本发明专利技术提供一种操作简便、快捷、无需额外设备，而且灵敏度高的食品中禁用脂溶性偶氮染料快速检测试剂盒及其检测方法。包含：1)还原试剂1：0.06mol/L pH6.0柠檬酸盐缓冲液5mL；2)还原试剂2：连二亚硫酸钠1g；3)提取试剂A：甲基叔丁醚，4mL；3)提取试剂B：1mol/L盐酸溶液，2mL；4)试剂1：50g/L NaNO2溶液，0.05mL；5)试剂2：25g/L NH4SO3NH2溶液；6)试剂3：2g/L盐酸萘乙二胺溶液，0.05mL；7)试剂4：60g/L的尿素溶液，0.05mL。本发明专利技术根据偶氮染料被还原降解成无色的芳香胺，芳香胺经重氮耦合反应后生成偶氮化合物显色的原理，通过化学反应显色快速判定食品中是否含有脂溶性偶氮染料。具有操作简便、快速、成本低廉的优点。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种用于食品中禁用偶氮染料检测的快速筛查检测方法。本专利技术无需色谱仪器分离，运用化学方法直接显色测定食品中禁用偶氮染料，用于食品禁用偶氮染料的快速筛查。
技术介绍
目前，化学合成工业染料有几千种，其中大部分为偶氮染料，广泛应用于工业生产纺织品、皮毛制品、木制品已及陶瓷制品的着色。这些染料色谱齐全、色泽鲜艳、价格低廉、不易褪色。食品安全国家标准食品添加剂使用标准GB 2760-2011中只有柠檬黄、胭脂红、日落黄等几种水溶性合成色素被允许用作食品添加剂，并对其使用范围和用量有严格的限定。全国打击违法添加非食用物质和滥用食品添加剂专项整治领导小组陆续发布了六批《食品中可能违法添加的非食用物质和易滥用的食品添加剂名单》，把频频出现在食品中的苏丹红、对位红等其他偶氮类工业染料视为违法添加的非食用物质。偶氮类工业染料大部分含有芳香结构，可在人体内代谢分解产生芳香胺类物质，而大多数芳香胺类物质可诱发人体癌变或引起人体皮肤、黏膜或呼吸道过敏的致癌和致敏，具有高毒性、高残留和“三致”(致畸、致癌、致突变)等副作用。尤其是苏丹红染料进入人体后，在还原酶的作用下代谢产生相应的胺类。国际癌症研究机构(IARC)将苏丹红类及其代谢产物列为二类或三类致癌物。而偶氮类工业染料非法添加到食品的事件频发，自2003年欧盟首次在辣椒粉中检测出苏丹红I，各国陆续在食品中发现了各种工业染料，例如：2005年2月英国发现350多种食品收“苏丹红I号”污染之后，英国食品标准局又公布了在35种食品中发现“对位红”，国内监管部门发现
豆腐加工过程中使用量碱性橙II，火锅底料中检出罗丹明B，冷冻虾仁中检出了酸性红染料。因此为防止及监测工业染料在食品中的滥用，必需建立快速准确的检测方法，以保障食品安全和消费者健康。目前检测食品中非法添加的偶氮类工业染料的方法很多，包括高效液相色谱法、气相色谱-质谱联用法、液相色谱-质谱联用法、薄层色谱法、电化学分析法、毛细管电泳法和免疫法等。其中常用的方法是高效液相色谱法和液相色谱-质谱联用法。由于偶氮类工业染料的种类比较多，不法经营者使用的染料不尽相同，目前国标方法和文献报道的检测方法不能完全囊括多种偶氮染料，虽然能满足日常检查要求，但是遇到重大食品安全突发事件，就无法在短时间内完成多种目标化合物的快速筛查工作，给食品检测和卫生监管部门的执法带来了很大的困难。快速筛查工作需要方法通用性强、选择性好、灵敏度高、便捷省时。建立一种能涵盖大部分脂溶性偶氮类化合物的快速筛选检测方法是十分必要的。