全血中血清淀粉样蛋白A定量检测试剂以及检测方法技术

本发明专利技术公开了一种全血中血清淀粉样蛋白A定量检测试剂，包括试剂R1、试剂R2，所述试剂R1包括：质破胞组分，缓冲液，表面活性剂，电解质，防腐剂，反应促进剂，稳定剂；所述试剂R2包括：胶乳颗粒，表面活性剂，电解质，防腐剂，稳定剂，缓冲液；以及，该破胞组分用以去除干扰测定的血红细胞，其中不分离血细胞，使用原样全血；该胶乳颗粒包被有抗人SAA抗体，其粒径为50‑300nm。本发明专利技术的优点是：检测样本可以为末梢血等全血，可以同时满足灵敏度高和线性范围宽的要求，具有良好的抗干扰性、准确度及精密度，能够满足临床检验要求。本发明专利技术还公开了一种全血中血清淀粉样蛋白A定量检测方法。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及检测试剂
，尤其是涉及一种全血中血清淀粉样蛋白A定量检测试剂。本专利技术还涉及一种全血中血清淀粉样蛋白A定量检测方法。
技术介绍
血清淀粉样蛋白A(serumamyloidAprotein，SAA)是一种急性时相反应蛋白，可在炎症或疾病感染期的48～72h内迅速升高，并升高至最初浓度的1000倍左右，且在疾病恢复期迅速下降(UrieliShovalS，et,al.ExpressionandfunctionofserumamyloidA，amajoracutephaseprotein，innormalanddiseasestates[J].CurrOpinHematol，2000，7(1):64-69.)。感染性疾病中，SAA和CRP联合检测有助于鉴别细菌感染和病毒感染(SAA在病毒和细菌感染中均升高，而病毒感染中CRP几乎不升高或升高不明显)。此外，监测SAA/CRP比值比单独检测SAA或CRP具有更大的应用价值。SAA水平还与肿瘤、淀粉样变性疾病、冠心病、排斥反应(MullerT，etal.Prospectiveanalysisof10differentparametersofacuterenalallograftrejection[J].TransplantProc，1992，24(6):2731-2734.)等疾病(陈长强，等.血清淀粉样蛋白A在疾病应用中的研究进展[J].检验医学，2012，27(9):776-779.)密切相关，为临床诊断提供更好的参考信息。近年来，随着对SAA临床意义的深入研究，其在临床中的应用范围越来越广泛。目前，用于临床上检测SAA的方法主要有胶乳增强免疫比浊法、放射性免疫测定法(RIA)、免疫速率散射比浊法、微球捕获酶免疫法(MEIA)、酶联免疫吸附试验(ELISA)等。这些方法均以血清或血浆为检测样本，均需对全血进行预先分离红细胞再进行测试，需要专门的分离装置(如离心机等)，增加操作步骤，费时费力，同时加大了样本需求量，对于儿童和新生儿以及大面积烧伤患者等，采足检测需求量的血样一直是个难题。目前还没有能够用全血检测SAA的试剂盒或检测方法。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种全血中血清淀粉样蛋白A定量检测试剂，它具有使用的检测样本可以为末梢血等全血，可以同时满足灵敏度高和线性范围宽的要求，具有良好的抗干扰性、准确度及精密度，能够满足临床检验要求的特点。本专利技术还公开了一种全血中血清淀粉样蛋白A定量检测方法。本专利技术所采用的第一个技术方案是：全血中血清淀粉样蛋白A定量检测试剂，包括试剂R1、试剂R2，所述试剂R1包括：质量百分比为0.10％～2.00％的破胞组分，pH为6.0-8.0、浓度为10-100mmol/L的缓冲液，质量百分比为0.01％-3.00％的表面活性剂，质量百分比为0.10％-3.00％的电解质，质量百分比为0.01％-2.00％的防腐剂，质量百分比为0.01％-4.00％的反应促进剂，质量百分比为0.01％-3.00％的稳定剂；所述试剂R2包括：质量百分比为0.10％-0.80％的胶乳颗粒，质量百分比为0.01％-3.00％的表面活性剂，质量百分比为0.10％-3.00％的电解质，质量百分比为0.01％-2.00％防腐剂，质量百分比为0.02％-10.00％的稳定剂，pH为6.0-8.0、浓度为10-100mmol/L的缓冲液；以及该破胞组分用以去除干扰测定的血红细胞，其中不分离血细胞，使用原样全血；该胶乳颗粒包被有抗人SAA抗体，其粒径为50-300nm。