自动化微生物分子检测方法及其应用技术

本发明专利技术属于微生物的测定或检验方法技术领域，特别涉及一种自动化微生物分子检测方法及其应用。该检测方法，包括试样预处理步骤、核酸提纯步骤、靶标基因定量检测步骤，上述步骤均在多孔板内通过人机互交的形式由机械臂自动完成；试样预处理步骤将核酸裂解液移进行抽滤得到核酸初提液的步骤；靶标基因定量检测步骤之前还包括富集步骤。本方法将现有技术中由手工完成的试样预处理步骤整合进整体自动化流程，有利于实现微生物分子检测全过程的自动化控制，适合在土壤检测、植物检测、食品检测中应用。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于微生物的测定或检验方法
，特别涉及一种自动化微生物分子检测方法及其应用。
技术介绍
微生物分子检测技术是基于微生物特异靶标分子进行的一种微生物检测技术。微生物，特别是有害微生物，在进行正常新陈代谢的同时，会合成一些独特的、能够表征自身特征的化合物，如黄曲霉毒素等。这些化合物的合成途径具有特异性，其中一些关键控制基因往往是独一无二的，其基因拷贝数能够直接反映微生物个体的数量，因此，利用微生物中特异的靶标基因进行微生物定量检测已成为国内外公认的有效方法之一。荧光定量PCR法通过荧光染料或荧光标记的特异性的探针，对PCR产物进行标记跟踪，实时在线监控反应过程，结合相应的软件可以对产物进行分析，计算待测样品模板的初始浓度。利用其对各种食品中各类微生物的检测已获得我国各级政府和各类食品检测机构的认可，如2007年国家质量监督检验检疫总局发布的食品中致病菌检测方法-实时PCR法(SN/T 1870-2007)等。虽然国内外研究人员在微生物靶标基因研究已获得重大成果，已完成了沙门氏菌、志贺氏菌、金黄色葡萄球菌、单核细胞增生李斯特氏菌、空肠弯曲菌、肠出血性大肠埃希氏菌、副溶血性本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种自动化微生物分子检测方法，其特征在于：包括试样预处理步骤、核酸提纯步骤、靶标基因定量检测步骤，上述步骤均通过人机互交的形式由机械臂自动完成；试样预处理步骤包括：(1)在待测试样中添加细胞裂解液；(2)根据需要进行加热和/或振荡处理得到核酸裂解液；(3)将核酸裂解液移进行抽滤得到核酸初提液；核酸提纯步骤包括：(1)在核酸初提液中加入高盐溶液和可与核酸特异结合的磁性粒子，振摇后施加磁场吸附磁性粒子，移除全部液体；(2)加入盐洗液，振摇洗脱去除磁性粒子结合的盐粒子，施加磁场吸附磁性粒子，移除全部液体；(3)加入乙醇，振摇洗脱去除磁性粒子结合的其它杂质，施加磁场吸附磁性粒子，移除全部液体，并室温干...

【技术特征摘要】
1.一种自动化微生物分子检测方法，其特征在于：包括试样预处理步骤、核酸提纯步骤、靶标基因定量检测步骤，上述步骤均通过人机互交的形式由机械臂自动完成；试样预处理步骤包括：(1)在待测试样中添加细胞裂解液；(2)根据需要进行加热和/或振荡处理得到核酸裂解液；(3)将核酸裂解液移进行抽滤得到核酸初提液；核酸提纯步骤包括：(1)在核酸初提液中加入高盐溶液和可与核酸特异结合的磁性粒子，振摇后施加磁场吸附磁性粒子，移除全部液体；(2)加入盐洗液，振摇洗脱去除磁性粒子结合的盐粒子，施加磁场吸附磁性粒子，移除全部液体；(3)加入乙醇，振摇洗脱去除磁性粒子结合的其它杂质，施加磁场吸附磁性粒子，移除全部液体，并室温干燥；(4)加入核酸洗脱液，振摇洗脱吸附在磁性粒子上的核酸，施加磁场吸附磁性粒子，移取全部液体得到高纯核酸；靶标基因定量检测步骤包括：(1)在高纯核酸中加入靶标基因PCR扩增上下游引物、PCR扩增缓冲液、检测探针，依次进行解链、退火、延伸进行靶基因的PCR扩增；(2)于每延伸结束时进行荧光检测，通过荧光值计算靶标基因拷贝数，继而计算出待分析试样中靶标微生物的克隆数。2.如权利要求1所述的自动化微生物分子检测方法，其特征在于：所述试样预处理步骤、核酸提纯步骤、靶标基因定量检测步骤均在多孔板内进行。3.如权利要求1所述的自动化微生物分子检测方法，其特征在于：所述试样预处理步骤中，加热温度控制在4-99℃，振荡频率控制在10-100rpm。4.如权利要求1所述的自动化微生物分子检测...

【专利技术属性】
技术研发人员：吴酬飞，
申请(专利权)人：湖州高亿诺生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：浙江;33