灵芝糖肽产品及其生产方法和用途技术

本发明专利技术公开了一种灵芝糖肽产品及其生产方法和用途。本发明专利技术属于真菌功能产品开发领域，特别是涉及灵芝糖肽产品及其生产方法。本发明专利技术的灵芝糖肽产品中糖肽含量占２０－４０％，其余部分为灵芝多糖。本发明专利技术产品可以做成胶囊或片剂形式。灵芝糖肽产品生产方包括：发酵液的培养，外加酶酶解，灭酶，均质处理，浓缩，醇沉，沉淀物溶解，膜过滤，喷雾干燥。本发明专利技术产品在防治肿瘤方面具有良好的用途。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于真菌功能产品开发领域，特别是涉及灵芝糖肽产品及其生产方法。
技术介绍
灵芝，又称灵芝草，属担子菌亚门、多孔菌目、灵芝科、灵芝属。历代的医典把灵芝归位于“上上药”，其排位在人参之前。《神农本草经》、《本草纲目》记载，灵芝可明目、补肝气、安神、益精、益心气、益脾气、益肺气、益肾气、通九窍、耳聪、目明、利关节、利尿、养颜美容，是上好的滋补佳品。灵芝糖肽是一类以灵芝多糖结构为主连接有多肽、氨基酸的大分子物质，灵芝糖肽主要存在于灵芝菌子实体、菌丝体和发酵液中。灵芝糖肽是灵芝菌生长过程中代谢形成的生物活性物质。灵芝糖肽能促进蛋白质、核酸的合成，对血清、肝脏及骨髓细胞蛋白质或核酸的更新、合成有促进作用，它是灵芝扶正固本的主要有效成分之一。灵芝糖肽的功能性与其分子量有一定的关系。灵芝糖肽结构中的多糖分子为分支结构，糖苷键以β-1，4键为主，β-1，6键为辅。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种灵芝糖肽产品及其生产方法和用途。本专利技术的灵芝糖肽产品组成为分子量分布在2000DA以上。糖肽含量占20-40％，其余部分为灵芝多糖。本专利技术产品可以做成胶囊或片剂形式。本专利技术灵芝糖肽产品生产方法概述如下(1)发酵液的获得采用斜面菌种逐级扩培获得灵芝真菌液体深层发酵液；(2)外加酶酶解将步骤(2)中得到的发酵液分别调整温度和pH，使温度为45～65℃，pH为5～7，发酵液中加入混合酶，混合酶与发酵液的重量百分比为0.03～0.05％，混合酶按重量百分比组成为纤维素酶30～60％、其余为β-葡聚糖酶，酶解时间0.3～3小时，酶解过程中不断搅拌；(3)灭酶酶控制反应结束后，将发酵液升温到90～95℃，保持10～30分钟，进行灭酶；(4)均质处理将发酵液输送给胶体磨，调整胶体磨定子与转子的间隙为10～50微米，对发酵液中菌丝体进行破碎，胶体磨流量为1～5吨/小时；再经高压均质机处理，调整高压均质机压力为20～60Mpa，高压均质流量为0.5～3吨/小时，显微镜镜检菌丝体破壁率为100％； (5)浓缩将发酵液浓缩至原体积的1/5～1/10，浓缩所用方法可以是单效、多效真空浓缩和冷冻浓缩；(6)醇沉向浓缩滤液中加入70～100％的乙醇进行醇沉，其体积比为1∶3～4，处理时间14小时；(7)沉淀物溶解沉淀物加热水溶解。(8)膜过滤采用2000DA膜进行过滤，收集2000DA以上的组分。(9)喷雾干燥将上述收集的滤液通过喷雾干燥得到干粉。本专利技术中灵芝真菌液体深层发酵液的培养见徐锦堂编《中国药用真菌学》。本专利技术中灵芝真菌保藏于中国工业微生物菌种保藏中心，菌种分别为cicc14025，cicc14028，cicc14029. 本专利技术中采用酶解处理工艺有效的实现了灵芝糖肽中大分子糖链的切割，有效提高了产物中高活性糖肽的含量。本专利技术中得到的灵芝糖肽干粉可以原料、胶囊或片剂形式存在。本专利技术在培养得到的灵芝真菌发酵液的基础上，巧妙地利用外加的混合酶在适宜的条件下对真菌发酵液进行酶解，酶解后经过提取分离得到含量在20-40％的灵芝糖肽粗产品，其余部分为灵芝多糖。本专利技术中采用高压均质工艺实现了菌丝体功能因子的高效溶出和完全利用。本专利技术中灵芝糖肽的检测主要采用电泳和苯酚硫酸测定法，具体测定方法见举例本专利技术产品在抑制肿瘤细胞繁殖方面效果显著。实验结果见具体举例。具体实施例方式下面的实施例可以使本专业技术人员更全面地理解本专利技术，但不以任何方式限制本专利技术。