线上时间为0至第24小时的受体封闭(图7A)，血小板凝聚(图7B)，和失血时间(图7C)的平均值。图8A-8C总结的是在11位患者中按0.25mg/kg浓缩药丸剂量给药，然后再进行12小时c7E3 Fab(γ1，κ)的连续渗透(10μg/分)的抗血小板活性。其中的线条表明的是受体封闭百分度(图8A)，给药前的血小板凝聚百分度(基线上的零点)(图8B)，和失血时间(图8C)的平均值。图9是在实施例4中对47位患者进行渗透后的从基点到24小时的血细胞比容的绝对变化值。图10是表明对三组接受治疗的人员进行随机处理后，不需要进行紧急重复经皮血管治疗的概率的Kaplan-Meier点阵图。图11是对接受治疗的人员中的关键组(图中右侧)的优势比例和95％的置信区间的图示。其中的数据表示主要效率终点。此外，对每一亚组的主要终点的绝对事件比率在左侧例表给出。图12给出的是所有患者中在6个月追踪期不发生事件的分数。图13表示的是在那些接受了成功的治疗之后30天没有发生事件的患者之中的在随后6个月追踪期内不发生事件的患者的分数。图14表示的是在接受了成功的初期治疗后48小时没有发生事件的患者在随后6个月追踪期内不发生事件的患者的分数。图15表明的是在所有的患者中在随后6个月追踪期内不需对与治疗有关的动脉(PRA，治疗有关的动脉)进行血管再造的患者的分数。图16表明的是125I-c7E3 Fab与未刺激的HUVEC的结合饱和度。该饱和数据被用于产生在图17A-17E中的点阵图(Scatchardplots)。图17A-17E显示了对125I-c7E3 Fab与未刺激的HUVEC的结合饱和度的点阵图(Scatchard plots)(图17A)；HUVEC被用50单位/ml的TNFα刺激24小时(图17C)；在不含血清的培养基中的未被刺激的HUVEC(图17D)；未被刺激的HUVEC在有0.02％叠氮化物存在来防止抗体的加冒和内化(图17E)。HUVEC用提高浓度的125I-c7E3 Fab培养，存在有或不存在100倍过量的冷c7E3 Fab来限定非特异性结合。结合的125I-c7E3 Fab为横坐标，被游离抗体除过的结合数量为纵坐标。曲线的线性回归得到的公式在图中给出。直线(-)的斜率被定为Ka值。与Y轴的交叉是BMAX或最大抗体结合量。每一个图中的数据点都是三份重复实验的平均值。图18显示125I-LM609与内皮细胞结合的点阵图(Scatchardanalysis)HUVEC用提高了浓度的玻连蛋白受体-特异性抗体125I-LM609培养，存在有或不存在有100倍过量的冷c7E3 Fab来限定非特异性的结合。结合的125I-LM609为横坐标，被游离抗体除过的结合数量为纵坐标。曲线的线性回归得到了公式Y＝1.0831e+10-1.2188e+9x R2＝0.888。直线(-)的斜率被定为K值。与Y轴的交叉是BMAX或最大抗体结合量。每一个图中的数据点都是三份重复实验的平均值。图19显示了抗体与125I-c7E3 Fab对内皮细本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：巴瑞·S·科勒，大卫·M·奈特，
申请(专利权)人：森特克公司，纽约州立大学研究基金会，
类型：发明
国别省市：
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