一种二苯基甲烷类化合物的制备方法及其应用技术

本发属于医药技术领域，涉及二苯基甲烷类化合物的制备方法，具体涉及从狼毒大戟中提取二个二苯基甲烷化合物，月腺大戟素A和3,3'-二乙酰基-2,4'-二甲氧基-2',4,6,6'-四羟基-二苯基甲烷，提取工艺为对狼毒大戟药材粉末采用石油醚，乙酸乙酯，正丁醇进行萃取。接着通过硅胶柱层析法对上述部位进行分离，制备方法简单快捷，重现性好，提取纯度高，获得的化合物中，二苯基甲烷类化合物具有较好的抗乳腺癌细胞活性作用，而2,4-二羟基-6-甲氧基-3-甲基-1-苯乙酮无明显的抗乳腺癌细胞活性作用。由此可见，具有二苯基甲烷母核的化合物能明显抑制乳腺癌细胞活性，该类型化合物具有一定构效关系。

Preparation method of two phenyl methane compound and application thereof

The invention belongs to the technical field of medicine, and relates to a method for preparing two phenyl methane compounds, in particular to the extraction of two two phenyl methane compounds from Euphorbia fisheriana, Euphorbia ebracteolata A and 3,3'- two -2,4'- two acetyl methoxy -2'4,6,6'- four hydroxy two phenyl methane extraction process of Euphorbia fisheriana medicinal herbs powder with petroleum ether, ethyl acetate, n-butanol extraction. Then by silica gel column chromatography to separate the parts, the preparation method is simple and rapid, reproducible, high purity, obtained compounds, two phenyl methane compounds have good effect against breast cancer cell activity, while 2,4- two hydroxy -6- methoxy -3- -1- methyl acetophenone no activity against breast cancer cells obviously. It can be concluded that the compounds with two phenyl methane nucleus can significantly inhibit the activity of breast cancer cells.

