一种抑藻菌DH46的固定化方法及其应用技术

一种抑藻菌DH46的固定化方法及其应用，涉及一种抑藻菌。一株可高效抑有害赤潮藻塔玛压力山大藻的细菌为Alteromonas?addita?DH46，保藏编号为CCTCC?NO：M2010177。将制粒、清洗、煮沸、烘干的聚氨酯泡沫颗粒与培养基共同灭菌后，加入对数生长期的抑藻菌DH46，摇瓶培养，抑藻菌DH46吸附在颗粒内外表面，而形成抑藻菌DH46与聚氨酯泡沫颗粒高度、紧密结合的产物，完成聚氨酯泡沫颗粒固定抑藻菌。在完成聚氨酯泡沫固定抑藻菌后，通过反复挤压、清洗处理和煮沸，对聚氨酯泡沫回收利用。所述固定抑藻菌的聚氨酯泡沫可在赤潮控制中应用。

【技术实现步骤摘要】
【专利摘要】一种抑藻菌DH46的固定化方法及其应用，涉及一种抑藻菌。一株可高效抑有害赤潮藻塔玛压力山大藻的细菌为Alteromonas?addita?DH46，保藏编号为CCTCC?NO：M2010177。将制粒、清洗、煮沸、烘干的聚氨酯泡沫颗粒与培养基共同灭菌后，加入对数生长期的抑藻菌DH46，摇瓶培养，抑藻菌DH46吸附在颗粒内外表面，而形成抑藻菌DH46与聚氨酯泡沫颗粒高度、紧密结合的产物，完成聚氨酯泡沫颗粒固定抑藻菌。在完成聚氨酯泡沫固定抑藻菌后，通过反复挤压、清洗处理和煮沸，对聚氨酯泡沫回收利用。所述固定抑藻菌的聚氨酯泡沫可在赤潮控制中应用。【专利说明】一种抑藻菌DH46的固定化方法及其应用
本专利技术涉及一种抑藻菌，尤其是涉及一种抑藻菌DH46的固定化方法及其应用。
技术介绍
赤潮(Red tide)是指在一定的环境条件下，海水中的某些浮游植物、原生动物或细菌在短时间内突发性增加或高度聚集而导致水体变色的生态异常现象。大多数赤潮是无毒的，那些有毒或能导致危害的赤潮又被称为有害藻华(Harmful algal blooms,HAB)或有害赤潮(Harmful red tide)。塔玛亚历山大藻(Alexandrium tamarense)是一种全球分布的有毒涡鞭毛藻，由于是重要的赤潮原因生物，而且其具有的毒素经食物链传递后形成麻痹性贝毒对水域环境和人类健康都具有极大的危害。厦门海域常年有塔玛亚历山大藻赤潮爆发，因此急切需要有效的手段进行赤潮的调控。治理赤潮常用的方法有物理法、化学法和生物法。由于物理法效果不好、费用高，而化学法又容易造成二次污染和生物累积，因此新兴的生物抑藻越来越受到人们的关注。海洋微藻在生长过程中会 不断向周围环境中释放多种代谢产物，这些产物统称为胞外产物(Extracellular products,ECPs)。以ECPs介导的藻间拮抗作用有可能是藻华种群演替的重要原因之一。有报道在35种不同微藻培养液的提取物中筛选杀藻化合物，Alteromonas分泌的生物活性物质对部分藻类生长有抑制作用。本 申请人:的实验组苏建强博士于2003年赤潮973项目MC2003-2航次从东海赤潮区采集到的海水样品中分离并筛选得到抑藻菌，前期研究表明该菌可通过间接抑藻方式，对于引发赤潮的部分藻类具有一定的杀灭作用。在进行细菌抑藻的过程中，细菌容易受到环境其他物质的影响不能很好的作用于藻细胞，从而杀藻效果受到影响。因此通过研究菌体的固定化技术对于有毒藻的控制有重要作用。生物固定化技术(immobilized biotechnology)是从20世纪60年代开始迅速发展起来的一项新技术，它是通过利用物理或化学手段将游离细胞或酶定位于限定的空间区域，并使其保持活性和可以反复使用的一种基础技术。固定化微生物技术具有微生物密度高、反应迅速、微生物流失少、产物易分离以及反应过程易控制等优点(Y._H.Kangl, B.-R.Kim, H.J.Choi, et al.Enhancement of algicidal activityby immobilization of algicidal bacteria antagonistic to Stephanodiscushantzschii (Bacillariophyceae) .Applied Microbiology, 2007, 1983-1994)。结合课题需要及技术进展，我们期待将其应用于抑藻菌DH46，并有效的提高杀藻率。