本发明专利技术涉及一种用于分离和检测单增李斯特氏菌的培养基，其中，每1000ml培养基包括如下用量的组分：蛋白胨20g‑23g，可溶性淀粉1.0‑1.5g，酵母浸粉3.0‑5.0g，D‑甘露醇8‑10.0g，七叶苷0.8‑1.0g，柠檬酸铁铵0.5‑0.8g，D‑葡萄糖或蔗糖0.5‑0.8g，氯化锂12.0‑15.0g，琼脂13.0‑16.0g，氯化钠5.0‑8.0g，酚红0.08‑0.1g，羊血30ml，所述培养基的pH值为7.2±0.2。上述培养基一方面解决现有显色培养基不能很好区分单增李斯特氏菌和其他李斯特氏菌的缺陷；另一方面可以使单增李斯特氏菌显色效果好，操作简易实惠，更容易进行检测，由此实现对单增李斯特氏菌的强选择性强鉴别性。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及单增李斯特氏菌的分离检测
，具体涉及一种用于分离和检测单增李斯特氏菌的培养基。
技术介绍
单核细胞增生李斯特氏菌（Listeriamonocytogenes,LM），简称单增李斯特氏菌，是一种重要的人畜共患病致病菌，主要污染肉类、乳制品和蔬菜等，从20世纪90年代起被世界卫生组织列为最重要的食源性病原菌之一。LM对环境的耐受性很强，具有耐盐、耐低温的特点，在冷藏温度下仍然可以大量繁殖，引起动物和人类流产、败血症、脑膜炎等疾病。近年来，多次发生由LM引起的食源性疾病暴发并造成部分患者死亡，因此引起了世界各国的高度关注。目前单增李斯特氏菌的选择性培养基有李斯特氏菌选择性培养基（MMA）、牛津琼脂（OXA）、PALCAM、CHROMagar显色培养基等，比较几种培养基有如下优缺点：MMA抑制性强，菌落小、形态不典型，很难与杂菌区分，无选择性无鉴别性；OXA分离原理主要是基于李斯特氏菌具有β－D－葡萄糖苷酶的活性，能水解培养基中的七叶灵，产生七叶苷，与铁离子产生颜色反应而使菌落为棕褐色，并带有褐色晕圈，而致病性和非致病性李斯特氏菌病都能发生这种反应，有选择性无鉴别性；CHROMagar平板上，单增李斯特氏菌显蓝色（指示剂），菌落周围有一不透明环（酶的作用），其原理主要是此酶由毒力基因编码的溶血素产生，而此种溶血素只存在于单核增生李斯特氏菌和伊氏李斯特氏菌中，因而可以很好的将此两种菌同李斯特氏属的其他种分开。但是没有添加抑菌剂，对高污染食品中的杂菌抑制性较差；PALCAM平板由于含七叶苷及柠檬酸铁铵，菌落中心为黑色，加入氯化锂及三种抑菌剂，其抑菌能力大于CHROMagar。氯化锂抑制革兰氏阴性菌生长，抑菌剂抑制除李斯特氏菌外的革兰氏阳性菌生长，有强选择性无鉴别性。
技术实现思路
有鉴于此，提供一种强选择性强鉴别性、显色的用于分离和检测单增李斯特氏菌的培养基。一种用于分离和检测单增李斯特氏菌的培养基，其中，每1000ml培养基包括如下用量的组分：蛋白胨20g-23g，可溶性淀粉1.0g-1.5g，酵母浸粉3.0g-5.0g，D-甘露醇8g-10.0g，七叶苷0.8g-1.0g，柠檬酸铁铵0.5g-0.8g，D-葡萄糖或蔗糖0.5g-0.8g，氯化锂12g-15g，琼脂13g-16g，氯化钠5.0g-8.0g，酚红0.08g-0.1g，羊血30ml，蒸馏水1000ml所述培养基的pH值为7.2±0.2。