一株赤潮藻裂解细菌YWL1及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一株赤潮藻裂解细菌YWL1及其应用，特点是该细菌为YWL1株，分类命名为海杆菌，于2015年5月25日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.10857，用于抑制中肋骨条藻、产毒圆海链藻和塔玛亚历山大藻生长并杀死这些赤潮藻，优点是可安全、高效、快速、特异性的降解海水中中肋骨条藻、产毒圆海链藻和塔玛亚历山大藻，使中肋骨条藻叶绿素a浓度减少率分别达76.14%，使产毒圆海链藻和塔玛亚历山大藻藻液的OD680减少65.38%和57.25%，控藻效果明显。

Red tide algae lytic bacterium YWL1 and application thereof

The present invention discloses a strain of algae lysis bacteria YWL1 and its application, is characterized in that the bacteria YWL1 strain, named py97s classification in May 25, 2015, preserved in general microbial center China microbe preservation management committee, the preservation number is CGMCC No.10857, for the inhibition of Skeletonema costatum, toxigenic diatoms and Tamar. Alexander algae and kill the algae, has the advantages of safety, high efficiency, degradation of seawater can be rapid and specific in Skeletonema costatum, toxigenic diatoms and Tamar Alexander algae, the Skeletonema costatum chlorophyll a concentration reduction rate reached 76.14%, the toxigenic diatoms and Tamar Alexander algae liquid OD680 decreased by 65.38% and 57.25%, algae control effect is obvious.

