一种检测真菌和皮肤寄生虫的荧光染色剂制造技术

一种检测真菌和皮肤寄生虫的荧光染色剂，涉及一种检测真菌和皮肤寄生虫的荧光染色剂。本发明专利技术是为了解决目前的荧光染色法的三种染色液成分无法稳定长期共存，需分别配制储存，操作繁琐，染色时间较长，对检测的标本具有局限性，只能溶解一些杂质少的标本，临床适用范围受限的技术问题。本发明专利技术由水、荧光增白剂、碱、背景复染剂、促溶剂和保湿剂组成。本申请配方为单剂型，使得荧光增白剂能够与强碱和背景复染剂能够稳定共存；产品稳定性好，只需一步操作即可完成染色，临床使用更加方便、快捷，原本需要5分钟以上才能完成的检测，本申请只需数十秒即可完成，大大提高真菌和皮肤寄生虫的检测效率。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种检测真菌和皮肤寄生虫的荧光染色剂。
技术介绍
真菌性疾病：真菌引起的疾病称为真菌病，临床上真菌病可分为浅部真菌病和深部真菌病或系统性真菌病。浅部真菌病由只侵犯人体皮肤、毛发和甲等浅表组织的真菌引起。在我国90％以上的真菌病属于浅部真菌病。引起系统性真菌病的病原真菌包括组织胞浆菌、芽生菌、球孢子菌和副球孢子菌，这些都是双相真菌，在自然界中以霉菌形态菌如隐球菌属、念珠菌属、曲霉属等均可致严重的系统感染。随着器官移植的大量开展及免疫抑制剂、肿瘤患者化疗药物的广泛使用，以及糖尿病等慢性疾病患者的增多，真菌病的发病率和死亡率在逐年增加，对人类健康的危害日趋严重。皮肤寄生虫病：皮肤寄生虫病是指寄生虫以不同方式侵袭人体引起的皮肤病。依寄生虫的种类和数量不同、人体(寄主)状况和受侵器官的不同，表现各种不同的疾病。常见的包括毛囊虫、疥虫、滴虫及阴虱等。毛囊虫又称蠕形螨，寄生于人的毛囊和皮脂腺，是一种永久性寄生螨。毛囊虫引起的慢性炎症叫蠕形螨病，临床表现为面部，背部等皮脂溢出部位的红斑，丘疹，脓疱，结痂，脱屑。疥虫，人们通常称它为疥螨，这种寄生虫是通过身体接触进行传播的。疥螨可以引起疥疮，疥疮可以通过密切接触通过皮肤等传染。滴虫是一种极微小有鞭毛的原虫生物，一般都是经由性行为而感染。阴道滴虫症是由滴虫所引起的一种性病，常致阴道粘膜炎症、粘膜充血，有假膜样白斑，白带增多，呈泡沫状。阴虱病是由寄生在人体阴毛和肛门周围体毛上的阴虱叮咬附近皮肤，而引起瘙痒的一种皮肤接触性传染性寄生虫病。主要表现为抓痕、血痂、继发性脓疱疮、毛囊炎或灰青色或淡青色斑等。真菌检测：由于对很多真菌感染的微生物学特性了解甚少，因而出现临床诊治的困难，加之真菌感染的临床表现多种多样，故通常会出现临床的误诊漏诊，导致患者病情迁延甚至危及生命。面对这种现状，如何提高真菌病的诊断水平已成为国内外临床工作者们共同关心的热点问题。尽管分子生物学等非培养技术的迅猛发展，目前仍缺乏早期快速的诊断方法，这些都给真菌病的预防和诊治带来挑战。因此，逐步开展临床致病真菌检测的研究对于临床上致病真菌的快速诊断及早期针对性的用药具有深刻的指导意义。临床常见的用于真菌检测的方法包括镜检法、培养法和组织病理学方法等。1.直接镜检法：直接涂片镜检是一种常用、简便而迅速的真菌检测方法,对真菌感染的诊断具有重要意义。直接涂片镜检是将所取标本直接置于玻片上,用染色或加10％KOH溶液,在光镜下检查。但是真菌与组织细胞之间的反差不大，鉴别真菌非常困难，还需要进一步培养鉴定。另外，直接镜检阴性也不能排除真菌感染的可能性。2.分离培养方法：从临床标本中对致病菌进行培养，目的在于从临床标本中分离真菌,以确定是否有真菌感染,特别是在直接镜检为阴性时。从疑似患者身上采集的标本可以直接接种在培养基上。一般培养超过2周仍无真菌生长,可报告阴性。培养法虽然检测结果准确性高，但由于真菌生长缓慢，培养常需要数天甚至数周才有结果，常会延误患者病情。3.组织病理学检查：真菌病的组织病理检查与直接镜检法和培养法同样具有相当重要的价值，尤其对于深部真菌病的诊断意义更大。通过病理组织的检查可确立感染的存在，排除真菌学检查中出现的污染等现象，PAS染色、嗜银染色、黏蛋白卡红染色及阿尔辛蓝染色等可有助于组织中真菌的检测。然而，组织病理学染色只能确定部分真菌种属，适用范围受到限制。皮肤寄生虫检测：皮肤寄生虫检测一般包括病原学检查方法、免疫学检查方法和分子生物学检查。1.病原学检查：临床上常取病人标本置于玻片上，滴一滴生理盐水或碘液，在光学显微镜下观察寄生虫形态。病原学检查是一种常用、简便的皮肤寄生虫检测方法,但检出率偏低，容易造成漏诊。2.免疫学检查方法：常见的包括皮内试验和血清免疫学试验，灵敏度及特异性均较高。这些方法主要用于检测寄生虫的特异性抗体，目前也已建立检测虫体循环抗原或排泄抗原的方法，以作早期诊断及疗效的考核。3.分子生物学检查：DNA探针杂交技术、聚合酶链反应(PCR)检测部分寄生虫的DNA。此法对部分寄生虫进行了分类鉴定，并对其重要功能基因进行克隆和筛选，已成为诊断和研究寄生虫病的重要手段，但目前由于技术限制并未普及。荧光染色法：荧光染色法通过使用化学荧光增白剂，与组织样品的β-多糖物质相结合，如纤维素、几丁质等。在荧光显微镜的紫外激发光下呈现荧光。通过荧光染料与真菌细胞壁及寄生虫的多糖成分非特异性结合，能够对真菌和寄生虫感染导致的各种疾病进行检测。早在上个世纪八十年代，就有研究者发现一种荧光增白剂能标记真菌细胞壁的几丁质成分，并开始使用荧光法检测真菌。国内外已经有很多实验证实了荧光染色法具有阳性率高的优点。然而目前荧光染色法未能得到广泛应用，终其原因主要有以下几个方面的问题。首先，荧光染色法一般需要三种主要成分，包括荧光增白剂、氢氧化钾和背景复染剂。荧光增白剂与组织中β-多糖成分相结合，产生荧光；氢氧化钾能溶解样品组织中的角质、消除杂质，并使组织透明；而背景复染剂能降低样品组织的背景亮度，使荧光信号更加清晰。然而，由于荧光增白剂在强碱环境中稳定性差，荧光素会发生析出沉淀现象；而且背景复染剂也会影响荧光增白剂的稳定性，会引起检测灵敏度的降低，甚至无法对真菌染色。因此，在现有技术下，荧光染色法所需的这三种染色液成分无法稳定长期共存，需分别配制储存，染色时需要三个步骤才能完成，操作上相对繁琐，染色时间相对较长，据早期文献记载，整个染色过程需要20分钟。随着技术的进步，现在市面上已经有荧光染色两步法的试剂盒，操作步骤得到简化，染色时间也相对缩短，但依旧无法达到临床对真菌及皮肤寄生虫快速筛查的要求。其次，此方法对检测的标本具有局限性，只能溶解一些杂质少的标本，而对于痰液、厚甲标本和大的脚皮，染色效果很差。因此此方法的临床适用范围得到限制。
技术实现思路
本专利技术是为了解决目前的荧光染色法的三种染色液成分无法稳定长期共存，需分别配制储存，操作繁琐，染色时间较长，对检测的标本具有局限性，只能溶解一些杂质少的标本，临床适用范围受限的技术问题，而提供一种检测真菌和皮肤寄生虫的荧光染色剂。本专利技术的一种检测真菌和皮肤寄生虫的荧光染色剂由水、荧光增白剂、碱、背景复染剂、促溶剂和保湿剂组成；所述的荧光染色剂中荧光增白剂的浓度是0.0001g/mL～0.03g/mL，碱的浓度是0.1g/mL～0.2g/mL、背景复染剂的浓度是0.0002g/mL～0.03g/mL，促溶剂的体积浓度是5％～40％，保湿剂的体积浓度是0.5％～35％。本专利技术原理：荧光染色法通过使用化学荧光增白剂，与组织样品的β-多糖物质相结合，如纤维素、几丁质等，而不能结合组织细胞。在荧光显微镜的紫外激发光下呈现荧光。将组织细胞与真菌区分且反差巨大。本专利技术加入合适比例的氢氧化钾能溶解样品组织中的角质、消除杂质，促溶剂的加入使得样品组织中的角质溶解得更加迅速，组织更加透明，通过加入保湿剂解决了荧光增白剂与背景染料两者互溶放置后稳定性较差的问题，提高检测灵敏度。选取的背景复染剂能降低样品组织的背景亮度，使荧光信号更加清晰。促溶剂和保湿剂的协同作用使得荧光增白剂能够与背景复染剂稳定性好，只需一步操作即可完成染色，临床使用更加方便、快捷，原本需要5本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种检测真菌和皮肤寄生虫的荧光染色剂，其特征在于检测真菌和皮肤寄生虫的荧光染色剂由水、荧光增白剂、碱、背景复染剂、促溶剂和保湿剂组成；所述的荧光染色剂中荧光增白剂的浓度是0.0001g/mL～0.03g/mL，碱的浓度是0.1g/mL～0.2g/mL、背景复染剂的浓度是0.0002g/mL～0.03g/mL，促溶剂的体积浓度是5％～40％，保湿剂的体积浓度是0.5％～35％。