所述破胞组分为聚乙二醇辛基苯基醚、脂肪酸盐、硫酸酯盐、磷酸酯盐、聚山梨酯、烷基苯磺酸钠中的一种。所述缓冲液为甘氨酸缓冲液、Tris缓冲液、磷酸缓冲液、硼酸盐缓冲液中的一种。所述表面活性剂为非离子型表面活性剂，为Tween20、Tween80、Span20、TritonX-100中的至少一种。所述电解质为钠离子、钾离子、钙离子、镁离子中的至少一种。所述防腐剂为叠氮钠、山梨酸盐类、苯甲酸及其盐类、亚硝酸钠、庆大霉素中的至少一种。所述反应促进剂为聚乙二醇2000、聚乙二醇4000、聚乙二醇8000、聚乙二醇6000中的至少一种。所述稳定剂为牛血清蛋白、明胶、乙二醇、乳糖、HEDTA、蔗糖中的至少一种。本专利技术所采用的第二个技术方案是：全血中血清淀粉样蛋白A定量检测方法，所述检测方法采用的检测仪器为：特定蛋白仪；分析方法为：两点终点法；反应方向为：上升反应；校准方式为：Spline；测定波长为：546nm；测定温度为：37℃；样本：R1：R2＝8μl:250μl:50μl；步骤为：8μl样本和250μl试剂R1混匀后于37℃孵育3-5min，随即加入50μl试剂R2，读取第1读数点吸光度A1，混匀后37℃孵育5min，读取第2读数点吸光度A2，计算A2-A1差值，根据校准曲线计算所得值及相应红细胞压积，得出样本中血清淀粉样蛋白A含量。本专利技术所具有的优点是：1、样本需求量少：采用全血样本，减少用量，省去分离步骤，省时省力，更适合采血困难患者。2、线性范围宽：为5-500mg/L，健康人参考范围为≤10mg/L，基本满足临床需要。3、检测灵敏度高：试剂缓冲液、界面活性剂等成分的配比提高了反应的灵敏度。4、准确度高：与同品牌同方法学血清SAA检测试剂的相关性达到0.9978，且同品牌同方法学血清SAA检测试剂与进口试剂的相关性达到0.9988，基本可替代市面上现有的血清SAA检测试剂或检测方法。5、试剂稳定：试剂各成分配比优化，试剂在2-8℃密闭条件下可稳定18个月。即，本专利技术的全血中血清淀粉样蛋白A定量检测试剂以及检测方法使用的检测样本可以为末梢血等全血，可以同时满足灵敏度高和线性范围宽的要求，具有良好的抗干扰性、准确度及精密度，能够满足临床检验要求。附图说明下面结合附图和实施例对本专利技术进一步说明：图1是本专利技术的全血中血清淀粉样蛋白A检测试剂的操作步骤示意图；图2是本专利技术的全血SAA试剂线性范围测定；图3是本专利技术全血SAA试剂和Purebio血清SAA试剂相关性；图4是Purebio血清SAA试剂和国际知名品牌对比试剂/方法相关性；图5-1、图5-2、图5-3分别是本专利技术全血SAA试剂对胆红素、脂肪乳、类风湿因子的抗干扰性试验结果。具体实施方式实施例1全血中血清淀粉样蛋白A定量检测试剂，包括试剂R1、试剂R2。具体的讲：试剂R1包括：破胞组分、缓冲液、表面活性剂、电解质、防腐剂、反应促进剂、稳定剂。其中：破胞组分为质量百分比为0.10％的脂肪酸盐，缓冲液为pH值为6.0、浓度为10mmol/L的甘氨酸缓冲液，表面活性剂为质量百分比为0.01％的Tween20，电解质为质量百分比为3.00％的钠盐，防腐剂为质量百分比为0.01％的叠氮钠，反应促进剂为质量百分比为0.01％的聚乙二醇2000，稳定剂为质量百分比为0.01％的牛血清蛋白。试剂R2包括：胶乳颗粒、缓冲液、表面活性剂、电解质、防腐剂、稳定剂。其中：胶乳颗粒的百分含量为0.10％、包被有SAA抗体、粒径大小为50nm，缓冲液为pH值为6.0、浓度为10mmol/L的甘氨酸缓冲液，表面活性剂为质量百分比为0.01％的T本文档来自技高网...

