一种用于治疗糖尿病的地衣提取物制造技术

本发明专利技术公开了一种用于治疗糖尿病的地衣提取物，提取物制备方法包括：(a)将干燥的地衣用75％乙醇溶液热回流提取，合并提取液，浓缩至无醇味得到乙醇提取浓缩液；(b)将步骤(a)所得乙醇提取浓缩液用水稀释，依次用石油醚、乙酸乙酯和水饱和的正丁醇萃取，减压浓缩，分别得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；(c)正丁醇萃取物用水溶解，过滤，用大孔树脂富集活性成分，先用10％乙醇冲洗10个柱体积除去大极性成分，再用65％乙醇洗脱12个柱体积，收集65％洗脱液，减压浓缩，即得地衣提取物。该提取物能够降低糖尿病小鼠的血糖和血脂，提高糖尿病小鼠抗氧化能力，可以开发成治疗糖尿病的药物。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及中药提取物领域，具体涉及一种地衣提取物及含有该提取物的药物制剂，该地衣提取物可以应用于糖尿病的治疗。
技术介绍
地衣是低等植物的重要类群，为菌藻共生体。其中的共生菌以子囊菌为主，少数为担子菌，共生藻为蓝藻或绿藻。由于地衣的生物学特性主要是菌藻共生体中真菌的体现，故又称为地衣型真菌。地衣被认为是生物互惠共生现象中最完善的典型。全世界已知地衣500多个属，26000多个种，我国有232属1766种。地衣入药在我国具有悠久的历史，《诗经》中就有关于松萝药用的记载。据各种本草及有关资料记载，约有200种地衣入药。地衣是真菌和藻类高度结合的共生复合体，由于地衣共生的特殊性，其含有的初生代谢产物(多糖类)和次生代谢产物(酚酸类)构成了天然有机化合物独特的类群。近几年从地衣植物中分离得到了许多具有活性的新化合物，包括：地衣多糖、地衣酸(缩酚酸类、缩酚酸环醚类、缩酚酮类和二苯并呋喃类)和醌类等其他成分。地衣入药在我国已有悠久的历史，早在公元前600年西周时期的《诗经》中，就有松萝的记载；南北朝梁·陶弘景所著的《名医别录》中记载石濡(石蕊)“可明目，益精气”；李时珍的《本草纲目》中记述了多种地衣的形态、习性及药效，如“女萝(松萝)能疗痰热温虐，可为吐汤，利水道”，“石濡有生津利咽、解热化痰”。近年药理研究发现，地衣具有抗肿瘤、抗病毒、抗辐射、抗菌、抗氧化等多方面的生物活性。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种地衣提取物，其制备方法和液相分析方法，含有该提取物的药物制剂及利用该提取物制备治疗糖尿病的药物的用途。本专利技术的上述目的是通过下面的技术方案得以实现的：一种地衣提取物，该提取物由以下方法制备：(a)将干燥的地衣用75％乙醇溶液热回流提取，合并提取液，浓缩至无醇味得到乙醇提取浓缩液；(b)将步骤(a)所得乙醇提取浓缩液用水稀释，依次用石油醚、乙酸乙酯和水饱和的正丁醇萃取，减压浓缩，分别得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；(c)正丁醇萃取物用水溶解，过滤，用大孔树脂富集活性成分，先用10％乙醇冲洗10个柱体积除去大极性成分，再用65％乙醇洗脱12个柱体积，收集65％洗脱液，减压浓缩，即得地衣提取物。进一步地，步骤(c)中所述大孔树脂为AB-8型大孔树脂。为了能够通过建立HPLC指纹图谱的方法控制不同批次制备的地衣提取物的批间差异，所述地衣提取物的液相分析方法为：色谱柱：Diamonsil C18柱(4.6mm×250mm，5μm)；流动相：A为乙腈，B为0.1％磷酸溶液(三乙胺调节pH值至6.2)；梯度洗脱程序：0.01～70min，A 20％→80％；流动相流速：1.0mL·min-1；检测波长：240nm；柱温：30℃；进样量：10μL。药物制剂，含有治疗有效量的所述地衣提取物和药学上可接受的载体。所述的地衣提取物在制备治疗糖尿病的药物中的应用。所述的药物制剂在制备治疗糖尿病的药物中的应用。本专利技术提取物用作药物时，可以直接使用，或者以药物制剂的形式使用。所述药物制剂含有治疗有效量的本专利技术地衣提取物，其余为药物学上可接受的、对人和动物无毒和惰性的可药用载体和/或赋形剂。所述的可药用载体或赋形剂是一种或多种选自固体、半固体和液体稀释剂、填料以及药物制品辅剂。将本专利技术的药物制剂以单位体重服用量的形式使用。本专利技术提取物可通过口服或注射的形式施用于需要治疗的患者。用于口服时，可将其制成片剂、缓释片、控释片、胶囊、滴丸、微丸、混悬剂、乳剂、散剂或颗粒剂、口服液等；用于注射时，可制成灭菌的水性或油性溶液、无菌粉针、脂质体或乳剂等。本专利技术的优点：本专利技术通过对地衣进行提取、除杂、富集处理，能得到具有糖尿病治疗作用的提取物；本专利技术提供的液相分析方法可以用于建立该提取物的指纹图谱，用于控制不同批次制备的提取物的批间差异。附图说明图1为地衣提取物HPLC液相图谱。具体实施方式下面结合实施例进一步说明本专利技术的实质性内容，但并不以此限定本专利技术保护范围。