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及环境微生物领域，尤其是涉及一株具有溶藻活性的赤潮藻裂解细菌YWL1及其应用。
技术介绍
在海洋和淡水水体中，由于富营养化程度的加剧，藻类过量繁殖形成赤潮和水华，从而影响和改变水体的理化性质，并且能直接或间接引起食藻动物的大量死亡。传统的治理方法如机械除藻，高频电磁脉冲以及利用除草剂等方法，常受到成本和环境安全性问题等诸多因素的限制。相比之下，生物控藻技术成本低、安全性好，其中溶藻细菌因其较高的除藻性能，成为防治赤潮和水华的一个新方向。所谓溶藻细菌（algae-lysingbacteria），是一类以直接或间接方式抑制藻类生长、或杀死藻类、溶解藻细胞的细菌的统称。1924年，Ceitler报道一种黏细菌Polyangiumparasitium寄生在刚毛藻（Cladophora）上，使其死亡。国内外文献中报道的溶藻细菌有：黏细菌、噬胞菌属、弧菌、腐生螺旋体属、假单胞菌、鞘氨醇单胞菌属、交替单胞菌、交替假单胞菌等。溶藻细菌的作用方式一般分为两种：①直接溶藻，即直接进攻宿主，它需要细菌与溶藻细胞直接接触，甚至侵入藻细胞内；②间接溶藻，即间接进攻宿主，主要包括细菌同藻竞争有限营养或细菌分泌胞外物质溶藻。作为水生生态系统中生物种群结构和功能的一个重要组成部分，溶藻细菌对赤潮和水华的控制、维持藻类生物量的平衡具有非常重要的作用，它们对浮游植物的溶解作用也可能是调节水生生态系统中初级生产力的一个重要因素。赤潮和水华的突然消亡可能与溶藻细菌的感染有关。溶藻细菌作为赤潮和水华防治的生物，能够作为一种高效溶藻微生物控制甚至杀死藻细胞，恢复生态平衡，具有巨大的开发价值。溶藻菌对藻的抑制和溶藻作用具有宿主特异性，针对我国海域特有赤潮藻株分离溶藻菌具有重要的现实和科学意义。中肋骨条藻Skeletonemacostatum是在全球近岸海域分布极广的广温广盐性的浮游硅藻，是我国赤潮的优势种，在黄、东、南海均有该种赤潮记录。中肋骨条藻SCXMBO2株和SKSPXS0711株分别是中国东海宁波海域和厦门海域赤潮优势藻。迄今，尚无有关此两株藻的溶藻菌的分离及应用的报道。产毒圆海链藻（Thalassiosirarotula）和塔玛亚历山大藻（Alexandriumtamarense）是广泛存在于海洋中的产毒藻，亦是我国沿海重要的赤潮原因藻。获得能够同时裂解赤潮原因藻中肋骨条藻、产毒圆海链藻和塔玛亚历山大藻的细菌，对于赤潮的生物防治非常重要。迄今，尚无能够同时裂解这三种赤潮原因藻的细菌的报道。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是提供一株可安全、高效、快速、特异抑制海水中中肋骨条藻（SCXMBO2和SKSPXS0711）、产毒圆海链藻和塔玛亚历山大藻的赤潮藻裂解细菌YWL1及其应用，该裂解细菌使中肋骨条藻SCXMBO2藻叶绿素a浓度减少率达76.14%、使产毒圆海链藻和塔玛亚历山大藻藻液的OD680减少65.38%和57.25%。本专利技术解决上述技术问题所采用的技术方案为：一株赤潮藻裂解细菌，该细菌为YWL1株，分类命名为海杆菌（Marinobactersp.），于2015年5月25日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCCNo.10857。该菌的生物学特征如下：该细菌为过氧化氢酶阳性，不可以利用蔗糖、麦芽糖、淀粉作为碳源，无运动性，菌体形态为棒状，有鞭毛，无芽孢，菌落为淡黄色半透明，表面光滑湿润，边缘规则，无晕环，直径约1mm；该菌株在UV下处理30分钟后死亡，其最高耐受温度为40℃，最适生长条件为：pH=6.0-8.5，温度20-40℃。上述赤潮藻裂解细菌的应用，其对产毒圆海链藻（Thalassiosirarotula）、塔玛亚历山大藻（Alexandriumtamarense）和东海赤潮优势藻中肋骨条藻SCXMBO2、SKSPXS0711具有强溶藻作用。与现有技术相比，本专利技术的优点在于：本专利技术公开了一株赤潮藻裂解细菌及其应用，将其用于控制在特定环境下由于中肋骨条藻、圆海链藻或塔玛亚历山大藻爆发性增值或高度聚集而引起的赤潮，此裂解细菌可用于抑制中肋骨条藻(SCXMBO2、SKSPXS0711)、产毒圆海链藻（Thalassiosirarotula）和塔玛亚历山大藻（Alexandriumtamarense）的生长，并杀死这些赤潮藻。具有成本低，经济效益高；对生态环境无破坏；培养大量赤潮藻裂解细菌YWL1株较为容易，操作简单。权衡社会、经济和环境效益等综合因素，是一种新型的治理赤潮的技术，具有良好的发展前景。综上所述，本专利技术提供一株赤潮藻裂解菌YWL1及其应用，该YWL1可高效、快速降解海水中中肋骨条藻，产毒圆海链藻和塔玛亚历山大藻，该菌10天能使中肋骨条藻藻叶绿素a浓度减少76.14%；使产毒圆海链藻和塔玛亚历山大藻藻液的OD680减少率达65.38%和57.25%。附图说明图1为Marinobactersp.YWL1负染图；图2为UV以及不同pH、温度对Marinobactersp.YWL1的影响；图3为Marinobactersp.YWL1最适储存温度图；图4为中肋骨条藻SCXMBO2培养液。右为被YWL1感染10d后的藻液；左为未添加YWL1的同期藻液；图5为显微镜下Marinobactersp.YWL1对中肋骨条藻、产毒圆海链藻、塔玛亚历山大藻的溶藻作用。a：被YWL01感染的中肋骨条藻SKSPXS0711；b：未添加YWL1的中肋骨条藻SKSPXS0711；c：被YWL01感染的产毒圆海链藻；d：未添加YWL01的产毒圆海链藻；e：被YWL1感染的塔玛亚历山大藻；f：未添加YWL01的塔玛亚历山大藻；图6为Marinobactersp.YWL1对中肋骨条藻SCXMBO2叶绿素a浓度的影响。具体实施方式以下结合附图实施例对本专利技术作进一步详细描述。一、实验方法藻叶绿素a浓度测定方法取5mL藻液，6000g离心15min后去上清，加入5mL体积分数为90%的乙醇水溶液或者体积分数为90%的丙酮水溶液，在4℃冰箱内避光放置。24h后7000g离心10min，上清液用分光光度计检测在663nm和645nm时的吸光度，用体积分数为90%的乙醇水溶液或者体积分数为90%的丙酮水溶液调零。藻叶绿素a浓度利用以下公式计算得到：a=(12.7D663-2.59D645)*V/Aa代表藻叶绿素a浓度，V为加入的体积分数为90%的乙醇水溶液或者体积分数为90%的丙酮水溶液体积，A为藻细胞重量(g)。藻细胞裂解，藻叶绿素a浓度下降。二、具体实施例实施例1Marinobactersp.YWL1的分离与鉴定现场采集宁波赤潮高发海域表层海水。配制固体海水LB培养基，取上述水样划线分离细菌，得到多株纯菌。将分离到的纯菌分别接种于液体海水LB培养基中扩大培养，培养温度为37℃。固体海水LB培养基的成分为：10g/L胰化蛋白胨，5g/L酵母提取物，15g/L琼脂，加人工海水至1L，调pH7.0，121℃高压蒸汽灭菌30min。液体海水LB培养基配方则不加琼脂。扩大培养的纯菌经5000×g离心20min得到细菌沉淀，用加30mg/L硅酸盐的f/2培养基清洗细菌三次，最后用等体积的含30mg/L硅酸盐的本文档来自技高网...

【技术保护点】
一株赤潮藻裂解细菌YWL1，其特征在于：该细菌为YWL1株，分类命名为海杆菌（Marinobacter sp.），于2015 年5 月25 日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.10857。

【技术特征摘要】
1.一株赤潮藻裂解细菌YWL1，其特征在于：该细菌为YWL1株，分类命名为海杆菌（Marinobactersp.），于2015年5月25日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCCNo.10857。2.根据权利要求1所述的一株赤潮藻裂解细菌YWL1，其特征在于该菌的生物学特征如下：该细菌为过氧化氢酶阳性，不可以利用蔗糖、麦芽糖、淀粉作为碳源，无运动性，菌体形态为棒状，有鞭毛，无芽孢，菌落为淡黄色半...

【专利技术属性】
技术研发人员：孙智同，李登峰，吴寒华，严小军，周成旭，
申请(专利权)人：宁波大学，
类型：发明
国别省市：浙江;33