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种操作简便、快捷、无需额外设备，而且灵敏度高的食品中禁用偶氮染料快速检测试剂盒及其检测方法。本专利技术的基本原理为：偶氮染料被还原降解成无色的芳香胺，芳香胺经重氮耦合反应后生成偶氮化合物显色。利用这一原理，将食品中的偶氮染料还原后，萃取芳香胺化合物，再在合适的条件下转化成偶氮化合物显色，根据有无颜色及颜色的深浅快速判定食品中是否含有偶氮染料。本专利技术的试剂盒包括：1、还原试剂1：0.06mol/L pH6.0柠檬酸盐缓冲液5mL；配制方法：称取柠檬酸12.526g和氢氧化钠6.320g溶于1000mL水中；2、还原试剂2：连二亚硫酸钠1g；3、提取试剂A：甲基叔丁醚，4mL；4、提取试剂B：1mol/L盐酸溶液，2mL；5、试剂1：50g/L NaNO2溶液；6、试剂2：50～200g/L NH4SO3NH2溶液；7、试剂3：2g/L盐酸萘乙二胺溶液；8、试剂4：60g/L的尿素溶液。本专利技术的检测方法步骤如下：1)样品提取：取样品5g，加10mL水分散，再加入10mL正己烷萃取，吸取有机相4mL，挥干，用4mL乙腈溶解，作为测试液待用；2)样品还原：加入5mL还原试剂1和1g还原试剂2，密闭，用力振摇，置于70℃水浴中保温30min，取出后迅速冷却至室温；3)萃取脱色：还原液中加入提取试剂A 4mL，用力振摇，静置分层，取上层液2mL于装有2mL提取试剂B的反应瓶中，用力振摇，静置分层，取下层溶液1mL置于空反应瓶中；4)显色：在空反应瓶中分别加入试剂1、试剂2、试剂3、试剂4各一滴，每加一种试剂都要充分摇匀，立即观察溶液颜色的变化；5)筛选判定：如果样品溶液显色后颜色发生明显变化，即可判定为阳性样品，通过色谱仪器进一步确认；否则为阴性样品，直接判定为合格。本专利技术的工作原理为：通过还原和脱色处理，利用重氮偶合反应显色测定芳香胺，简单、快捷、成本低廉，无需任何仪器设备，实现了食品中禁用偶氮染料检测的快速筛查。具体实施方式试剂的配制：(1)亚硝酸钠溶液(50g/L)：称取5.0g NaNO2，用水溶解，定容至100mL；(2)盐酸(1.0mol/L)：量取5mL盐酸，用水稀释至60mL；(3)尿素溶液(60g/L)：称取6.0g尿素，用水溶解，定容至100mL；(4)盐酸萘乙二胺溶液(2g/L)：称取0.2g盐酸萘乙二胺，用水溶解，定容至100mL；(5)NaOH溶液(10g/L)：称取10g NaOH，用水溶解，定容至100mL；(6)对氨基苯磺酸溶液(100g/L)：称取5～20g NH4SO3NH2，用水溶解，定容至100mL；具体检测步骤如下：1)样品提取：取样品5g，加10mL水分散，再加入10mL正己烷萃取，吸取有机相4mL，挥干，用4mL乙腈溶解，作为测试液待用；2)样品还原：加入5mL还原试剂1和1g还原试剂2，密闭，用力振摇，置于70℃水浴中保温30min，取出后迅速冷却至室温；3)萃取脱色：还原液中加入提取试剂A 4mL，用力振摇，静置分层，取上层液2mL于装有2mL提取试剂B的反应瓶中，用力振摇，静置分层，取下层溶液1mL置于空反应瓶中；4)显色：在空反应瓶中分别加入试剂1、试剂2、试剂3、试剂4各一滴，每加一种试剂都要充分摇匀，立即观察溶液颜色的变化；筛选判定：如果样品溶液显色后颜色发生明显变化，即可判定为阳性样品，通过色谱仪器进一步确认；否则为阴性样品，直接判定为合格。