一种酪蛋白-豆蔻精油脂质体抗菌剂的制备方法和用途技术

本发明专利技术属于抗菌剂及食品添加剂或者化妆品领域，具体涉及一种酪蛋白‑豆蔻精油脂质体抗菌剂的制备及应用。本发明专利技术通过将豆蔻精油包裹在酪蛋白脂质体中，以实现减少豆蔻精油在施用过程中的挥发，从而减少豆蔻精油的浪费，提高其利用率，达到长效抗菌与高效利用的目的。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于抗菌剂及食品添加剂或者化妆品领域，具体涉及一种酪蛋白-豆蔻精油脂质体抗菌剂的制备方法及应用。
技术介绍
豆蔻，多年生常绿草本植物，是姜科植物，产出暖性精油。精油无色或黄色，甜而温暖，主要成分是松油醇，桉油醇，姜烯和柠檬烯。肉豆蔻含挥发油、脂肪油、苯丙素、木脂素和黄酮等多种化学成分，具有抗菌消炎、镇痛、止泻、抗肿瘤等广泛的药理作用。豆蔻精油有良好的抗炎，镇痛，抑菌作用，对各种食源性病原菌有较好的抗菌效果，且安全、无毒副作用，在肉制品加工中应用广泛，可去异味，抑细菌，增辛香。国内有很多关于豆蔻在医学应用的专利申请。CN103893226A公开了肉豆蔻提取物在制备抗痛风的药物、食品或保健品的应用。CN102988333A公开了豆蔻明在制备防治肠炎的药物或食品中的应用。CN102036662A公开了一种利用肉豆蔻衣木脂素预防和治疗ppAR介导的疾病的方法。CN103719464A专利技术了一种肉豆蔻脾胃虚弱保健茶。CN1709467A公开了一种复方草豆蔻滴丸及其制备方法。CN101508937A公开了一种超临界二氧化碳提取肉豆蔻精油的方法,可以获得高品质的肉豆寇精油产品。CN103638074A公开了一种肉豆寇挥发油在制备治疗抑郁症药物中的应用。虽然豆蔻精油在医学，食品和化妆品行业被广泛应用，具有较好的杀菌、增香等特点，但是豆蔻精油易挥发，暴露在空气中不稳定，所以要寻找有效的方法降低肉桂精油在使用过程中的挥发程度，延长其贮存期。纳米脂质体能将精油包裹在内，并且纳米脂质体不会对豆蔻精油的主要活性成分造成破坏。纳米脂质体使豆蔻精油中的活性成分与外界环境隔绝开来，可以降低豆蔻精油的挥发性，延长保存期。但由于脂质体的缓释作用，包裹精油的脂质体保质期有限。因此，选用酪蛋白制成稳定性更高的酪蛋白脂质体。此外，纳米脂质体由于它们的亚细胞尺寸，能加强脂质体的被动吸收机制，减少物质运输阻力，从而增强精油的抗菌效果。
技术实现思路
本专利技术的目的是公开一种酪蛋白-豆蔻精油脂质体的制备方法及其用途，通过将豆蔻精油包裹在酪蛋白脂质体中，以实现减少豆蔻精油在施用过程中的挥发，从而减少豆蔻精油的浪费，提高其利用率，达到长效抗菌与高效利用的目的。本专利技术由豆蔻精油，大豆卵磷脂，胆固醇和表面活性剂，酪蛋白制成酪蛋白-豆蔻精油脂质体。本专利技术的制备方法是将豆蔻精油，大豆卵磷脂，胆固醇混合于有机溶剂，减压蒸发形成光滑的薄膜，加入水相介质溶解膜状物并超声成乳液，通过离心和微孔滤膜过滤，得到粒径为纳米级的豆蔻精油脂质体，其特征在于：将纳米级的豆蔻精油脂质体与酪蛋白和表面活性剂的溶液混合，搅拌均匀，通过低温冷冻缓慢融化的方法使酪蛋白镶嵌在脂质体上，通过温和超声使脂质体闭合，最终形成包裹豆蔻精油的酪蛋白脂质体。