一种固定化右旋糖酐酶降解小分子右旋糖酐的制备方法技术

本发明专利技术公开了一种固定化右旋糖酐酶降解小分子右旋糖酐的制备方法，属于右旋糖酐领域。本发明专利技术先得发酵培养基，将棘孢青霉菌和醋杆菌接在培养基上发酵培养得菌体，再超声破碎后得菌液，将菌液和卡拉胶混合滴加到氯化钙溶液中，制得右旋糖酐酶固定化细胞微球，将微球转接至底物溶液中摇床反应，反应后用乙醇沉淀，捏洗干燥后即可本发明专利技术将棘孢青霉菌和醋杆菌发酵得菌体，里，面含有右旋糖酐酶，并利用卡拉胶进行固化，固定化率高而且提高右旋糖酐酶的活性和稳定性，用其降解右旋糖酐，可使其分子量降低，副产物少，提高右旋糖酐的质量。

Preparation method of immobilized dextran enzyme degrading small molecule dextran

The invention discloses a method for preparing small molecular dextran by immobilized dextran enzyme. The present invention first fermentation medium will asperellum Penicillium and Acetobacter fermentation with cell in culture medium, and then after ultrasonication to bacteria, bacteria liquid and carrageenan mixed dripped into calcium chloride solution, preparation of immobilized cell microspheres dextranase, will transfer to the substrate solution table microspheres the reaction, after the reaction with ethanol precipitation, washing and drying to pinch the asperellum Penicillium and Acetobacter fermentation bacteria, and surface containing dextranase, and curing by carrageenan immobilized, high rate of dextran and improve enzyme activity and stability, with the degradation of dextran, the molecular weight decreased, less side products, improve the quality of dextran.

【技术实现步骤摘要】

本专利技术公开了一种固定化右旋糖酐酶降解小分子右旋糖酐的制备方法，属于右旋糖酐领域。
技术介绍
右旋糖酐，又名葡聚糖，是一种由葡萄糖单元脱水形成的高分子聚合物，它的结构具有多样性，通常被定义为一种完全由α-D-吡喃葡萄糖单体构成的多糖。右旋糖酐是某些细菌产生的一种胞外多糖，是由分泌性酶催化生成的胞外产物，作为最早发现的微生物多糖，右旋糖酐是美国FDA(食品和药物管理局)批准的第一种可用于食品的微生物胞外多糖，也是世界上第一个工业化生产的微生物多糖。右旋糖酐因其安全、无毒、生物相容性好等优点，被广泛应用于医药、食品、色谱分析等多个领域。右旋糖酐的生产包括有如下两种方法：微生物直接发酵法和酶合成法，而工业生产上主要以直接发酵法为主。但直接发酵法生产葡聚糖时，产物分子大小难以控制，发酵后菌体与产品很难分离，生产中引入的氮、氯等杂质，致使右旋糖酐质量低，临床副反应多。而利用诱导分离出的葡聚糖合成酶来制备右旋糖酐可以克服这些不足，因此，从特有的微生物中通过分子生物学技术构建和筛选的右旋糖酐合成酶的全新酶源是目前研究重点之一。专利技术内容本专利技本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种固定化右旋糖酐酶降解小分子右旋糖酐的制备方法，其特征在于具体制备步骤为：（1）按重量份数计，分别选取30～40份葡萄糖，10～15份蛋白胨，5～8份磷酸氢二钠，2～4份磷酸二氢钾，0.5～1.2份氯化钾，3～5份酵母浸膏和30～50份去离子水，用0.5mol/L氢氧化钠溶液调节pH值为7.0，在105～110℃和0.1MPa下灭菌处理10～15min得发酵培养基；（2）向上述发酵培养基中加入培养基体积8～12%棘孢青霉菌种子液和培养基体积10～15%醋杆菌种子液，放入37℃恒温摇床培养中，在200～220r/min下培养15～20h，将培养后的发酵液在4℃和5000～7000r/min转速...

【技术特征摘要】
1.一种固定化右旋糖酐酶降解小分子右旋糖酐的制备方法，其特征在于具体制备步骤为：
（1）按重量份数计，分别选取30～40份葡萄糖，10～15份蛋白胨，5～8份磷酸氢二钠，2～4份磷酸二氢钾，0.5～1.2份氯化钾，3～5份酵母浸膏和30～50份去离子水，用0.5mol/L氢氧化钠溶液调节pH值为7.0，在105～110℃和0.1MPa下灭菌处理10～15min得发酵培养基；
（2）向上述发酵培养基中加入培养基体积8～12%棘孢青霉菌种子液和培养基体积10～15%醋杆菌种子液，放入37℃恒温摇床培养中，在200～220r/min下培养15～20h，将培养后的发酵液在4℃和5000～7000r/min转速下离心分离12～15min，收集沉淀物，将沉淀物按固液比1:2加入去离子水，得菌体悬浮液；
（3）将上述菌体悬浮液按体积比1:1加入pH6.8浓度0.05mol/LHAC-NaAC缓冲液，混合后在0℃和250～300W下超声破碎15～20min，每破碎2s，间隔2s，超声破碎后再在4℃和10000～12000r/min条件下离心分离15～20min，去除沉淀物，得上清液即菌液；
（4...

【专利技术属性】
技术研发人员：董晓，王志慧，
申请(专利权)人：董晓，
类型：发明
国别省市：江苏;32