一种深海细菌木糖苷酶CmXynB1及其表达纯化、晶体结构和应用制造技术

本发明专利技术涉及生物技术领域，具体为一种深海细菌木糖苷酶CmXynB1及其表达纯化、晶体结构和应用。本发明专利技术涉及木糖苷酶基因CmXynB1来自深海细菌E4A9

【技术实现步骤摘要】
一种深海细菌木糖苷酶CmXynB1及其表达纯化、晶体结构和应用
本专利技术涉及生物
，具体涉及一种深海细菌蛋白木糖苷酶及其表达纯化、晶体结构和在糖苷类药物制备、工业酶制剂中的应用。
技术介绍
木糖苷酶(xylosidaseEC3.2.1.37)广泛存在于微生物中，能够催化低木聚糖降解为木糖等小分子，对纤维素和半纤维素的降解有重要意义。木糖苷酶具有许多优良的特性，例如能够催化糖苷的水解以改进糖苷类药物的制备工艺，能够在一定的酸性条件下保持较高的活性等，使得木糖苷酶在工业生产中成为重要的催化剂。木糖苷酶可广泛应用于药物制备、食品加工及食品风味改良、废水处理、造纸工业等领域。海洋来源的糖苷酶通常具有与海洋环境相关的优良性质，例如温度稳定性、耐盐性、耐低温等等，因此，从海洋微生物中筛选出独具特性的糖苷酶就成了糖苷类药物制备及开发新型工业酶制剂的一个重要方向。本专利技术利用结晶的方法得到了木糖苷酶CmXynB1的晶体结构并进行了分析。CmXynB1晶体结构可在手性药物前体筛选、工业酶制剂中底物改造及提高酶活方面具有广泛的应用前景。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种来源于深海细菌宏基本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种来源于深海细菌宏基因组的木糖苷酶CmXynB1，其特征在于，含有485个氨基酸，分子量为53.35kDa；其核苷酸序列如SEQ.ID.NO.1所示。

【技术特征摘要】
1.一种来源于深海细菌宏基因组的木糖苷酶CmXynB1，其特征在于，含有485个氨基酸，分子量为53.35kDa；其核苷酸序列如SEQ.ID.NO.1所示。2.一种如权利要求1所述的来源于深海细菌宏基因组的木糖苷酶CmXynB1的表达和纯化方法，其特征在于，包括：构建融合未突变的CmXynB1全长基因的重组载体，用该载体转化大肠杆菌，从而表达带有标签的融合蛋白CmXynB1，将上述获得的蛋白通过特异性的与所述特异标签识别的方法分理处目的蛋白，再过凝胶过滤层析的方法得到高纯度的CmXynB1的蛋白；其中，扩增木糖苷酶全基因的上游引物为：CmXynB1F(5’-GGCGGATCCATGACTTCAGACCTTATCGCGAAGCTG-3’，BamHI)下游引物为：CmXynB1R(5’-AAACTCGAGCTACGATGACACACGCGTTATCTCGAT-3’，XhoI)；表达质粒为pET28b，转化方法为CaCl2转化法，转化菌株为大肠杆菌DH5α，表达菌株为大肠杆菌BL21(DE3)plus。3.一种如权利要求1所述的来源于深海细菌宏基因组的木糖苷酶CmXynB1的结晶方法，其特征在于，具体步骤为：将木糖苷酶CmXynB1浓缩至3-15mg/ml，在4-30℃下用气相扩散法筛选晶体生长条件，同时，加入适量底物β-对硝基苯酚木糖苷进行共结晶。4.一种如权利要求1所述的来源于深海细菌宏基因组的木糖苷酶CmXynB1的晶体三维结构，其特征在于，所述晶体三维结构中的原子表中至少40%的原子坐标，或者至少40%氨基酸的主链碳骨架的原子结构坐标与表1中的坐标的平均根方差小于或等于1.8Å。5.根据权利要求5所述的木糖苷酶CmXynB1的晶体三维结构，其特征在于，分辨率为1.8Å；其中，晶体结构空间群为P21，一个不对称单位仅有两个分子；晶胞参数为：a＝48.91Å，b＝95.91Å，c＝100.91Å，α＝γ＝90°，β＝98.71°。6.根据权利要求2所述的木糖苷酶CmXynB1的晶体三维结构，其特征在于，由22个β折叠和8个α螺旋组成；其中，8个β折叠位于中心，10个α螺旋围绕在β折叠的周围,其余的β折叠在C末端形成一个发夹结构；其中，β折叠1，即含Leu5-Ala13的氨基酸区段，β折叠2，即含Gly18...

【专利技术属性】
技术研发人员：李继喜，申彦芳，梅谱成，
申请(专利权)人：复旦大学，
类型：发明
国别省市：上海,31