降低流脑A群细菌发酵液中杂质含量的工艺制造技术

技术编号:14480378 阅读:119 留言:0更新日期:2017-01-25 13:05
本发明专利技术公开了一种降低流脑A群细菌发酵液中杂质含量的工艺,包括以下步骤:1)开启菌种及传代:开启流脑A群菌种传代至氯化血红素流脑半综合培养基上,放入二氧化碳细胞培养箱中,36.5℃,8%CO2培养,二代采用半综合固体培养基培养,三代采用流脑半综合液体培养基在恒温振荡摇床中培养;2)接种到种子罐培养:将培养得到的流脑A群种子接种到种子罐,恒温搅拌通气培养;3)发酵罐发酵:将培养得到的流脑A群五代种子接种入发酵罐后,恒温35℃,深层通气300rpm搅拌培养,培养流脑A群细菌至对数生长期后期或静止期前期,此时菌浓度达到100‑200亿/mL,甲醛杀菌后去除菌体,收集发酵液上清液。本发明专利技术所示工艺能够有效控制发酵液中的核酸及蛋白处于低含量水平。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于流脑A群细菌发酵领域,具体地,涉及一种降低流脑A群细菌发酵液中杂质含量的工艺
技术介绍
脑膜炎奈瑟菌(N.meningitidis)简称为脑膜炎球菌(meningococcus),是流行性脑脊髓膜炎(简称流脑)的病原菌。一百多年来,流脑一直在世界各地流行或散在发生,是人类的主要急性呼吸道传染病之一。很多国家经过长期的流行病学监测,发现此病具有周期性流行的特点。意大利发现1915-1934年在其国内发生了三次流行。我国也出现过五次全国性大流行,在1938、1949、1959、1967及1977年,约每8-10年出现一次流行高峰。据WHO报告,近十余年来发病率平均为2.5/10万。当今世界各大洲发病率在1/10万-10/10万,国内1967年的大流行,全国发病率及病死率均较高。发病数占传染数的第四位,而死亡数占全部传染病死亡数的60%,严重危害人民健康及影响计划生育。其主要的特点为:易感人群主要是为儿童,以爆发型病死率最高,可达40%-60%。流脑的预防,主要采取以疫苗接种为主的预防措施。1980年,我国正式生产A群NM多糖疫苗,推广应用取得了很好的效果。但多糖疫苗对2岁以下的婴幼儿预防效果较差,结合疫苗的研制成功解决了疫苗在婴幼儿中无效的问题。结合疫苗比以往的疫苗具有更强的免疫原性和更好的免疫效果。制备流脑A群结合疫苗首先要获得流脑A群荚膜多糖,目前传统的生产方式生产流脑A群荚膜多糖需要将流脑A群菌种经过培养、发酵后得到的上清液再经过纯化处理,而采用该传统方式生产的流脑A群发酵液中含有较多的核酸及蛋白等杂质成分,增加了后续纯化的难度。专利技术内容本专利技术所要解决的技术问题是提供一种降低流脑A群细菌发酵液中杂质含量的工艺,尤其是控制流脑A群细菌发酵液中的核酸及蛋白等杂质成分的含量处于较低水平。本专利技术解决上述问题所采用的技术方案是:降低流脑A群细菌发酵液中杂质含量的工艺,包括以下步骤:1)开启菌种及传代:开启流脑A群菌种传代至氯化血红素流脑半综合培养基上,放入二氧化碳细胞培养箱中,36.5℃,8%CO2培养,二代采用半综合固体培养基培养,三代采用流脑半综合液体培养基在恒温振荡摇床中培养;2)接种到种子罐培养:将上述步骤1)培养得到的流脑A群种子接种到种子罐,恒温搅拌通气培养,培养至第五代;3)发酵罐发酵:将上述步骤2)培养得到的流脑A群五代种子接种入发酵罐后,恒温35℃,深层通气300rpm搅拌培养,中途补加葡萄糖溶液为流脑A群细菌生产荚膜多糖提供原料,培养流脑A群细菌至对数生长期后期或静止期前期,此时菌浓度达到100-200亿/mL,甲醛杀菌后去除菌体,收集发酵液上清液。综上,本专利技术的有益效果是:本申请通过对发酵罐搅拌及深层通气等工艺过程中的工艺参数进行优化,控制发酵后的清液中的核酸及蛋白等杂质成分的含量较低,具体地,采用本工艺得到的发酵液中的核酸含量约为1mg/g,蛋白含量低于1mg/g,杂质含量远远低于标准要求。具体实施方式下面结合实施例,对本专利技术作进一步的详细说明,但本专利技术的实施方式不限于此。实施例1降低流脑A群细菌发酵液中杂质含量的工艺,包括以下步骤:1)开启菌种及传代:开启流脑A群菌种传代至氯化血红素流脑半综合培养基上,放入二氧化碳细胞培养箱中,36.5℃,8%CO2培养,二代采用半综合固体培养基培养,三代采用流脑半综合液体培养基在恒温振荡摇床中培养;2)接种到种子罐培养:将上述步骤1)培养得到的流脑A群种子接种到种子罐,恒温搅拌通气培养,培养至第五代。本文档来自技高网...

【技术保护点】
降低流脑A群细菌发酵液中杂质含量的工艺,其特征在于,包括以下步骤:1)开启菌种及传代:开启流脑A群菌种传代至氯化血红素流脑半综合培养基上,放入二氧化碳细胞培养箱中,36.5℃,8%CO2培养,二代采用半综合固体培养基培养,三代采用流脑半综合液体培养基在恒温振荡摇床中培养;2)接种到种子罐培养:将上述步骤1)培养得到的流脑A群种子接种到种子罐,恒温搅拌通气培养,培养至第五代;3)发酵罐发酵:将上述步骤2)培养得到的流脑A群五代种子接种入发酵罐后,恒温35℃,深层通气300rpm搅拌培养,中途补加葡萄糖溶液为流脑A群细菌生产荚膜多糖提供原料,培养流脑A群细菌至对数生长期后期或静止期前期,此时菌浓度达到100‑200亿/mL,甲醛杀菌后去除菌体,收集发酵液上清液。

【技术特征摘要】
1.降低流脑A群细菌发酵液中杂质含量的工艺,其特征在于,包括以下步骤:1)开启菌种及传代:开启流脑A群菌种传代至氯化血红素流脑半综合培养基上,放入二氧化碳细胞培养箱中,36.5℃,8%CO2培养,二代采用半综合固体培养基培养,三代采用流脑半综合液体培养基在恒温振荡摇床中培养;2)接种到种子罐培养:将上述步骤1)培养得到的流脑A群种子接...

【专利技术属性】
技术研发人员:谭照德冯堃陈雪
申请(专利权)人:成都欧林生物科技股份有限公司
类型:发明
国别省市:四川;51

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