上述用于分离和检测单增李斯特氏菌的培养基通过采用上述配方，一方面解决现有显色培养基不能很好区分单增李斯特氏菌和其他李斯特氏菌的缺陷；另一方面可以使单增李斯特氏菌显色效果好，操作简易实惠，更容易进行检测，由此实现对单增李斯特氏菌的强选择性强鉴别性。具体实施方式以下将结合具体实施例对本专利技术进行详细说明。本专利技术实施例提供一种用于分离和检测单增李斯特氏菌的培养基，通过采用以下配方，实现对单增李斯特氏菌的强选择性强鉴别性。在培养基中，每1000ml包括如下用量的组分：蛋白胨20g-23g，可溶性淀粉1.0g-1.5g，酵母浸粉3.0g-5.0g，D-甘露醇8g-10.0g，七叶苷0.8g-1.0g，柠檬酸铁铵0.5g-0.8g，D-葡萄糖或蔗糖0.5g-0.8g，氯化锂12g-15g，琼脂13g-16g，氯化钠5.0g-8.0g，酚红0.08g-0.1g，羊血30ml，蒸馏水1000ml所述培养基的pH值为7.2±0.2。具体地，在上述培养基中，蛋白胨提供生长必须的碳氮源；酵母浸粉和淀粉提供碳氮源、维生素和生长因子；氯化钠可维持均衡的渗透压；葡萄糖或蔗糖提供碳源；李斯特氏菌水解七叶苷与铁离子反应形成黑色的6,7-二羟基香豆素；甘露醇是可发酵的糖，酚红是pH指示剂；氯化锂和其它的抗生素能抑制革兰氏阴性菌和大多数革兰氏阳性菌；琼脂是培养基的凝固剂。李斯特氏菌的溶血素O，有α和β两种毒力因子，单增李斯特氏菌产生的是β溶血素，β溶血素的作用机制是水解红细胞膜上的鞘磷脂生成溶血卵磷脂等中间产物，进而破坏细胞膜结构，产生内层透明溶血环，3%的羊血能使单增李斯特氏菌菌落周围产生小透明圈，从而和其他李斯特氏菌区别出来，提供给培养基强鉴别作用。优选地，所述培养基还可选择性地包括5-10.0mg的多粘菌素B，优选为5.0mg的多粘菌素B；还包括2.5-5.0mg的盐酸吖啶黄，优选为5.0mg；以及包括10-20.0mg的头孢他啶，优选为5.0-10mg。这些选择性添加剂的作用主要在于抑制其他革兰氏阳性菌的生长，让本实施例的该培养基选择性更强。实施例11.培养基配制：按照下面每1000ml培养基配方混合各成分，各成分及其用量如下：蛋白胨23g，可溶性淀粉1.0g，酵母浸粉3.0g，D-甘露醇10.0g，七叶苷0.8g，柠檬酸铁铵0.5g，D-葡萄糖0.5g，氯化锂15.0g，琼脂13.0g，氯化钠5.0g，酚红0.08g，羊血30ml。选择性添加剂多粘菌素B10.0mg，盐酸吖啶黄5.0mg，头孢他啶20.0mg，蒸馏水1000ml。具体配制方法如下：按照上述用量称取各成分加热溶解，调节PH为7.2，分装，121°C高压灭菌15min，冷却至50°C左右后，加入选择性添加剂，混匀后倾倒在平板中使用。2.分离和检测：将单增李斯特氏菌制成菌液，吸取一定量菌液，在实施例1的培养基中于37℃下培养24h－48h，观察结果。培养后，单增李斯特氏菌的典型菌落特征为菌落大小2mm，灰绿色中心凹陷，菌落周围出现微小透明圈，可清晰地与其它李斯特氏菌呈现的不溶血或者大溶血区分。由实施例1结果可知，实施例1的培养基克服了现有培养基不能很好地区分单增李斯特氏菌和其它李斯特氏菌的缺陷，大大降低了假阳性和假阴性结果的出现，不仅可以作为单增李斯特氏菌确认培养基，还可以作为从样品中特异性分离单增李斯特氏菌的培养基，应用前景广泛。实施例21.