本专利技术的大豆卵磷脂和胆固醇的质量比为5:1；用于制备精油脂质体的乳液含有豆蔻精油的浓度为4.0mg/mL；表面活性剂为十二烷基聚乙二醇醚(Brij-35)，得到包裹豆蔻精油的酪蛋白脂质体后其最终浓度为1.0mg/mL。本专利技术中所述的有机溶剂为氯仿。本专利技术中所用的水相介质是根据中国药典2000版标准配制的磷酸盐缓冲溶液，pH值6.5～7.4，优选7.2。所述的酪蛋白和表面活性剂的溶液是将酪蛋白分散在Brij-35的磷酸盐缓冲液中得到的，Brij-35浓度为10mg/mL，分散后溶液中酪蛋白浓度为1.0mg/mL。本专利技术中脂质体上镶嵌的蛋白为酪蛋白，豆蔻精油脂质体与酪蛋白和表面活性剂的溶液以体积比10:1混合，混合后溶液中酪蛋白浓度为0.1mg/mL，Brij-35浓度为1.0mg/mL。本专利技术中低温冷冻缓慢融化是指将混合液在-18℃下冷冻2h，随后在0℃下缓慢融化2h。本专利技术中温和超声是指在低功率50W条件下超声2h，温度范围0-10℃。附图说明图1酪蛋白-豆蔻精油脂质体的包封率。图2酪蛋白-豆蔻精油脂质体的粒径与多分散系数(PDI)。图3酪蛋白-豆蔻精油脂质体对大肠杆菌的抗菌效果。图4酪蛋白-豆蔻精油脂质体对金黄色葡萄球菌的抗菌效果。表1酪蛋白-豆蔻精油脂质体的Zeta电位。具体实施方式通过下面实例说明本专利技术的具体实施方式，但本专利技术的保护内容，不仅局限于此实施例1酪蛋白-豆蔻精油脂质体的包封率1实验材料2实验方法1)豆蔻精油脂质体的制备①称取1g大豆卵磷脂，0.2g胆固醇和200mg的豆蔻精油，加入50mL氯仿使其溶解。②在旋转蒸发仪中蒸发至溶剂蒸干，蒸发温度为10～30℃，圆底烧瓶内壁会形成光滑的薄膜；然后将所得产品放入真空干燥箱中，30℃，真空状态下干燥24h。③加入50mL的磷酸盐缓冲液到圆底烧瓶中进行水化，水化超声波功率为100W，超声时间为5h。④将所得混合液于细胞超微粉碎仪中以功率360W，工作10s间隙5s，粉碎30min。⑤将所得产品进行离心，4000rpm，15min，取上层液体。⑥将所得液体用0.22μm滤膜进行过滤，得滤液。2)酪蛋白-豆蔻精油脂质体的制备①按照上述豆蔻精油脂质体的制备方法，制备豆蔻精油浓度为4mg/mL的豆蔻精油脂质体。②将酪蛋白超声分散在含10mg/mL Brij-35的磷酸盐缓冲液中，最终形成酪蛋白—Brij-35溶液，其中酪蛋白浓度为1.0mg/mL。③在50mL豆蔻精油脂质体中添加5mL 1mg/mL的酪蛋白—Brij-35溶液，混合均匀。④将所得混合液于超声条件下扩散10min。⑤将所得混合液在-18℃下冷冻2h。⑥将所得混合液在0℃下缓慢融化2h。⑦通过温和超声(功率50W，2h，KQ-300DE，昆山市超声仪器有限公司)使脂质体闭合，所得溶液即为酪蛋白-豆蔻精油脂质体。3)包封率的测定用无水乙醇稀释豆蔻精油，逐级稀释成浓度分别为0.1、0.2、0.4、0.6、0.8mg/mL的标准溶液。然后，分别吸取1μL标准溶液进行GC-MS分析，对其主要成分的谱峰面积进行自动积分，绘制主成分峰面积-豆蔻精油浓度标准曲线。