按照固定化载体与作用方式的不同，可分为吸附法、包埋法、共价结合法、交联法四大类(Peilian Wei, Jie Chen, Yinghua Lu, et al.High density cultivation ofDictyostelium discoideum in a rotating polyurethane foam-bed bioreactor.World J Microbiol Biotechnol, 2010，26:1117 - 1123)。其中以包埋法研究最多，应用最广。另有截留固定法、自絮凝等。包埋法是将微生物细胞包埋在凝胶的微小空格内或埋于半透膜聚合物的超滤膜内。包埋法可分为凝胶包埋法和微胶囊法两种。此法简单，条件温和，稳定性好，包埋细胞容量高，是目前应用最广泛的固定化方法(徐新阳，张轶，李海波，等.污染地表水修复用微球菌的化学包埋法固定化工艺.东北大学学报，2006，27(10):1146—1148)。吸附法操作简单，微生物固定过程对细胞活性的影响小，但细胞与载体作用力小，抗冲击负荷相对较低，易脱落，所固定的微生物数目受所用载体的种类及其表面积的限制。复合固定化技术的方法多种多样，主要有吸附一包埋法，包埋一交联法，聚集一交联法以及三法合用的吸附一包埋一交联法等(曲洋，张培玉，郭沙沙，等.复合固定化法固定化微生物技术在污水生物处理中的研究应用.四川环境，2009, 28(3):78-84)。根据以上固定化方法的特征并结合本抑藻细菌的生理特点，故选用吸附法作为细菌固定化的研究方法。聚氨酯泡沫(Polyurethane Foam, PUF)是吸附法固定化常用载体之一。它具有孔径与细胞尺相比较大，内外表面都能作为固定化吸附界面；空隙率高，便于传质；载体为化学惰性，对细胞不具毒害作用；可与培养基共同灭菌，培养结束后易于迅速获取细胞；处理方便，价格低廉，适合作为工业化固定化载体等特点(Ory, 1.d.，Romero, L.E., Cantero, D.0ptimization of immobilization conditions for vinegar production.Siran, wood chips and polyurethane foam as carriers for Acetobacter aceti.Process Biochemistry, 2004，39 (5):547-555 ；Hiroshi Kurosawa, KouichirouYasumoto, Tetsuhiro Kimura, et al., Polyurethane membrane as an efficientimmobilization carrie r for high-density culture of rat hepatocytes in thefixed-bed reactor.Biotechnology and bioengineering, 2000.70(2):160-166)。由于物理吸附对菌体伤害小，相对包埋法，微胶囊等固定化方法，聚氨醋泡沫固定化培养菌体可以使菌体保持较强的生命力作为固定化载体。关于聚氨酯泡沫固定化的研究近年来出现了很多，刘幽燕等(刘幽燕，李青云，覃益民，韦炳努，何勇强，童张法.聚氨酯泡沫固定化产碱杆菌细胞生物转化氰化物.环境科学，2006，27(3):586-589)利用聚氨酯泡沫为载体进行固定化降氰菌株，研究其转化特性。结果表明，采用吸附生长法能有效实现菌株DN25的固定，对于高浓度氰化物，固定化细胞具有明显优势，不仅可耐受更高浓度的氰化物转化，其本文档来自技高网...

【技术保护点】
一株可高效抑有害赤潮藻塔玛压力山大藻的细菌为Alteromonas?addita?DH46，该菌已于2010年7月14日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC?NO：M2010177，保藏中心地址为：中国武汉武汉大学，邮编430072。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：郑天凌，李祎，林婧，李东，张化俊，陈章然，郑伟，
申请(专利权)人：厦门大学，
类型：发明
国别省市：