一种碱性液基细胞保存处理液及其制备方法技术

本发明专利技术属于细胞处理液领域，具体涉及一种碱性液基细胞保存处理液及其制备方法。本发明专利技术提供的碱性液基细胞保存处理液主要由蛋白溶解剂、红细胞裂解剂、碱类物质、防腐剂和蒸馏水组成。本发明专利技术提供的碱性液基细胞保存处理液主要供膜式液基薄层细胞制片机配套使用。本发明专利技术提供的碱性液基细胞保存处理液可以增强经过修饰的载玻片的细胞粘附能力，促进宫颈细胞富集，使宫颈细胞牢牢地粘附于特制玻片，可以有效的减少漏检现象。同时，该碱性液基细胞保存处理液具有无毒环保，杀菌快速彻底，价格低廉的优点，是一种配置方便，安全有效的新型碱性液基细胞保存处理液。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于细胞处理液领域，具体涉及一种碱性液基细胞保存处理液及其制备方法。
技术介绍
宫颈癌是目前女性癌症中最常见的恶性肿瘤之一。早期诊断宫颈癌及癌前病变是提高宫颈癌治愈率及患者生存率的关键，细胞学检查是目前临床应用最广泛的筛查子宫颈癌的主要方法。近年来，细胞学检查已成为宫颈癌的大规模普查和高危人群随访观察的主要方法，使中晚期宫颈癌发生率大幅度下降。传统的细胞学检查方法是使用巴氏涂片法，制得得到的涂片细胞大量重叠，并且涂片还含有大量的红细胞、白细胞、粘液及脱落坏死组织等杂质，使病理医生在判读时非常困难，而且会出现15％-40％的假阴性率，大大的降低检测结果的准确度。液基细胞学检查是上世纪90年代末专利技术的一项细胞学新技术，对宫颈癌及癌前病变诊断准确性较高，被认为是宫颈癌早期诊断、早期预防的最佳方法。液基薄层细胞学检测技术(TCT)改变了以往巴氏涂片的操作方法，标本取出后立即放入细胞保存液中，避免了常规巴氏涂片过程中，遗留在取材器上的细胞随取材器丢弃和细胞过度干燥的现象。保存液中的细胞经程序化处理，随机取样制成薄层涂片，在薄片中的不正常细胞容易被观察，并且湿性的细胞核结构更清晰，便于鉴别，可以检测出较多的低级病变和一些更严重的病变，是目前国际上比较流行的新技术。采用液基薄层细胞学检测技术对异常细胞的诊断正确率提高了13％，对鳞状上皮以上病变的检出率提高了65％，具有传统涂片无法比拟的优点。液基薄层细胞学检测技术中细胞保存液对检测结果具有重要的影响作用。中国专利申请201510751725.9公开了一种液基细胞保存液及其制备方法，所述细胞保存液包括pH缓冲剂、渗透压维持剂、防腐保鲜剂、固定剂、抗凝剂、黏液软化剂、氯化铵和去离子水；所述pH缓冲剂为邻苯二甲酸氢钾，所述渗透压维持剂为氯化钠，所述固定剂为甲醇或乙醇中的一种或两种的混合物，所述抗凝剂为乙二胺四乙酸二钠，所述黏液软化剂为N-乙酰基-L-半胱氨酸。制备得到的液基细胞保存液可以维持细胞原有的形态结构和生理功能，并能有效除去红细胞成分和黏液成分从而获得干净的视野，有利于病理科医生后续的观察实验。但是该液基细胞保存液采用甲醇作为固定保鲜剂，易造成细胞成团结块，蛋白质粘液也易结块沉积，不利于细胞的分散和观察。中国专利申请201410843248.4公开了一种新型环保无毒的液基细胞保存液，所述液基细胞保存液包括超纯水、pH缓冲剂、渗透压维持剂、防腐保鲜剂、固定剂、金属螯合剂和表面活性剂；所述的pH缓冲剂为磷酸缓冲盐溶液、醋酸钠和乙酸溶液中的一种或几种，所述渗透压维持剂为氯化钾或氯化钠溶液中的一种或两种，所述防腐保鲜剂为苯酚，所述固定剂为乙醇，所述金属螯合剂为乙二胺四乙酸和盐酸溴已新，所述表面活性剂为聚氧乙烯失水山梨醇单月桂酸酯。制备得到的液基细胞保存液不含甲醇、异丙醇有毒有害成分，无毒无害环保。但是该液基细胞保存液采用醇类作为保存液，可以固定流动性高的蛋白质，形成沉积物，不能很好的转移到载玻片，导致细胞表面变形和细胞退化，大大的降低了检测结果的准确性。
技术实现思路
为了克服现有技术中液基细胞保存液存在的缺陷，本专利技术的目的在于提供一种碱性液基细胞保存处理液及其制备方法，以解决上述的问题。本专利技术提供了一种碱性液基细胞保存处理液，包括以下组分及其重量百分比：蛋白溶解剂0.2-1％、红细胞裂解剂0.01-0.1％、碱类物质0.001-0.02％、防腐剂0.05-0.4％和蒸馏水96-99.6％。进一步地，所述的碱性液基细胞保存处理液包括以下组分及其重量百分比：蛋白溶解剂0.4-0.8％、红细胞裂解剂0.02-0.08％、碱类物质0.005-0.015％、防腐剂0.1-0.2％和蒸馏水96-99.4％。进一步地，所述的碱性液基细胞保存处理液包括以下组分及其重量百分比：蛋白溶解剂0.6％、红细胞裂解剂0.05％、碱类物质0.012％、防腐剂0.18％和蒸馏水99.158％。进一步地，所述蛋白溶解剂由N-乙酰-L半胱氨酸、尿素和二硫代苏糖醇按重量比4-6:3-5:1-3组成。进一步地，所述蛋白溶解剂由N-乙酰-L半胱氨酸、尿素和二硫代苏糖醇按重量比5:4:2组成。进一步地，所述红细胞裂解剂由皂素、十二烷基硫酸钠和聚乙二醇辛基苯基醚按重量比3-5:2-4:2-4组成。进一步地，所述红细胞裂解剂由皂素、十二烷基硫酸钠和聚乙二醇辛基苯基醚按重量比4:3:3组成。进一步地，所述碱类物质为NaOH和KOH中的一种或其组合。进一步地，所述防腐剂为卡松、醋酸洗必泰和度米芬中的一种或一种以上。另外，本专利技术还提供了一种碱性液基细胞保存处理液的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：将蛋白溶解剂、红细胞裂解剂、碱类物质和防腐剂混合，加入适量蒸馏水搅拌至完全溶解，接着加入蒸馏水至pH值为8-9，即得。本专利技术提供的碱性液基细胞保存处理液主要供膜式液基薄层细胞制片机配套使用。本专利技术提供的碱性液基细胞保存处理液中的N-乙酰-L半胱氨酸的分子式为C5H9NO3S，CAS号为616-91-1；尿素分子式为H2NCONH2(CO(NH2)2)，CAS号为57-13-6；二硫代苏糖醇的分子式为C4H10O2S2，CAS号为27565-41-9；皂素的分子式为C27H42O3，CAS号为8047-15-2；十二烷基硫酸钠的CAS号为151-21-3，聚乙二醇辛基苯基醚分子式为(C2H4O)nC14H22O，CAS号为9002-93-1。卡松的化学名称为2-甲基-4-异噻唑啉-3-酮，分子式为C4H4ClNOS+C4H5NOS，CAS号为26172-55-4，醋酸洗必泰的分子式为C22H30Cl2N10·2(C2H4O2)，CAS号为56-95-1，度米芬的化学名称为溴化十二烷基-二甲基-2-苯氧基-乙基胺，CAS号为538-71-6。本专利技术提供的碱性液基细胞保存处理液中的蛋白溶解剂的N-乙酰-L半胱氨酸分子中含有巯基，能使蛋白肽键的二硫键(-S-S-)断裂而导致蛋白溶解，而尿素因其有酰胺键而具有分解蛋白的能力。由于红细胞膜含有较多的脂质和磷脂，十二烷基硫酸钠和聚乙二醇辛基苯基醚可以破坏生物膜的脂质双层，促使红细胞膜完全溶解，可以保证而宫颈细胞(正常和异常细胞)形态和结构均保存完好。液基细胞制片系统使用特制的玻片，玻片经APES硅烷化处理，表面上带上大量阳离子，本专利技术提供的碱性液基细胞保存处理液中的NaOH或KOH等碱性物质可以使宫颈细胞膜表面富含足量阴离子，大大的增强了经过修饰的载玻片对细胞的粘附能力，有利于细胞富集，可以有效的减少漏检现象。同时，本专利技术采用的防腐剂可以长效地杀灭各种细菌、真菌，而且毒性低，是一种安全、环保的防腐剂。进一步地，使用本专利技术制备的碱性液基细胞保存处理液处理的宫颈分泌物样本在显微镜下观察无红细胞或其他杂质蛋白，宫颈细胞形态和结构保存完好，集中、数量多，背景清晰干净，说明本专利技术添加的碱性物质、由N-乙酰-L半胱氨酸、尿素和二硫代苏糖醇按一定重量比组成的蛋白溶解剂和由皂素、十二烷基硫酸钠和聚乙二醇辛基苯基醚按一定重量比组成的红细胞裂解剂相互协调可以保证宫颈细胞形态和结构完整，检测背景清晰干净，有利于病理医生使用显微镜对宫颈异常细胞的确认，保证结果准确可靠。总之，本专利技术提供的碱性液基本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种碱性液基细胞保存处理液，其特征在于，包括以下组分及其重量百分比：蛋白溶解剂0.2‑1％、红细胞裂解剂0.01‑0.1％、碱类物质0.001‑0.02％、防腐剂0.05‑0.4％和蒸馏水96‑99.6％。

