本发明专利技术公开了灰树花多糖的提取工艺及其在制备修复胃粘膜创伤的药物上的用途，采用水提→超滤→醇沉的方法获得灰树花多糖，并发现灰树花多糖可以通过上调TFF2的mRNA和蛋白表达水平、EGF的蛋白表达水平，下调TGF‑β1的mRNA和蛋白表达水平等方面，促进胃粘膜上皮细胞增殖和向胃粘膜创伤区域迁移，从而达到促进胃粘膜愈合修复的目的，为灰树花的开发利用及战胜胃粘膜创伤和慢性胃炎提供了依据。
【技术实现步骤摘要】
灰树花多糖的提取工艺及其在制备修复胃粘膜创伤的药物上的用途
本专利技术涉及了灰树花多糖的提取工艺及其在制备修复胃粘膜创伤的药物上的用途。
技术介绍
胃黏膜具有防止胃液自身消化与各种损伤因子的刺激，保护胃黏膜细胞的生理功能的组织结构，该屏障的完整性是胃黏膜得以保护的重要基础。胃黏膜常因化学因素(喝酒、浓茶、咖啡、吸烟及刺激性药品如阿司匹林、消炎痛等)、物理因素(过冷、过烫、过于粗糙的食物或暴饮暴食)、细菌或其毒素刺激的原因造成损伤。临床多表现为胃脘部疼痛不适、饱胀、嗳气、反酸、胃烧灼感、恶心、呕吐等一系列症状。胃镜检查多出现不同程度的胃黏膜改变，如粘膜水肿、糜烂、渗出、充血、或由浅表溃疡，并有可能有出血或渗血等。胃黏膜损伤在临床上十分常见，是引发多数胃病的主要原因，目前尚无有效的防治手段。灰树花Grifolafrondosa(Dicks.)Gray隶属真菌界，担子菌门，伞菌纲，多孔菌目，盖孔菌科，又名贝叶多孔菌，是一种食、药兼用蕈菌。大量的药理研究证明，灰树花多糖(GFP)具有显著的抗肿瘤、降血糖、降血脂、抑制B型肝炎DNA复制、抗HIV病毒、抗氧化以及改善免疫系统功能等功效，但暂未有其在修复胃粘膜创伤方面应用的报道。
技术实现思路
本专利技术的目的在于克服现有技术的不足之处，提供了灰树花多糖的提取工艺及其在制备修复胃粘膜创伤的药物上的用途。本专利技术解决其技术问题所采用的技术方案之一是：一种灰树花多糖的提取工艺，取灰树花子实体干品，粉碎后过10目筛，加入8～12倍量水微沸提取1～3h，过滤，滤液浓缩至Brix≥15％，离心，上清液先后泵入三个截留分子量依次减小的超滤分离组件，上一个超滤分离组件的滤出液继续泵入下一个超滤分离组件，分别收集每个超滤分离组件的截留液和滤出液，得到分子量>100kDa的第一截留液、30kDa<分子量<100kDa的第二截留液、5kDa<分子量<30kDa的第三截留液和分子量<5kDa的滤出液；上述第一截留液、第二截留液、第三截留液和滤出液分别按照1:2～4的体积比分别加入95％的乙醇醇沉2～5h，过滤，分别制得第一提取物，为分子量>100kDa、多糖含量33～37％的灰树花多糖，第二提取物，为30kDa<分子量<100kDa、多糖含量25～30％的灰树花多糖，第三提取物，为5kDa<分子量<30kDa、多糖含量18～22％的灰树花多糖，第四提取物，为分子量<5kDa、多糖含量6～10％的灰树花多糖。一实施例中：所述超滤膜均经以下步骤清洗后再行超滤：去离子水清洗→NaOH回流清洗→去离子水清洗→HCl清洗→去离子水清洗至超滤膜干净。一实施例中：所述超滤步骤中，通过透过液的折光率变化判断超滤进度。本专利技术解决其技术问题所采用的技术方案之二是：灰树花多糖在制备修复人胃粘膜创伤的药物上的用途。