【技术特征摘要】
1.一种检测真菌和皮肤寄生虫的荧光染色剂，其特征在于检测真菌和皮肤寄生虫的荧光染色剂由水、荧光增白剂、碱、背景复染剂、促溶剂和保湿剂组成；所述的荧光染色剂中荧光增白剂的浓度是0.0001g/mL～0.03g/mL，碱的浓度是0.1g/mL～0.2g/mL、背景复染剂的浓度是0.0002g/mL～0.03g/mL，促溶剂的体积浓度是5％～40％，保湿剂的体积浓度是0.5％～35％。2.根据权利要求1所述的一种检测真菌和皮肤寄生虫的荧光染色剂，其特征在于所述的荧光增白剂为二苯乙烯类型荧光增白剂。3.根据权利要求2所述的一种检测真菌和皮肤寄生虫的荧光染色剂，其特征在于所述的二苯乙烯类型荧光增白剂为荧光增白剂28或卡尔科弗卢尔荧光增白剂。4.根据权利要求1所述的一种检测真菌和皮肤寄生虫的荧光染色剂，其特征在于所述的水为双蒸水。5.根据权利要求1所...

【专利技术属性】
技术研发人员：付微，赵玉宇，
申请(专利权)人：付微，
类型：发明
国别省市：黑龙江;23