取1mL酪蛋白-豆蔻精油脂质体样品，13500rpm，离心3h，倒掉上清液。接着加入1mL乙醇破乳剂，超声3h。最后以10000rpm的转速离心15min，取上清液，用于GC-MS分析。制备好的脂质体样品，对精油主成分的峰面进行自动积分，再根据绘制的标准曲线，计算出脂质体中豆蔻精油的含量。则：3酪蛋白-豆蔻精油脂质体的包封率包封率是评价脂质体制剂质量好坏的最重要的指标，也是脂质体能否发挥较普通制剂高效、低毒等特点的关键。由图1可看出，豆蔻精油脂质体的包封率为41.21％，酪蛋白-豆蔻精油脂质体的包封率为78.62％。因此制备酪蛋白-豆蔻精油脂质体可以明显提高脂质体的包封率。实施例2酪蛋白-豆蔻精油脂质体的粒径与多分散系数(PDI)1实验材料①空白脂质体②豆蔻精油脂质体③酪蛋白-豆蔻精油脂质体2实验方法用美国布鲁克海文仪器公司产的，型号为BI-9000的高浓度激光粒度仪测定酪蛋白-豆蔻精油脂质体的粒径和多分散系数(PDI)值，所测样品放入样品池直接测量即可。3酪蛋白-豆蔻精油脂质体的粒径与多分散系数(PDI)多分散系数(PDI)直接反映酪蛋白-豆蔻精油脂质体的稳定性，因此是主要参考指标，脂质体的PDI在0～0.3范围内属于最好，在0.3～0.7范围内较差，但本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种酪蛋白‑豆蔻精油脂质体抗菌剂的制备方法，将豆蔻精油，大豆卵磷脂，胆固醇混合于有机溶剂，减压蒸发形成光滑的薄膜，加入水相介质溶解膜状物并超声成乳液，通过离心和微孔滤膜过滤，得到粒径为纳米级的豆蔻精油脂质体，其特征在于：将纳米级的豆蔻精油脂质体与酪蛋白和表面活性剂的溶液混合，搅拌均匀，通过低温冷冻缓慢融化的方法使酪蛋白镶嵌在脂质体上，通过温和超声使脂质体闭合，最终形成包裹豆蔻精油的酪蛋白脂质体。

【技术特征摘要】
1.一种酪蛋白-豆蔻精油脂质体抗菌剂的制备方法，将豆蔻精油，大豆卵磷脂，胆固醇混合于有机溶剂，减压蒸发形成光滑的薄膜，加入水相介质溶解膜状物并超声成乳液，通过离心和微孔滤膜过滤，得到粒径为纳米级的豆蔻精油脂质体，其特征在于：将纳米级的豆蔻精油脂质体与酪蛋白和表面活性剂的溶液混合，搅拌均匀，通过低温冷冻缓慢融化的方法使酪蛋白镶嵌在脂质体上，通过温和超声使脂质体闭合，最终形成包裹豆蔻精油的酪蛋白脂质体。2.如权利要求1所述的一种酪蛋白-豆蔻精油脂质体抗菌剂的制备方法，其特征在于：大豆卵磷脂和胆固醇的质量比为5:1；用于制备精油脂质体的乳液含有豆蔻精油的浓度为4.0mg/mL；表面活性剂为十二烷基聚乙二醇醚(Brij-35)，得到包裹豆蔻精油的酪蛋白脂质体后其最终浓度为1.0mg/mL。3.如权利要求1所述的一种酪蛋白-豆蔻精油脂质体抗菌剂的制备方法，其特征在于：所述的有机溶剂为氯仿。4.如权利要求1所述的一种酪蛋白-豆蔻精油脂质体抗菌剂的制备方法，其特征在于：所用的水...

【专利技术属性】
技术研发人员：崔海英，李伟，林琳，
申请(专利权)人：江苏大学，
类型：发明
国别省市：江苏;32