实施实例1市售辣椒酱、番茄酱、咸蛋黄、熟肉，自制辣椒粉(经高压液相色谱检测，已知不含苏丹红、对位红等偶氮染料)，分别取样品5g，各加10mL水分散，再加入5mL正己烷萃取，吸取有机相1mL，挥干，用1mL乙腈溶解，作为测试液待用。按照实施方式第2～4步骤进行反应。反应液颜色没有变化，由此判定样品中无脂溶性偶氮染料，为阴性。实施实例2取实施实例1中的市售辣椒酱、番茄酱、咸蛋黄、熟肉，自制辣椒粉样品适量，分别加入苏丹红I、苏丹红II、苏丹红III、苏丹红IV以及对位红标准溶液，拌匀，制成含标准色素0.1mg/kg样品。按照实施方式第2～4步骤进行反应。观测到反应液显紫色，由此判定样品含无脂溶性偶氮染料，为阳性。实施实例3取实施实例1中自制辣椒粉(阴性样品)，按照实施实例1中的样品提取步骤提取，制成测试液。在测试液中分别加入苏丹红I、苏丹红II、苏丹红III、苏丹红IV和对位红标准溶液，使测试液中标准溶液浓度分别为0，0.1，0.5，1，5，10mg/kg。按照实施方式第2～4步骤进行反应，反应液在540nm波长处检测吸光度，根据添加标准品浓度和对应的吸收度，绘制本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种用于食品中禁用脂溶性偶氮染料检测的快速筛查检测方法，其特征在于它包括：1)样品提取：取样品5g，加10mL水分散，再加入10mL正己烷(环己烷、丙酮、氯仿或几种有机溶剂混合物)萃取，吸取有机相4mL，挥干，用4mL乙腈溶解，作为测试液待用；2)样品还原：加入5mL还原试剂1和1g还原试剂2，密闭，用力振摇，置于70℃水浴中保温30min，取出后迅速冷却至室温；3)萃取脱色；还原液中加入提取试剂A4mL，用力振摇，静置分层，取上层液2mL于装有2mL提取试剂B的反应瓶中，用力振摇，静置分层，取下层溶液1mL置于空反应瓶中；4)显色：在空反应瓶中分别加入试剂1、试剂2、试剂3、试剂4各一滴，每加一种试剂都要充分摇匀，立即观察溶液颜色的变化；5)筛选判定：如果样品溶液显色后颜色发生明显变化，即可判定为阳性样品，通过色谱仪器进一步确认；否则为阴性样品。
【技术特征摘要】
1.一种用于食品中禁用脂溶性偶氮染料检测的快速筛查检测方法，其特征在于它包括：1)样品提取：取样品5g，加10mL水分散，再加入10mL正己烷(环己烷、丙酮、氯仿或几种有机溶剂混合物)萃取，吸取有机相4mL，挥干，用4mL乙腈溶解，作为测试液待用；2)样品还原：加入5mL还原试剂1和1g还原试剂2，密闭，用力振摇，置于70℃水浴中保温30min，取出后迅速冷却至室温；3)萃取脱色；还原液中加入提取试剂A4mL，用力振摇，静置分层，取上层液2mL于装有2mL提取试剂B的反应瓶中，用力振摇，静置分层，取下层溶液1mL置于空反应瓶中；4)显色：在空反应瓶中分别加入试剂1、试剂2、试剂3、试剂4各一滴，每加一种试剂都要充分摇匀，立即观察溶液颜色的变化；5)筛选判定：如果样品溶液显色后颜色发生明显变化，即可判定为阳性样品，通过色谱仪...
【专利技术属性】
技术研发人员：李利东，陆茂林，宓晓黎，黄丽俊，沈依群，袁建兴，杜姝莲，司竑飞，张晓来，钱国芬，许春燕，
申请(专利权)人：江苏省微生物研究所有限责任公司，
类型：发明
国别省市：江苏;32
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