【技术特征摘要】
1.一种碱性液基细胞保存处理液，其特征在于，包括以下组分及其重量百分比：蛋白溶解剂0.2-1％、红细胞裂解剂0.01-0.1％、碱类物质0.001-0.02％、防腐剂0.05-0.4％和蒸馏水96-99.6％。2.如权利要求1所述的碱性液基细胞保存处理液，其特征在于，包括以下组分及其重量百分比：蛋白溶解剂0.4-0.8％、红细胞裂解剂0.02-0.08％、碱类物质0.005-0.015％、防腐剂0.1-0.2％和蒸馏水96-99.4％。3.如权利要求2所述的碱性液基细胞保存处理液，其特征在于，包括以下组分及其重量百分比：蛋白溶解剂0.6％、红细胞裂解剂0.05％、碱类物质0.012％、防腐剂0.18％和蒸馏水99.158％。4.如权利要求1-3任一所述的碱性液基细胞保存处理液，其特征在于，所述蛋白溶解剂由N-乙酰-L半胱氨酸、尿素和二硫代苏糖醇按重量比4-6:3-5:1-3组成。5.如权利要求4所述的碱性液基细胞保存处理液，其...

【专利技术属性】
技术研发人员：滕飞鹏，周炜，欧阳小峰，张月，
申请(专利权)人：四川金域医学检验中心有限公司，
类型：发明
国别省市：四川;51