培养基配制：按照下面每1000ml培养基配方混合各成分，各成分及其用量如下：蛋白胨20g，可溶性淀粉1.5g，酵母浸粉5.0g，D-甘露醇8.0g，七叶苷1.0g，柠檬酸铁铵0.8g，D-葡萄糖0.8g，氯化锂12.0g，琼脂16.0g，氯化钠8.0g，酚红0.1g，羊血30ml，蒸馏水1000ml。选择性添加剂多粘菌素B8.0mg，盐酸吖啶黄4.0mg，头孢他啶15.0mg，蒸馏水1000ml。具体配制方法如下：按照上述用量称取各成分加热溶解，调节PH为7.4，分装，121°C高压灭菌15min，冷却至50°C左右后，加入选择性添加剂，混匀后倾倒在平板中使用。2.分离和检测：将单增李斯特氏菌制成菌液，吸取一定量菌液，在实施例2的培养基中于37℃下培养24h－48h，观察结果。培养后，单增李斯特氏菌的典型菌落特征为菌落大小1.8mm，灰绿色中心凹陷，菌落周围出现微小透明圈，可清晰地与其它李斯特氏菌呈现的不溶血或者大溶血区分。实施例31.培养基配制：按照下面每1000ml培养基配方混合各成分，各成分及其用量如下：蛋白胨22g，可溶性淀粉1.2g，酵母浸粉4.0g，D-甘露醇9.0g，七叶苷0.9g，柠檬酸铁铵0.6g，D-葡萄糖0.6g，氯化锂14.0g，琼脂14.0g，氯化钠6.0g，酚红0.09g，羊血30ml，蒸本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种用于分离和检测单增李斯特氏菌的培养基，其特征在于，每1000ml培养基包括如下用量的组分：蛋白胨 20g ‑23g，可溶性淀粉 1.0g ‑1.5g，酵母浸粉 3.0g‑5.0g，D‑甘露醇 8g ‑10.0g，七叶苷 0.8g‑1.0g，柠檬酸铁铵 0.5g‑0.8g，D‑葡萄糖或蔗糖 0.5g‑0.8g，氯化锂 12g‑15g，琼脂 13g‑16g，氯化钠 5.0g‑8.0g，酚红 0.08g‑0.1g，羊血 30 ml，蒸馏水 1000ml，所述培养基的pH值为7.2±0.2。
【技术特征摘要】
1.一种用于分离和检测单增李斯特氏菌的培养基，其特征在于，每1000ml培养基包括如下用量的组分：蛋白胨20g-23g，可溶性淀粉1.0g-1.5g，酵母浸粉3.0g-5.0g，D-甘露醇8g-10.0g，七叶苷0.8g-1.0g，柠檬酸铁铵0.5g-0.8g，D-葡萄糖或蔗糖0.5g-0.8g，氯化锂12g-15g，琼脂13g-16g，氯化钠5.0g-8.0g，酚红0.08g-0.1g，羊血30ml，蒸馏水1000ml，所述培养基的pH值为7.2±0.2。2.如权利要求1所述的用于分离和检测单增李斯特氏菌的培养基，其特征在于，每1000ml培养基包括如下用量的组分：蛋白胨23g，可溶性淀粉1.0g，酵母浸粉3.0g，D-甘露醇10.0g，七叶苷0.8g，柠檬酸铁铵0.5g，D-葡萄糖或蔗糖0.5g，氯化锂15.0g，琼脂1...
【专利技术属性】
技术研发人员：黄李华，洪小柳，赵芳，马淑棉，葛丽雅，万志刚，刘慧玲，张恒，吕敬章，
申请(专利权)人：深圳市检验检疫科学研究院，深圳出入境检验检疫局食品检验检疫技术中心，
类型：发明
国别省市：广东;44
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