一实施例中：所述灰树花多糖为多糖含量6～37％的灰树花多糖，该多糖含量6～37％的灰树花多糖的临床上可接受的盐、临床上可接受的制剂；含有该多糖含量6～37％的灰树花多糖的复方药物组合物，该复方药物组合物的临床上可接受的盐、临床上可接受的制剂；所述多糖含量6～37％的灰树花多糖例如为多糖含量33～37％的灰树花多糖，多糖含量25～30％的灰树花多糖，多糖含量18～22％的灰树花多糖，多糖含量6～10％的灰树花多糖，最好是多糖含量35％的灰树花多糖，多糖含量27％的灰树花多糖，多糖含量20％的灰树花多糖，多糖含量8％的灰树花多糖。一实施例中：所述灰树花多糖为根据技术方案之一的提取工艺得到的第一提取物和/或第二提取物和/或第三提取物和/或第四提取物，或该第一提取物和/或第二提取物和/或第三提取物和/或第四提取物的临床上可接受的盐、临床上可接受的制剂，或含有该第一提取物和/或第二提取物和/或第三提取物和/或第四提取物的复方药物组合物，或该复方药物组合物的临床上可接受的盐、临床上可接受的制剂。一实施例中：所述修复人胃粘膜创伤是指促进人胃粘膜上皮细胞增殖和/或促进人胃粘膜上皮细胞向胃粘膜创伤区域迁移。一实施例中：所述修复人胃粘膜创伤是指调节人胃粘膜上皮细胞中的攻击因子和防御因子的表达水平平衡。一实施例中：所述促进人胃粘膜上皮细胞增殖和/或促进人胃粘膜上皮细胞向胃粘膜创伤区域迁移是指上调人胃粘膜上皮细胞的表皮生长因子EGF表达，和/或上调人胃粘膜上皮细胞的三叶因子2TFF2表达，和/或下调人胃粘膜上皮细胞的转移生长因子TGF-β1表达。一实施例中：还包括预防和/或治疗慢性胃炎。本专利技术所指的临床上可接受的盐意指能保留药物本身性质和生物学有效性的盐，包括与无机酸或有机酸形成的酸加成盐；所述无机酸例如盐酸、氢溴酸、硝酸、磷酸、硫酸、高氯酸等；所述有机酸例如乙酸、抗坏血酸、三氟乙酸、丙酸、羟乙酸、(D)或(L)乳酸、(D)或(L)苹果酸、草酸、富马酸、马来酸、甲磺酸、乙磺酸、苯甲酸、对甲苯磺酸、水杨酸、肉桂酸、扁桃酸、酒石酸、柠檬酸、琥珀酸、羟乙磺酸和丙二酸等。本专利技术所指的临床上可接受的制剂，包括但不限于片剂、胶囊剂、口服液、颗粒剂、丸剂、散剂、滴丸剂、注射剂等。本专利技术所涉及的仪器、试剂等，除有特别说明外，均可从市面上购得；本专利技术所涉及的各实验方法，除有特别说明外，均为本领域常规技术。本技术方案与
技术介绍
相比，它具有如下优点：1.灰树花多糖在提取过程中容易水解，造成提取率降低，本专利技术采用超滤的方式有效避免了灰树花多糖的水解损失，还能有效去除杂质，并实现不同多糖含量的灰树花多糖的有效分离。2.本专利技术的结果表明，灰树花多糖可以调节人胃粘膜上皮细胞中重要的防御性细胞因子TFF2、EGF、TGF-β1的表达水平，通过上调TFF2的mRNA和蛋白表达水平、EGF的蛋白表达水平，下调TGF-β1的mRNA和蛋白表达水平等方面，促进人胃粘膜上皮细胞增殖和向胃粘膜创伤区域迁移，从而达到促进人胃粘膜愈合修复的目的。本专利技术提供了灰树花多糖在制备修复胃粘膜创伤的药物上的用途，为灰树花开发利用及防治胃病难题提供了依据。附图说明下面结合附图和实施例对本专利技术作进一步说明。图1为实施例2中不同溶度GFP作用下GES-1增殖率的变化(X±S,n＝6)，与对照组比较*P＜0.05，**P＜0.01。