环介导恒温扩增技术快速检测微小原甲藻的方法技术

本发明专利技术涉及一种环介导恒温扩增技术快速检测微小原甲藻的方法，包括：（１）赤潮藻类的基因组ＤＮＡ提取；（２）４条ＬＡＭＰ扩增引物：Ｐｍ－Ｆ３：ＣＧＣＧＣＴＴＧＡＴＣＧＴＣＴＣＴＴ；Ｐｍ－Ｂ３：ＣＣＡＧＴＧＧＣＡＡＧＣＣＡＡＧＡＣ；Ｐｍ－ＦＩＰ：ＡＣＣＣＧＣＡＧＡＣＧＡＧＣＴＡＣＣＡＴＴＧＴＧＴＣＡＡＣＧＣＣＴＧＴＴＣＧ；Ｐｍ－ＢＩＰ：ＴＧＧＣＡＧＡＡＣＴＣＡＴＴＴＧＣＧＧＡＣＴＣＴＴＣＣＡＧＡＡＴＧＣＣＡＡＧＧＡＣＡ；（３）ＬＡＭＰ扩增反应体系；（４）ＬＡＭＰ扩增产物的检测。本发明专利技术的ＬＡＭＰ检测方法具有操作简单快速、对仪器要求不高、特异性强、扩增效率高、结果判定简单等优点，适合对微小原甲藻进行快速鉴定和检测。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属微小原甲藻的DNA分子检测领域，特别是涉及一种环介导恒温扩增技术 快速检测微小原甲藻的方法。
技术介绍
微小原甲藻(prorocentrum minimum)是中国海域多发赤潮藻，近年来引发多起赤 潮。赤潮已成为一种世界性的公害，它对海洋生态平衡、海洋渔业、水产资源、以及人类健康 的产生很大危害。对赤潮进行预测成为学者们关注的问题，而对赤潮藻类进行检测是首要 一环，传统的藻类鉴定是通过形态学的观察来划分的，从色素，色素体，贮藏物质等的差别 来辨别不同种的藻类细胞，这是一件费时费力的事，而且不同的种属差别很细微，非长期从 事该工作的专业人员难以胜任这项工作，并且环境对藻类形态有很大影响，鉴定到种存在 的困难较多。目前，利用分子生物学手段检测微藻的方法日渐成熟，这些方法从分子水平解 决了某些从形态上难以区分的藻类分类和鉴定问题。自从聚合酶链式反应(Polymerase ChainReaction, PCR)技术专利技术以来，这种技术就被应用到诸多领域。许多学者通过微藻 某些基因片段扩增来对藻类进行鉴定，例如通过对核糖体rDNA序列分析，核糖体间隔区 (ITS)的PCR扩增和本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种环介导恒温扩增技术快速检微小原甲藻的方法，包括：　　（１）赤潮藻类的基因组ＤＮＡ提取　　（２）ＬＡＭＰ扩增引物两个外引物：　　Ｐｍ－Ｆ３：５’－ＣＧＣＧＣＴＴＧＡＴＣＧＴＣＴＣＴＴ－３’　　Ｐｍ－Ｂ３：５’－ＣＣＡＧＴＧＧＣＡＡＧＣＣＡＡＧＡＣ－３’；　　两个内引物：　　Ｐｍ－ＦＩＰ：５’－ＡＣＣＣＧＣＡＧＡＣＧＡＧＣＴＡＣＣＡＴＴＧＴＧＴＣＡＡＣＧＣＣＴＧＴＴＣＧ－３’　　Ｐｍ－ＢＩＰ：５’－ＴＧＧＣＡＧＡＡＣＴＣＡＴＴＴＧＣＧＧＡＣＴＣＴＴＣＣＡＧＡＡＴＧＣＣＡＡＧＧＡ　ＣＡ－３’；　　（３）ＬＡＭＰ扩增反应体系　　（４）ＬＡＭＰ扩增产物的检测。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：张凤英，马凌波，徐兆礼，
申请(专利权)人：中国水产科学研究院东海水产研究所，
类型：发明
国别省市：31[中国|上海]