实施例110吨发酵液生产灵芝糖肽方法(1)采用斜面菌种逐级扩培获得灵芝液体深层发酵液将灵芝斜面菌种接入装有100毫升培养基的500毫升摇瓶中进行一级种子培养，培养条件旋转式摇床150转/分，28℃培养50小时。然后将一级摇瓶种子以10％接种量接入装有100毫升培养基的500毫升摇瓶中进行二级种子培养，按照与一级摇瓶相同的条件进行培养。然后再以10％的接种量将二级种子转接入装有1000毫升培养基的5000毫升摇瓶中进行三级种子培养，培养条件旋转式摇床180转/分，28℃培养50小时。然后再以10％的接种量把三级种子接入装有0.1吨发酵培养基的总容积为0.15吨的一级种子罐。培养条件为培养温度28℃，搅拌速度150转/分，通风量(V/V)1∶0.5，罐压0.05Mpa，培养48小时。同样将一级种子罐的菌液以10％的接种量转接入装有1吨发酵培养基的总容积为1.5吨二级种子罐中，二级种子罐与一级种子罐的培养条件相同。最后以10％的接种量将二级种子罐种子接入装有10吨发酵培养基的总容积为15吨的发酵罐中。发酵罐培养温度28℃，搅拌速度100转/分，通风量(V/V)1∶0.5，罐压0.05Mpa，培养120小时。(2)外加酶酶解在55℃，pH为6的条件下，向经步骤(1)得到的10吨发酵液中加入纤维素酶1.5公斤，β-葡聚糖酶1.5公斤。酶解时间3小时，酶解过程中开启搅拌；(3)灭酶外加酶酶解结束后，将发酵液升温到95℃，30分钟，进行灭酶；(4)均质处理将发酵液输送给胶体磨，调整胶体磨定子与转子的间隙为30微米，对发酵液中菌丝体进行破碎，胶体磨流量为3吨/小时；再经高压均质机处理，调整高压均质机压力为40Mpa，高压均质流量为2吨/小时，显微镜镜检菌丝体破壁率为100％；(5)浓缩减压浓缩滤液体积到1吨；(7)醇沉加入3.8吨95％的乙醇，醇析14小时；(8)沉淀物溶解沉淀物加热水溶解。(9)膜过滤采用2000DA的膜进行过滤，收集2000DA以上的组分。(10)喷雾干燥将上述收集的滤液通过喷雾干燥得到干粉。本产品中灵芝糖肽含量在30％，其余部分为灵芝多糖。本专利技术中灵芝菌种购于中国工业微生物菌种保藏管理中心，菌号CICC 14025。本例中斜面培养基组成马铃薯(煮汁)20％，葡萄糖2％，磷酸二氢钾0.2％，硫酸镁0.10％，琼脂2.0％。本例中各级种子和发酵生产所用培养基组成为蔗糖4％，葡萄糖2％，蛋白胨0.5％，脱脂大豆蛋白粉2.0％，磷酸氢二钾0.2％，硫酸镁0.1％，维生素B12PPm，PH6.0。实施例2(发酵液10吨)10吨发酵液生产灵芝糖肽方法(1)发酵液的制备方法同例1。(2)外加酶酶解在55℃，pH为6的条件下，向经步骤(1)得到的10吨发酵液中加入纤维素酶2公斤，β-葡聚糖酶1.5公斤。酶解时间3小时，酶解过程中开启搅拌；(3)灭酶外加酶酶解结束后，将发酵液升温到95℃，30分钟，进行灭酶；(4)均质处理采用均质机和胶体磨依次处理发酵液，对菌丝体细胞壁进行破壁处理；调整胶体磨定子与转子的间隙为0.5微米，利用其剪切力作用对发酵液中的菌丝体进行一级破壁处理，胶体磨流量为0.3吨/小时，使破壁后的菌丝体颗粒度为0.4微米的占70％；然后采用破碎粒度在0.3微米的高压均质机，利用其高压释放力、空穴效应、剪切等力的作用，对发酵液中的菌丝体进行超微破壁，调整高压均质机压力为80Mpa，高压均质流量为0.4吨/小时，使处理后物料粒度为60纳米的占80％；(5)浓缩减压浓缩滤液体积到1吨；(7)醇沉加入3.8吨95％的乙醇，醇析14小时；(8)沉淀物溶解沉淀物加热水溶解。(9)膜过滤采用5000DA和70000DA的膜进行过滤，收集5000DA和70000DA之间的组分。(10)喷雾干燥将上述收集本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种灵芝糖肽产品，其特征在于所述灵芝糖肽产品分子量在２０００ＤＡ以上，其中灵芝糖肽含量占２０－４０％。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：蔡永峰，岳国海，李绩，张贵林，
申请(专利权)人：中国食品发酵工业研究院，
类型：发明
国别省市：11[中国|北京]