The invention discloses a fast and efficient mutation associated with corneal dystrophy gene mutation detection method: step 1. preparation of DNA template and primer design: artificial synthesized respectively containing 4 mutations of the TGFBI gene fragment for detecting mutations detection efficiency. At the same time we designed respectively according to the normal locus and mutation specific primer, and the corresponding reverse primers, 3 primer combinations were formed in pre mixed solution; in addition, two forward primer 5'end are respectively connected with a different sequence of primers, used for fluorescence detection; the steps of establishing 2.PCR detection system; step 3. the interpretation of the results. Compared with the prior art, the technique has the advantages of accurate and reliable detection results, high flux, flexible experimental design, simple and convenient operation, fast detection speed, easy popularization and low cost.
【技术实现步骤摘要】
一种快速高效的与角膜营养不良相关基因突变位点的检测方法
本专利技术属于基因检测
,具体为通过定量PCR与等位基因特异性扩增相结合的方法,对角膜营养不良相关的4个突变位点进行检测。
技术介绍
角膜营养不良(Cornealdystrophies,CDS)是一种少见的具有遗传性和双眼原发性的病理组织特征改变的疾病。在临床上,该类疾病通常是由于角膜基质中的不溶性物质沉积混浊,进一步导致视力障碍。临床医学研究发现,角膜营养不良的多种病理特征与转化生长因子β诱导的分泌蛋白基因(transforminggrowthfactorβ-induced,TGFBI)相关。目前,在TGFBI基因上已经发现有50多个不同的突变位点与多种类型的角膜营养不良相关,包括I型颗粒状角膜营养不良(granularcorneadystrophytypeI,GCD1)、II型颗粒状角膜营养不良(granularcorneadystrophytypeII,GCD2)、I型晶格类型角膜营养不良(latticecornealdystrophytypeI,LCD1)、异型晶格类型角膜营养不良(variantLCD)、Thiel-Behnke角膜营养不良、Reis-Buckler角膜营养不良和上皮基底膜角膜营养不良(epithelialbasementmembranecornealdystrophy)。在目前发现的TGFBI基因突变中,存在有4个热点突变位点与II型颗粒状角膜营养不良相关,分别为371G>A(p.Arg124His)、1526T>C(p.Leu509Arg)、1649T& ...
【技术保护点】
一种快速高效的与角膜营养不良相关基因突变位点的检测方法,其步骤如下:步骤1.突变DNA模板制备和引物设计:人工分别合成了含有4个突变位点的TGFBI基因片段,用于检测突变位点的检出效率。同时我们设计了分别针对正常位点和突变位点的特异性扩增引物(两个引物仅末端碱基不同,分别用F1和F2表示),以及相对应的反向引物(R表示),3个引物组合形成引物预混液;此外,两条正向引物5'端分别连接有不同的检测引物序列,用于荧光检测;步骤2.PCR检测体系的建立;步骤3.结果判读。
【技术特征摘要】
1.一种快速高效的与角膜营养不良相关基因突变位点的检测方法,其步骤如下:步骤1.突变DNA模板制备和引物设计:人工分别合成了含有4个突变位点的TGFBI基因片段,用于检测突变位点的检出效率。同时我们设计了分别针对正常位点和突变位点的特异性扩增引物(两个引物仅末端碱基不同,分别用F1和F2表示),以及相对应的反向引物(R表示),3个引物组合形成引物预混液;此外,两条正向引物5'端分别连接有不同的检测引物序列,用于荧光检测;步骤2.PCR检测体系的建立;步骤3.结果判读。2.如权利要求1所述的一种快速高效的与角膜营养不良相关基因突变位点的检测方法,其特征在于:具体4个位点的引物序列如下:TGFBI-371G-AF1:5′-GAAGGTGACCAAGTTCATGCTCACTCAGCTGTACACGGACCG-3′F2:5′-GAAGGTCGGAGTCAACGGATTCACTCAGCTGTACACGGACCA-3′R:5′-CCCCTCCATCTCAGGCCTCA-3′TGFBI-1526T-CF1:5′-GAAGGTGACCAAGTTCATGCTACCTAAAGCGATTGTCTCCCTTCA-3′F2:5′-GAAGGTCGGAGTCAACGGATTACCTAAAGCGATTGTCTCCCTTCG-3′R:5′-CAATGGGGACTGTC...
【专利技术属性】
技术研发人员:李好勋,莫维克,
申请(专利权)人:北京亿昊基因技术有限公司,
类型:发明
国别省市:北京,11
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