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于医药
，具体是从天然产物中筛选出抗乳腺癌细胞活性成分。
技术介绍
乳腺癌为女性最常见的恶性肿瘤之一，其较高的发病率和逐渐上升的死亡率一直为全球关注的疾病。据2011年全球癌症统计报告显示，2008年全球乳腺癌新发病人数达到138.4万，占恶性肿瘤新发病总数的23.0％，而致死人数则高达45.9万，一些较发达的国家世界人口年龄标准化发病率为66.4/10万，而发展中国家则为27.3/10万。国内女性乳腺癌发病率占据女性癌症发病率的第1位，死亡率占据女性癌症死亡率的第6位。由于目前乳腺癌发病率以平均每年0.5％的趋势增长，估计到2030年，全球乳腺癌的发病人数和死亡人数将分别达到264万和170万。同时，调查也显示乳腺癌的发病年龄趋于年轻化，国内女性乳腺癌患者发病的中位年龄是48岁，比西方国家提早了10年(马纯华，颜君，孙邓南等.乳腺癌患者社会支持的研究现状.现代临床护理.2013，12(10)61-64)。目前治疗乳腺癌的药物可分类为天然活性成分，化学类药物以及常用的联合用药。化学类药物以环磷酰胺，卡培他滨，5-氟尿嘧啶等为主，天然的活性成分主要包括紫杉醇，姜黄素，长春新碱，芹黄素，三氧化二砷等(韩伟，阎雪莹，丁文财，等.抗乳腺癌药物的研究现状.黑龙江医药.2014，27(5)：1027-1029)，其中化学类药物所致不良反应的发生率之高，不容忽视，最主要表现为骨髓抑制，胃肠道的反应，同时还降低患者免疫力，引起恶心和呕吐等。天然活性成分紫杉醇从红豆杉中提取而来，虽对乳腺癌等恶性肿瘤有显著疗效，但红豆杉作为国家一级珍惜濒危保护植物，资源有限。因此开发毒副作用小，资源丰富的化合物越来越受到青睐。我国传统中药狼毒为大戟科植物狼毒大戟EuphorbiafischerianaSteud.或月腺大戟EuphorbiaebracteolataHayata的干燥根，狼毒大戟主产于辽宁，吉林，黑龙江，河北等地。狼毒始载于《神农本草经》，其味辛，性平，有毒，归肝、脾经，有逐水祛痰，散结杀虫之功效，主治水肿腹胀，痰、食、虫积、心腹疼痛、咳喘、瘰疬、痰核、疥癣、灭蝇蛆。民间将狼毒广泛用于抗肿瘤，抗结核及皮肤病的治疗，既往研究或临床实践表明狼毒提取物对肝癌及肺癌的作用效果显著(柯华红，王华倩，等.月腺大戟与狼毒大戟对人肝癌细胞BEL-7402体外增值的影响对比研究.中国药房.2012,23(15):1359-1361；姜红.狼毒大戟对小鼠Lewis肺癌增值及转移的影响.实用医药杂志.2013,30(9):808-810)，但对乳腺癌的研究鲜有报道。目前对肝癌治疗的主要包括，针对表皮生长因子受体传导通路的靶向治疗，例如吉非替尼，厄罗替尼和西妥昔单抗，针对血管内皮生长因子的靶向治疗，包括贝伐单抗，沙利度胺等，以及多靶点治疗药物索拉非尼，该药物可同时起到抗血管生成和抗肿瘤细胞增殖的双重作用(陈敏山，张耀军，等.肝癌分子靶向药物治疗的研究进展.中华消化外科杂志.2009,8(2):96-97)。对肺癌治疗的主要包括多靶点药物索拉非尼，舒尼替尼，培美曲塞等(刘旭春，蒋国华.非小细胞肺癌多靶点药物治疗研究进展.JournalofOncology.2010,16(12):918-921)。而传统治疗乳腺癌的药物主要有环磷酰胺，5-氟尿嘧啶，紫杉醇等，和以人类表皮生长因子受体2为靶点的新型乳腺癌治疗药物赫赛汀，拉帕替尼，帕妥珠单克隆抗体等(唐静，祖旭宇.乳腺癌靶向治疗药物的研究进展.中国药房.2011,22(41):3909-3911)。由此可见，作用于肝癌，肺癌与乳腺癌的的药物，虽抗肿瘤作用机制相似，但代表药物各不相同。目前从狼毒大戟中分离提取得到的化学成分种类较多，主要有二萜，三萜，香豆素，苯乙酮类化合物等(马良，王欢，王金兰，等.狼毒大戟地上部分化学成分研究.齐齐哈尔大学学报.2012,28(6):27-29)，其二萜类化合物虽为主要的活性成分，但化合物本身具有毒性限制了其发展(YupingTang,WeiJiang,QichengWu,etal.ComparativecharacteristicoftheinflammatoryditerpenesintherootsofEuphorbiafischerianawithdifferentpreparationmethodusingHPLC-ELSD.Fitoterapia.2012,(83):427-433)。本专利技术采用现代生物活性筛选模型，从狼毒大戟中首次提取分离得到的二苯基甲烷类化合物，来源丰富，毒副作用低，抗乳腺癌活性好，为进而开发成为对乳腺癌有较好治疗效果的新型药物，具有重要的意义。化合物1，3,3'-二乙酰基-2,4'-二甲氧基-2',4,6,6'-四羟基-二苯基甲烷目前确定为新化合物，因此无最新研究进展。化合物2月腺大戟素A，3,3'-二乙酰基-2,4'-二甲氧基-2',4,6,6'-四羟基-5'-甲基二苯基甲烷，经查阅文献，尚未发现药理活性方面研究报道。
技术实现思路
本专利技术的目的是对狼毒大戟进行系统性分离提取，并完成了不同提取物的体外抗乳腺癌细胞实验，筛选出狼毒大戟中抗乳腺癌细胞的有效单体成分，而单体成分诱导凋亡的机制还有待进一步的研究。本专利技术的第一方面提供了从狼毒大戟中提取二苯基甲烷类化合物的方法，按照下述步骤进行：30kg干燥狼毒大戟药材，粉碎后浸泡在80％乙醇回流提取2次，每次2小时，溶剂用量分别为180L和150L。合并提取液，趁热过滤，合并浓缩至无乙醇残留，浓缩体积至8L。取2L浓缩液加1L水稀释，依次经石油醚、乙酸乙酯、正丁醇各萃取3次，每次萃取溶剂均为3L，减压回收溶剂，最终得乙酸乙酯部分160g，乙酸乙酯部分过正相硅胶柱，以石油醚：乙酸乙酯100:1，50:1，20:1，15:1，10：1，5:1，1:1洗脱，得Fr.1-Fr.7(Fr.1-Fr.7分别为不同洗脱梯度石油醚：乙酸乙酯100:1，50:1，20:1，15:1，10：1，5:1，1:1洗脱得到的溶液)；其中12gFr.2过正相柱，依次以石油醚：乙酸乙酯100:1，50:1，20:1洗脱，20:1洗脱部分再经过正相硅胶柱，用石油醚：二氯甲烷10:1洗脱，再经乙酸乙酯多次结晶得到3,3'-二乙酰基-2,4'-二甲氧基-2',4,6,6'-四羟基-二苯基甲烷。18gFr.3过正相柱，石油醚：乙酸乙酯：甲酸25:1:0.1，20:1:0.1，15:1:0.1，10:1:0.1,5:1:0.1,1:1:0.1梯度洗脱，其中石油醚：乙酸乙酯：甲酸15:1:0.1洗脱得月腺大戟素A。本专利技术的第二方面提供了一种二苯基甲烷类化合物，该化合物为3,3'-二乙酰基-2,4'-二甲氧基-2',4,6,6'-四羟基-二苯基甲烷，其化学结构式如Ⅰ所示：本专利技术的第三方面在于提供了上述二苯基甲烷类化合物的制备方法，按照下述步骤进行：30kg干燥狼毒大戟药材，粉碎后浸泡在80％乙醇回流提取2次，每次2小时，溶剂用量分别为180L和150L。合并提取液，趁热过滤，合并浓缩至无乙醇残留，浓缩体积至8L。取2L浓缩液加1L水稀释，依次经石油醚、乙酸乙酯、正丁醇各萃取3次，每次萃取溶剂均为3L，减压回收本文档来自技高网...

