恶性实体瘤化疗药耐药检测试剂盒制造技术

本发明专利技术公开了一种恶性实体瘤化疗药耐药检测试剂盒，其包含恶性实体瘤耐药细胞cDNA标准品、SYBR Green聚合酶链式反应体系、用于扩增MDR1及LIMK1基因和管家基因的引物对。本发明专利技术使用时，通过分别将肺癌等恶性实体瘤细胞间断暴露在梯度增高的长春新碱中，建立了差异耐药细胞亚系。通过荧光定量PCR仪检测发现MDR1基因随着耐药程度增加表达增强；LIMK1基因在低、中度耐药的细胞中表达增强，而在高度耐药的细胞中表达回调。因此联合检测MDR1及LIMK1基因的表达，可用于诊断恶性实体瘤是否耐药及耐药程度，同时可用于制备化疗药耐药筛查制剂，能够为恶性实体瘤化疗患者提供精准用药方案。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种恶性实体瘤化疗药耐药检测试剂盒
技术介绍
上世纪70年代起，国家卫生部等部门在全国范围内进行过多次疾病死因调查，结果显示我国恶性肿瘤死亡率变化呈现逐年增高的趋势。1973年至1975年，我国男女合计恶性肿瘤死亡率为74.2/10万；到1990年至1992年，这一数字上升至108.26/10万，增长45.9％；2004年至2005年，已攀升至135.88/10万，30年间增长了近一倍。到2010年又升高至162.87/10万。其中肺癌患病率及死亡率增加是恶性肿瘤合计死亡率上升的首要原因，其次为结肠、直肠、肛门癌、乳腺癌等。化疗结合手术一直以来是治疗肿瘤的经典方法，然而肿瘤对化疗药物的耐受限制了化疗药的疗效。目前化疗方案常采用的经验性用药即“千人一药”不仅给患者带来麻烦，也会造成资源浪费，常常造成严重的不良反应，包括骨髓抑制、胃肠道反应、脱发、转氨酶升高等。肿瘤细胞在接受一种化疗药物作用之后会变得对很多不同结构的化疗药物表现出广泛耐药，即多药耐药(MDR)。在肿瘤细胞水平上，存在着不同的耐药机制，包括增加药物外排、改变药物作用靶点、DNA损伤的修复、激活其他通路等等，本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种恶性实体瘤化疗药耐药检测试剂盒，其特征在于：包含恶性实体瘤耐药细胞cDNA标准品、SYBR Green聚合酶链式反应体系、用于扩增MDR1及LIMK1基因和管家基因的引物对。

【技术特征摘要】
1.一种恶性实体瘤化疗药耐药检测试剂盒，其特征在于：包含恶性实体瘤耐药细胞cDNA标准品、SYBR Green聚合酶链式反应体系、用于扩增MDR1及LIMK1基因和管家基因的引物对。2.根据权利要求1所述的一种恶性实体瘤化疗药耐药检测试剂盒，其特征在于：所述恶性实体瘤耐药细胞cDNA标准品是通过分别将各种恶性实体瘤细胞间断暴露在梯度增高的长春新碱(VCR)中，建立的差异耐药细胞亚系，提取RNA后逆转录成cDNA获得。3.根据权利要求1或2所述的一种恶性实体瘤化疗药耐药检测试剂盒，其特征在于：所述恶性实体瘤耐药细胞cDNA标准品包含敏感细胞cDNA、低度耐药细胞cDNA(+)、中度耐药细胞cDNA(++)、高度耐药细胞cDNA(+++)。4.根据权利要求1或2所述的一种恶性实体瘤化疗药耐药检测试剂盒，其特征在于：所述的恶性实体瘤为肺癌、胃癌、肝癌、结肠癌、直肠癌、骨肉瘤、乳腺癌、卵巢癌或子宫内膜癌。5.根据权利要求1所述的一种恶性实体瘤化疗药耐药检测试剂盒，其特征在于：所述的SYBR Green聚合酶链式反应体系包含PCR缓冲液、dNTPs、SYBR Green荧光染料。6.根据权利要求1所述的一种恶性实体瘤化疗药耐药检测试剂盒，其特征在于：所述扩增LIMK1、MDR1基因及管家基因的引物对的序列如表1：表1：扩增引物对序列7.根据权利要求5所述的一种恶性实体瘤化疗药耐药检测试剂盒，其特征在于：所述PCR缓冲液包含25mM KCL、2.5mM MgCL2、200mM(NH4)2SO4。8.根据权利要求1所述的一种恶性实体瘤化疗药耐药检测试剂盒，其特征在于：还包含M-MLV逆转录体系；逆转录体系包含T重复寡核苷酸OligodT、逆转录反应液、M-MLV逆转录酶、RNA酶抑制剂和dNTPs。9.根据权利要求8所述的一种恶性实体瘤化疗药耐药检测试剂盒，其特征在于：所述逆转录反应液包含250mM PH8.3的Tris-HCL、375mM的KCL、15mM的MgCL2和50mM的DTT。10.一种使用恶性实体瘤化疗药耐药检测试剂盒诊断恶性实体瘤的方法，方法包括以下步骤：(1)、利用RNA提取试剂提取样本总RNA；①收集...

【专利技术属性】
技术研发人员：王岩，
申请(专利权)人：王岩，
类型：发明
国别省市：吉林;22