尽管参照较佳实施例对本专利技术作了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对本专利技术的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本专利技术技术方案的实质和范围。实施例1：地衣提取物制备药材来源：地衣购自安徽亳州中药材市场，产地陕西。主要试剂：食品级乙醇购自上海凌峰化学试剂有限公司；医药级AB-8大孔树脂购自天津波鸿树脂有限公司；乙腈为HPLC级，购于TEDIA；85％磷酸为HPLC级，购于TEDIA；色谱用纯净水为哇哈哈纯净水。制备方法：将10kg干燥的地衣用75％乙醇溶液热回流提取(25L×3次)，合并提取液，浓缩至无醇味得到乙醇提取浓缩液(3L)；将所得乙醇提取浓缩液用水稀释至4L，依次用石油醚(4L×3次)、乙酸乙酯(4L×3次)和水饱和的正丁醇(4L×3次)萃取，减压浓缩，分别得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物275g；(c)正丁醇萃取物用1L水溶解，医用脱脂棉过滤，用AB-8大孔树脂(2kg，柱体积1.5L)富集活性成分，先用10％乙醇冲洗10个柱体积(15L)除去大极性成分，再用65％乙醇洗脱12个柱体积(18L)，收集65％洗脱液，减压浓缩，即得地衣提取物115g。实施例2：液相色谱分析供试品溶液配制：取实施例1方法制得的地衣提取物5mg至50mL棕色容量瓶中，加30mL 20％乙腈水溶液超声溶解，冷却至室温后，继续加20％乙腈水溶液定容。分析方法：高效液相色谱仪：Agilent 1260，二元泵；色谱柱：Diamonsil C18柱(4.6mm×250mm，5μm)；流动相：A为乙腈，B为0.1％磷酸溶液(三乙胺调节pH值至6.2)；梯度洗脱程序：0.01～70min，A 20％→80％；流动相流速：1.0mL·min-1；检测波长：240nm；柱温：30℃；进样量：10μL。用制备的10批次的地衣提取物进行分析，进行色谱峰匹配，结果1～9号峰在10批样品色谱图中均出现。因此标定9个峰为共有色谱峰，据此建立该提取物的HPLC质量控制图谱，结果见图1。该10批次的提取物药理活性相似。实施例3：地衣提取物药理试验一、材料和方法1、材料(1)实验样品：地衣提取物(MGC)自制。(2)实验动物：雄性昆明种小白鼠，体重(22±2)g，由南京大学实验动物中心提供。(3)主要试剂：四氧嘧啶购自Sigma公司；消渴丸购自广州中药一厂；血糖试剂盒购自北京中生生物工程技术公司；SOD，GSH-Px，MDA试剂盒购自南京建成生物工程研究所；TC，TG，HDL-C测试盒购自上海科欣生物技术研究所。(4)主要仪器：Shimadzu UV-265FW紫外-可见分光光度计，日本。2、方法(1)实验性四氧嘧啶糖尿病小鼠模型的复制四氧嘧啶配成体积分数为2％的生理盐水溶液。小鼠禁食24h后按200mg·kg-1剂量进行四氧嘧啶腹腔注射，72h后用尿糖试纸检测尿糖，用血糖测定试剂盒检测空腹血糖，选取血糖值大于11.1mmol·L-1、尿糖呈强阳性(+++)的小鼠作为高血糖模型小鼠。(2)地衣提取物对四氧嘧啶糖尿病小鼠血糖的影响实验型糖尿病小鼠随机分为7组，即正常对照组(Control)、高血糖模型组(Alloxan)、阳性对照组和4个试验组。实验期间，正常对照组和高血糖组灌胃生本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种地衣提取物，其特征在于所述提取物由以下方法制备：(a)将干燥的地衣用75％乙醇溶液热回流提取，合并提取液，浓缩至无醇味得到乙醇提取浓缩液；(b)将步骤(a)所得乙醇提取浓缩液用水稀释，依次用石油醚、乙酸乙酯和水饱和的正丁醇萃取，减压浓缩，分别得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；(c)正丁醇萃取物用水溶解，过滤，用大孔树脂富集活性成分，先用10％乙醇冲洗10个柱体积除去大极性成分，再用65％乙醇洗脱12个柱体积，收集65％洗脱液，减压浓缩，即得地衣提取物。

【技术特征摘要】
1.一种地衣提取物，其特征在于所述提取物由以下方法制备：(a)将干燥的地衣用75％乙醇溶液热回流提取，合并提取液，浓缩至无醇味得到乙醇提取浓缩液；(b)将步骤(a)所得乙醇提取浓缩液用水稀释，依次用石油醚、乙酸乙酯和水饱和的正丁醇萃取，减压浓缩，分别得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；(c)正丁醇萃取物用水溶解，过滤，用大孔树脂富集活性成分，先用10％乙醇冲洗10个柱体积除去大极性成分，再用65％乙醇洗脱12个柱体积，收集65％洗脱液，减压浓缩，即得地衣提取物。2.根据权利要求1所述的地衣提取物，其特征在于：步骤(c)中所述大孔树脂为AB-8型大孔树脂。3...

【专利技术属性】
技术研发人员：钟雪萍，
申请(专利权)人：成都宝科生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：四川;51