图2为实施例2中不同溶度GFP作用下GES-1细胞形态及数量变化(100×)，A：对照组24h；B：0.4mg/mLGPF作用24h；C：0.08mg/mLGPF作用24h；D：对照组48h；E：0.4mg/mLGPF作用48h；F：0.08mg/mLGPF作用48h；G：对照组72h；H：0.4mg/mLGPF作用72h；I：0.08mg/mLGPF作用72h；J：对照组96h；K：0.4mg/mLGPF作用96h；L：0.08mg/mLGPF作用96h。图3为实施例3中不同溶度GFP作用下GES-1的愈合率变化(X±S,n＝6)，与对照组比较*P<0.05，**P<0.01。图4为实施例3中GPF作用下的胃粘膜创伤修复情况(100×)。A：对照组0h；B：2mg/本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种灰树花多糖的提取工艺，其特征在于：取灰树花子实体干品，粉碎后过10目筛，加入8～12倍量水微沸提取1～3h，过滤，滤液浓缩至Brix≥15％，离心，上清液先后泵入三个截留分子量依次减小的超滤分离组件，分别收集每个超滤分离组件的截留液和滤出液，得到分子量>100kDa的第一截留液、30kDa<分子量<100kDa的第二截留液、5kDa<分子量<30kDa的第三截留液和分子量<5kDa的滤出液；上述第一截留液、第二截留液、第三截留液和滤出液分别按照1:2～4的体积比分别加入95％的乙醇醇沉2～5h，过滤，分别制得第一提取物，为分子量>100kDa、多糖含量33～37％的灰树花多糖，第二提取物，为30kDa<分子量<100kDa、多糖含量25～30％的灰树花多糖，第三提取物，为5kDa<分子量<30kDa、多糖含量18～22％的灰树花多糖，第四提取物，为分子量<5kDa、多糖含量6～10％的灰树花多糖。
【技术特征摘要】
1.一种灰树花多糖的提取工艺，其特征在于：取灰树花子实体干品，粉碎后过10目筛，加入8～12倍量水微沸提取1～3h，过滤，滤液浓缩至Brix≥15%，离心，上清液先后泵入三个截留分子量依次减小的超滤分离组件，分别收集每个超滤分离组件的截留液和滤出液，得到分子量>100kDa的第一截留液、30kDa<分子量<100kDa的第二截留液、5kDa<分子量<30kDa的第三截留液和分子量<5kDa的滤出液；上述第一截留液、第二截留液、第三截留液和滤出液分别按照1:2～4的体积比分别加入95%的乙醇醇沉2～5h，过滤，分别制得第一提取物，为分子量>100kDa、多糖含量33～37%的灰树花多糖，第二提取物，为30kDa<分子量<100kDa、多糖含量25～30%的灰树花多糖，第三提取物，为5kDa<分子量<30kDa、多糖含量18～22%的灰树花多糖，第四提取物，为分子量<5kDa、多糖含量6～10%的灰树花多糖。2.根据权利要求1所述的灰树花多糖的提取工艺，其特征在于：超滤膜均经以下步骤清洗后再行超滤：去离子水清洗→NaOH回流清洗→去离子水清洗→HCl清洗→去离子水清洗至超滤膜干净。3.根据权利要求1所述的灰树花多糖的提取工艺，其特征在于：所述超滤步骤中，通过透过液的折光率变化判断超滤进度。4.灰树花多...
【专利技术属性】
技术研发人员：潘裕添，王丽菊，黄家福，洪绯，
申请(专利权)人：漳州片仔癀药业股份有限公司，
类型：发明
国别省市：福建;35
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