同时确定血清学特征和评估HIV感染后持续时间的方法技术

本发明专利技术公开了同时检测针对人免疫缺陷病毒(HIV)的两种或更多种抗原的抗体和确定HIV感染后的大概时间(持续时间)，从而确认感染，和确定HIV感染的近度的方法和其变型。在给定时间段内最近感染HIV的个体的数量可进一步用于评估群体中HIV的发病率。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】相关申请的交叉引用本申请要求于2014年10月8日提交的美国临时申请号62/061,569的益处，其通过引用以其整体并入本文。
本专利技术涉及同时确定针对人免疫缺陷病毒(HIV)的两种或更多种抗原的抗体和确定HIV感染后的大概时间(持续时间)，从而确认感染，以及确定HIV感染的近度的方法。在给定时间段内最近感染HIV的个体的数量可进一步用于评估群体中HIV的发病率。
技术介绍
人免疫缺陷病毒(HIV)的感染使得病毒在T淋巴细胞中复制。HIV的复制使得病毒组分，例如，核酸和蛋白质的量增加。病毒蛋白质的产生引起宿主的免疫应答，包括产生特异性针对HIV抗原的抗体。可通过直接检测病毒组分，即，病毒核酸或蛋白质或间接检测引起的针对HIV抗原的抗体实现HIV感染的诊断。因为可使用各种方法，例如，聚合酶链式反应(PCR)扩增核酸，所以可在感染之后的最早的近度检测到病毒核酸，随后检测到病毒蛋白质，和再之后检测到针对病毒抗原特异性的抗体。HIV感染的确诊通常涉及两个步骤：使用HIV诊断测试的初始诊断，随后使用更特异性的确认试验来确认初始有反应性的样品。经检测对HIV抗原特异性抗体的HIV感染的初始诊断是最经济和广泛使用的用于HIV感染诊断的方法。这些试验或测试通常称为诊断或筛选试验或测试。检测样品中HIV抗体的最常用试验是称为酶免疫试验(EIA)、酶联免疫吸附试验(ELISA)和基于侧流的免疫试验的那些试验。因为这些方法可产生假阳性测试结果，通过这些试验测试为阳性的样品需要进一步测试，以使用通常称为HIV确认试验或HIV补充试验的另一类型的试验来确认感染。一种常用的确认试验是蛋白质印迹试验，其能够检测和区分针对大于一种HIV
抗原的抗体。当使用蛋白质印迹试验，样品中的抗体与下述任何两种或更多种HIV抗原反应时，确认HIV感染：p24、p65、gp41和/或gpl20/gpl60。但是，进行蛋白质印迹试验是浪费时间的和劳动密集的，并且结果通常非常主观。最近这些年，已经认识到在没有有效的疫苗或治疗疗法的情况下，如今进一步减少HIV扩散的最有效方式是预防。所以，大量的努力和资源被投入到各种HIV预防程序中。可通过测量群体中新的感染率或发病率来监测预防程序的效果。传统上，通过跟踪代表群体的研究组来确定HIV发病率，其是昂贵且困难的方法。因此，开发了HIV感染“摄政(regency)”或近度(recency)试验。这些试验设计为确定感染是否是最近出现的(例如，12个月内)。某些时间段，例如6个月、12个月、18个月、或24个月内群体中最近感染率是群体的HIV发病率。HIV发病率是用于流行病学表征、评估HIV/AIDS预防程序的效果以及设计和评估HIV干预试验的重要手段。已经为HIV近度试验开发了三种不同类型的血清学试验。这些试验包括本质上评估在一个近度的抗体滴度的“失谐(detuned)”试验、测量与总的IgG相比抗HIV抗原的IgG百分数的BED-CEIA试验，以及测量抗体-抗原结合强度的亲和力试验。这些试验中，亲和力试验好像是用于HIV感染的近度确定的最精确试验。一种亲和力试验使用用于近度确定的次包被的(undercoated，未完全包被的)固相，其称为限制抗原亲和力EIA或LAg亲和力-EIA，如在科学出版物中公开(Wei等，Aids Res Hum Retroviruses.2010；26:61和Duong等，PLoS One.2012；7:e33328)，其仅仅作为参考引入本文。LAg亲和力-EIA是基于这样的观察：越长的HIV感染产生越多的针对HIV抗原具有较高亲和性(即，强的结合)和/或更好的亲和力的抗体并且因此越多的结合的抗体，即使在具有次包被抗原的固相上。但是，这些近度试验可仅仅用于先前已经确认HIV抗体阳性的样品，即，已经使用确认试验进行了测试的那些样品。因为初始HIV-1诊断和近度试验的分离，并非所有的HV-1阳性样品测试为新的感染，从而导致群体中的发病率的评估可能不精确。而且，因为对于样品的HIV感染近度确定至少进行两个试验，因此评估群体中的HIV近度仍是昂贵的。本专利技术提供了将HIV感染近度试验并入确认试验的方法，从而由试验确认的所有HIV阳性样品将自动具有近度试验结果。广泛采用该试验将显著增加HIV发病率评估的样品量，使得更精确评估群体中的HIV发病率。因为无论如何初始对于HIV诊断试验有反应性的所有样品都应通过确认试验，所以当HIV近度试验并入确认试验时，获得用于评估群体中HIV发病率的明显更多近度试验结果的成本
并不会显著大于进行确认试验本身。根据本专利技术，各种另外的功能可添加至试验。功能包括但不限于区分HIV-1和HIV-2感染和诊断具有未知状态HIV感染的样品。
技术实现思路
