使用氨基吡唑鉴别和/或定量儿茶酚胺的质谱法制造技术

本发明专利技术描述一种用于质谱分析、检测和定量儿茶酚胺的方法。所述方法可包含使所述儿茶酚胺与4-氨基安替比林试剂反应并且检测和/或定量所述反应产生的加合物。所述方法也可以允许同时进行多次。还提供所述反应形成的化合物。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】相关申请案本申请案要求2013年10月30日申请的美国专利申请案第61/897,683号的权利，其内容以全文引用的方式并入本文中。
本专利技术传授内容涉及质谱分析和适用于质谱分析的试剂的领域。
技术介绍
标记化学大体上用于改进质谱分析信号。儿茶酚胺是具有由具有两个羟基侧基的苯和一个侧链胺组成的儿茶酚核的分子。在人体中，最丰富的儿茶酚胺为肾上腺素(epinephrine/adrenaline)、去甲肾上腺素(norepinephrine/noradrenaline)和多巴胺。儿茶酚胺是水溶性的并且50％结合于血浆蛋白质，因此其在血流中循环。这些分子的精确分析和定量变得愈加重要。然而，仍需要改进这些化合物的质谱分析的标记，因为通过质谱法分析这些化合物通常有困难。举例来说，这些化合物中的许多不含可电离基团。因此，难以定量这些分子，在低浓度下尤其难以定量。需要一种克服这些前述困难来定量这些分析物的方法。
技术实现思路
在一些实施例中，提供检测样品中一或多种儿茶酚胺的存在的方法。在一些实施例中，所述方法包含a)使样品与4-氨基安替比林试剂或其重原子衍生物在足以与所述样品中存在的儿茶酚胺(如果存在)反应的条件下反应形成4-氨基安替比林-试剂-儿茶酚胺加合物，或其重原子衍生物；b)获得所述反应样品的质谱；以及c)分析所述质谱来判断样品是否含有4-氨基安替比林-试剂-儿茶酚胺加合物或其离子性片段。在一些实施例中，提供式I化合物或其重原子衍生物：其中R1为H或y为1-6；以及X为卤素。在一些实施例中，提供式II化合物或其重原子衍生物：其中R4为H或R5为z为1-6；以及Q为卤素。在一些实施例中，提供式III化合物或其重原子衍生物：其中R6为在一些实施例中，提供制备式II化合物的方法所述方法包含使与4-氨基安替比林试剂在足以产生式II化合物的条件下反应，其中R4为H或R5为z为1-6；以及Q为卤素。在一些实施例中，提供试剂盒。在一些实施例中，所述试剂盒包含4-氨基安替比林试剂、一或多种分析物标准品、一或多种内标、一或多种样品制备套筒和板、生物学基质、溶剂、试管、HPLC柱以及一或多种液相色谱缓冲液。附图说明参考附图，将更完全地理解本专利技术的传授内容。所述图式打算说明而不是限制本专利技术的传授内容。图1示出了根据实例1产生的4-AAP-多巴胺加合物母离子的Q-1MS扫描。图2示出了根据实例1产生的4-AAP-多巴胺加合物子离子的MSMS扫描。参考例如以下图式，在下文中提供各种实施例的详细描述。应理解，所述图式仅是示范性的并且所有图式参考仅是出于说明的目的，并且并不打算以任何方式限制下文所述的实施例的范围。为方便起见，在整个图式中参考数字也可以重复(有或没有分支)来指示类似成分或特征。具体实施方式应了解，为了清楚起见，以下讨论将阐明申请人的传授内容的实施例的各种方面，但每当省略某些具体细节是适宜或恰当的时便省略某些具体细节。举例来说，在替代实施例中，相似或类似特征的论述可以略微简化。众所周知的想法或概念为简洁起见也可以不进行任何详细论述。技术人员将认识到，一些实施例可以不需要在每个实施方式中具体描述的细节中的某些，这些细节在本文中仅是为了提供实施例的透彻理解而加以阐述。类似地，将显而易知可以根据公共常识，在不脱离本专利技术的范围的情况下，对所述实施例稍作更改或改变。可以根据以下实例和各种实施例的描述进一步理解申请人的传授内容的各方面，不应将所述实例和实施例理解为以任何方式限制申请人的传授内容的范围。根据一些实施例，提供检测样品中一或多种儿茶酚胺的存在和/或其定量方法。检测和/或定量儿茶酚胺的实例包括(但不限于)表1中所示的那些。在一些实施例中，检测和/或定量的一或多种儿茶酚胺选自表1的群组。在一些实施例中，检测和/或定量的儿茶酚胺为肾上腺素、去甲肾上腺素、多巴胺或其盐或水合物，或其任何组合。在一些实施例中，一或多种儿茶酚胺为肾上腺素、异丙肾上腺素、去甲肾上腺素、异肾上腺素、肾上腺酮盐酸盐、麻黄宁盐酸盐、2-(二甲氨基)-3',4'-二羟基-(8Cl)、2-(二甲氨基)-3',4'-二羟基乙酰苯、二羟西君、乙基喘息定、N-甲基肾上腺素、二羟基麻黄碱盐酸盐、丁基去甲肾上腺素、乙基去甲肾上腺素、3,4-二羟基-苯丙氨酸、多巴胺或其盐或水合物，或其任何组合。