【技术保护点】
从狼毒大戟中提取二苯基甲烷类化合物的方法，按照下述步骤进行：30kg干燥狼毒大戟药材，粉碎后浸泡在80％乙醇回流提取2次，每次2小时，溶剂用量分别为180L和150L；合并提取液，趁热过滤，合并浓缩至无乙醇残留，浓缩体积至8L；取2L浓缩液加1L水稀释，依次经石油醚、乙酸乙酯、正丁醇各萃取3次，每次萃取溶剂均为3L，减压回收溶剂，最终得乙酸乙酯部分160g，乙酸乙酯部分过正相硅胶柱，以石油醚：乙酸乙酯100:1，50:1，20:1，15:1，10：1，5:1，1:1洗脱，得Fr.1‑Fr.7；其中12gFr.2过正相柱，依次以石油醚：乙酸乙酯100:1，50:1，20:1洗脱，20:1洗脱部分再经过正相硅胶柱，用石油醚：二氯甲烷10:1洗脱，再经乙酸乙酯多次结晶得到3,3'‑二乙酰基‑2,4'‑二甲氧基‑2',4,6,6'‑四羟基‑二苯基甲烷；18gFr.3过正相柱，石油醚：乙酸乙酯：甲酸25:1:0.1，20:1:0.1，15:1:0.1，10:1:0.1,5:1:0.1,1:1:0.1梯度洗脱，其中石油醚：乙酸乙酯：甲酸15:1:0.1洗脱得月腺大戟素A。

【技术特征摘要】
1.从狼毒大戟中提取二苯基甲烷类化合物的方法，按照下述步骤进行：30kg干燥狼毒大戟药材，粉碎后浸泡在80％乙醇回流提取2次，每次2小时，溶剂用量分别为180L和150L；合并提取液，趁热过滤，合并浓缩至无乙醇残留，浓缩体积至8L；取2L浓缩液加1L水稀释，依次经石油醚、乙酸乙酯、正丁醇各萃取3次，每次萃取溶剂均为3L，减压回收溶剂，最终得乙酸乙酯部分160g，乙酸乙酯部分过正相硅胶柱，以石油醚：乙酸乙酯100:1，50:1，20:1，15:1，10：1，5:1，1:1洗脱，得Fr.1-Fr.7；其中12gFr.2过正相柱，依次以石油醚：乙酸乙酯100:1，50:1，20:1洗脱，20:1洗脱部分再经过正相硅胶柱，用石油醚：二氯甲烷10:1洗脱，再经乙酸乙酯多次结晶得到3,3'-二乙酰基-2,4'-二甲氧基-2',4,6,6'-四羟基-二苯基甲烷；18gFr.3过正相柱，石油醚：乙酸乙酯：甲酸25:1:0.1，20:1:0.1，15:1:0.1，10:1:0.1,5:1:0.1,1:1:0.1梯度洗脱，其中石油醚：乙酸乙酯：甲酸15:1:0.1洗脱得月腺大戟素A。2.一种二苯基甲烷类化合物，其特征在于，该化合物为3,3'-二乙酰基-2,4'-二甲氧基-2',4,6,6'-四羟基-二苯基甲烷，...

【专利技术属性】
技术研发人员：赵亮，朱利君，李洋，曹青青，李云青，张国庆，吕磊，葛继云，钱勇，
申请(专利权)人：中国人民解放军第二军医大学，
类型：发明
国别省市：上海;31