【技术保护点】
全血中血清淀粉样蛋白A定量检测试剂，包括试剂R1、试剂R2，其特征在于：所述试剂R1包括：质量百分比为0.10％～2.00％的破胞组分，pH为6.0‑8.0、浓度为10‑100mmol/L的缓冲液，质量百分比为0.01％‑3.00％的表面活性剂，质量百分比为0.10％‑3.00％的电解质，质量百分比为0.01％‑2.00％的防腐剂，质量百分比为0.01％‑4.00％的反应促进剂，质量百分比为0.01％‑3.00％的稳定剂；所述试剂R2包括：质量百分比为0.10％‑0.80％的胶乳颗粒，质量百分比为0.01％‑3.00％的表面活性剂，质量百分比为0.10％‑3.00％的电解质，质量百分比为0.01％‑2.00％防腐剂，质量百分比为0.02％‑10.00％的稳定剂，pH为6.0‑8.0、浓度为10‑100mmol/L的缓冲液；以及该破胞组分用以去除干扰测定的血红细胞，其中不分离血细胞，使用原样全血；该胶乳颗粒包被有抗人SAA抗体，其粒径为50‑300nm。

【技术特征摘要】
1.全血中血清淀粉样蛋白A定量检测试剂，包括试剂R1、试剂R2，其特征在于：所述试剂R1包括：质量百分比为0.10％～2.00％的破胞组分，pH为6.0-8.0、浓度为10-100mmol/L的缓冲液，质量百分比为0.01％-3.00％的表面活性剂，质量百分比为0.10％-3.00％的电解质，质量百分比为0.01％-2.00％的防腐剂，质量百分比为0.01％-4.00％的反应促进剂，质量百分比为0.01％-3.00％的稳定剂；所述试剂R2包括：质量百分比为0.10％-0.80％的胶乳颗粒，质量百分比为0.01％-3.00％的表面活性剂，质量百分比为0.10％-3.00％的电解质，质量百分比为0.01％-2.00％防腐剂，质量百分比为0.02％-10.00％的稳定剂，pH为6.0-8.0、浓度为10-100mmol/L的缓冲液；以及该破胞组分用以去除干扰测定的血红细胞，其中不分离血细胞，使用原样全血；该胶乳颗粒包被有抗人SAA抗体，其粒径为50-300nm。2.根据权利要求1所述的全血中血清淀粉样蛋白A定量检测试剂，其特征在于：所述破胞组分为聚乙二醇辛基苯基醚、脂肪酸盐、硫酸酯盐、磷酸酯盐、聚山梨酯、烷基苯磺酸钠中的一种。3.根据权利要求1所述的全血中血清淀粉样蛋白A定量检测试剂，其特征在于：所述缓冲液为甘氨酸缓冲液、Tris缓冲液、磷酸缓冲液、硼酸盐缓冲液中的一种。4.根据权利要求1所述的全血中血清淀粉样蛋白A定量检测试剂，其特征在于：所述表面活性剂为...

【专利技术属性】
技术研发人员：王剑，林清菁，范翠翠，周金庆，
申请(专利权)人：宁波普瑞柏生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：浙江;33