在一些实施例中，所述方法包含a)使样品与4-氨基安替比林(4-AAP)试剂或其重原子衍生物在足以与所述样品中存在的儿茶酚胺(如果存在)反应的条件下反应形成4-氨基安替比林-试剂-儿茶酚胺加合物，或其重原子衍生物；b)获得所述反应样品的质谱；以及c)分析所述质谱来确定样品是否含有4-氨基安替比林-试剂-儿茶酚胺加合物或其离子性片段。质谱分析将指示是否存在加合物或其离子性片段。如果质谱中出现加合物或其片段，那么加合物或其离子性片段的存在指示样品中也存在儿茶酚胺。在一些实施例中，分析步骤包含检测与任何所述加合物和其一或多个片段有关的一或多个许多质量信号。质量信号的检测可以与任何标准质谱仪一起使用，例如(但不限于)5500质谱仪。质谱仪可以使用直接输注模式。具体质谱仪和工作模式并不关键，因此机器和使用机器的变量可以视使用者偏好而修改。在一些实施例中，所述方法包含定量样品中的儿茶酚胺的量。可以例如通过比较质谱与标准品进行定量。标准品可以是内标或分析物标准品。举例来说，可使用重原子标记的分析物。重原子标记的分析物可以是重原子标记的儿茶酚胺，例如本文所述的儿茶酚胺。如本文所用，术语“重原子”指的是一或多个原子经较重原子取代的分子。举例来说，氢可经氘取代。12C碳可经13C碳取代。如果分子具有一个以上氢，那么一或多个或全部氢可经较重氢原子取代。如果分子具有一个以上碳，那么一或多个或全部碳可以经较重碳原子取代。可以用作标准品的重原子标记的分析物的实例包括(但不限于)：(多巴胺-1,1,2,2-d4盐酸盐)、(肾上腺素(甲基-13C,d3)和(去甲肾上腺素-2,5,6,α,β,β-d6)。这些是非限制性实例并且也可以使用其它重原子分析物。在一些实施例中，4-氨基安替比林试剂为式I化合物或其重原子衍生物：其中R1为H或y为1-6；以及X-为阴离子。如本文所用，当术语“其重原子衍生物”指的是化合物时，所述术语意思是化合物中的一或多个碳经13C碳取代。在一些实施例中，全部碳本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种检测样品中一或多种儿茶酚胺的存在的方法，所述方法包含：a)使所述样品与4‑氨基安替比林试剂或其重原子衍生物在足以与所述样品中存在的儿茶酚胺(如果存在)反应的条件下反应形成4‑氨基安替比林‑试剂‑儿茶酚胺加合物或其重原子衍生物；b)获得所述经反应样品的质谱；以及c)分析所述质谱以确定所述样品是否含有4‑氨基安替比林‑试剂‑儿茶酚胺加合物或其离子性片段。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2013.10.30 US 61/897,6831.一种检测样品中一或多种儿茶酚胺的存在的方法，所述方法包含：
a)使所述样品与4-氨基安替比林试剂或其重原子衍生物在足以与所述样品中存在的
儿茶酚胺(如果存在)反应的条件下反应形成4-氨基安替比林-试剂-儿茶酚胺加合物或其
重原子衍生物；
b)获得所述经反应样品的质谱；以及
c)分析所述质谱以确定所述样品是否含有4-氨基安替比林-试剂-儿茶酚胺加合物或
其离子性片段。
2.根据权利要求1所述的方法，其中所述一或多种儿茶酚胺为肾上腺素、异丙肾上腺
素、去甲肾上腺素、异肾上腺素、肾上腺酮盐酸盐、麻黄宁盐酸盐、2-(二甲氨基)-3',4'-二
羟基-(8Cl)、2-(二甲氨基)-3',4'-二羟基乙酰苯、二羟西君(dioxethedrin)、乙基喘息定、
N-甲基肾上腺素、二羟基麻黄碱盐酸盐、丁基去甲肾上腺素、乙基去甲肾上腺素、3,4-二羟
基-苯丙氨酸、多巴胺(dopamine)或其盐或水合物，或其任何组合。
3.根据权利要求1所述的方法，其中所述分析步骤包含检测与任何所述加合物以及其
一或多个片段有关的一或多个质量信号并且定量所述样品中的所述儿茶酚胺的量。
4.根据权利要求1所述的方法，其中所述4-氨基安替比林试剂为式I化合物或其重原子
衍生物：
其中
R1为H或y为1-6；以及
X为阴离子。
5.根据权利要求4所述的方法，其中所述式I的重原子衍生物为式Ia、Ib或Ic的化合物
6.根据权利要求1所述的方法，其中所述氨基安替比林-儿茶酚胺加合物为式II化合物
或其重原子衍生物：
其中
R4为H或R5为z为1-6；以及
Q为卤素。
7.根据权利要求6所述的方法，其中所述式II的重原子衍生物为式IIa或IIb的化合物
8.根据权利要求1所述的方法，其中所述氨基安替比林-儿茶酚胺加合物的所述离子性
片段为式III化合物或其重原子衍生物：

【专利技术属性】
技术研发人员：S·N·戴伊，S·普尔卡亚斯塔，
申请(专利权)人：DH科技发展私人贸易有限公司，
类型：发明
国别省市：新加坡;SG