在一个实施方式中，提供了确定HIV感染和评估HIV感染近度的方法，该方法包括下述步骤：a)提供包含HIV特异性抗体的样品；b)对样品进行HIV感染确认试验；和c)对样品进行HIV感染近度确定试验；其中步骤(b)和步骤(c)同时进行，从而能够同时确定样品中的HIV感染和HIV感染近度。在一些实施方式中，该方法进一步包括下述步骤：d)对样品进行HIV-1/HIV-2感染区分试验；从而能够区分样品中的HIV-1和HIV-2感染。在其他实施方式中，HIV感染确认试验是免疫试验，其包括包被对HIV抗体特异性的抗原的多个固相。在进一步的实施方式中，多个固相的每一个包被有源自HIV gag基因、HIV env基因或HIV pol基因的不同HIV抗原。在另外的实施方式中，源自HIV gag基因的不同HIV抗原是衣壳蛋白p24或其片段、变体或衍生物。在进一步的实施方式中，源自HIV env基因的不同HIV抗原是包膜蛋白gpl60、gpl20或gp41或其片段、变体或衍生物。在另外的实施方式中，源自HIV pol基因的不同HIV抗原是调节蛋白p65或其片段、变体或衍生物。在进一步的实施方式中，当HIV感染确认试验检测到针对至少两种HIV基因产物的HIV特异性抗体时，样品被确认为HIV阳性样品。在其他实施方式中，HIV感染近度确定试验是免疫试验，其包括次包被有HIV抗原的固相。在进一步的实施方式中，使用另外的固相，其包被有最佳量的与次包被相同的HIV抗原。在另外的实施方式中，近度确定试验包括检测来自固相的信号和使用信号确定样品是否来自最近感染HIV的个体。在进一步的实施方式中，当信号低于截止值时，样品来自最近感染HIV的个体。在其他实施方式中，HIV-1/HIV2感染区分试验是免疫试验，其包括包被有源自HIV-2基因的抗原或其片段、变体或衍生物的固相。在进一步的实施方式中，免疫试验进一步包括第二固相，其包被有源自HIV-2基因的第二抗原或其片段、变体或衍生物。在另外的实施方式中，HIV-2特异性抗原是GANN-5肽或其片段、变体或衍生物。在进一步的实施方式中，当包被固相的HIV-2特异性抗原或其片段、变体或衍生物对于样品中的两个或更多个抗体有反应性时，样品被确认为HIV-2阳性样品。在其他实施方式中，HIV感染确认试验、HIV感染近度确定试验和HIV-1/HIV-2感染区分试验中的固相由相同的材料制备并且本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种确定HIV感染和评估HIV感染近度的方法，所述方法包括下述步骤：a)提供包括HIV特异性抗体的样品；b)对所述样品进行HIV感染确认试验；和c)对所述样品进行HIV感染近度确定试验；其中步骤(b)和步骤(c)同时进行，从而确保同时确定所述样品中的HIV感染和HIV感染近度。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2014.10.08 US 62/061,5691.一种确定HIV感染和评估HIV感染近度的方法，所述方法包括下述步骤：a)提供包括HIV特异性抗体的样品；b)对所述样品进行HIV感染确认试验；和c)对所述样品进行HIV感染近度确定试验；其中步骤(b)和步骤(c)同时进行，从而确保同时确定所述样品中的HIV感染和HIV感染近度。2.权利要求1所述的方法，进一步包括下述步骤：d)对所述样品进行HIV-1/HIV-2感染区分试验；从而能够区分所述样品中的HIV-1和HIV-2感染。3.权利要求1或2所述的方法，其中所述HIV感染确认试验是免疫试验，其包括包被有特异性针对HIV抗体的抗原的多个固相。4.权利要求3所述的方法，其中所述多个固相的每一个包被有源自HIV gag基因、HIV env基因或HIV pol基因的不同HIV抗原。5.权利要求4所述的方法，其中源自所述HIV gag基因的所述不同HIV抗原是衣壳蛋白p24或其片段、变体或衍生物。6.权利要求4所述的方法，其中源自所述HIV env基因的所述不同HIV抗原是包膜蛋白gpl60、gpl20或gp41或其片段、变体或衍生物。7.权利要求4所述的方法，其中源自所述HIV pol基因的所述不同HIV抗原是调节蛋白p65或其片段、变体或衍生物。8.权利要求1至7任一项所述的方法，其中当通过所述HIV感染确认试验检测到针对至少两种HIV基因产物的HIV特异性抗体时，所述样品被确认为HIV阳性样品。9.权利要求1或2所述的方法，其中所述HIV感染近度确定试验是免疫试验，其包括次包被有HIV抗原的固相。10.权利要求9所述的方法，其中用于HIV感染近度确定试验的所述免疫试验包括另外的固相，所述另外的固相包被有最佳量的与所述次包被的相同的HIV抗原。11.权利要求9所述的方法，包括检测来自所述固相的信号和使用所述信号确定所述样品是否来自最近感染HIV的个体。12.权利要求9或10所述的方法，包括检测来自次包被的所述固相和包被有最佳量的相同抗原的所述固相的信号和使用所述两个固相的信号倍数(R-因子)以确定所述样品是否来自最近感染HIV的个体。13.权利要求11或12所述的方法，其中当所述信号或信号倍数小于截止值时，所述样品来自最近感染HIV的个体。14.权利要求2所述的方法，其中所述HIV-1/HIV-2感染区分试验是免疫试验，其包括包被有源自HIV-2基因的抗原或其片段、变体或衍生物的固相。15.权利要求9或10所述的方法，其中所述HIV抗原本质上与用于确认HIV感染的HIV抗原之一相同。16.权利要求14所述的方法，其中所述免疫试验进...

【专利技术属性】
技术研发人员：尚伦·切蒂，李兴祥，
申请(专利权)人：艾维可股份有限公司，
类型：发明
国别省市：美国;US