一种高效角蛋白酶生产方法技术

本发明专利技术公开了一种高效角蛋白酶生产方法，采用涂布或划线的方法将肠膜明串珠菌接种到斜面培养基上，于18～37℃复壮培养18～36小时，得到复壮菌体；将复壮菌体接种到液体种子培养基中，于18～37℃，100～300rpm条件下培养18～36小时，得到发酵种子；将发酵种子按发酵培养基体积的5～15％接入发酵罐中，罐温18～37℃、罐压0.2～0.8kg/cm2，搅拌速率100～300rpm，通气量为1∶0.3～2.0，发酵培养时间18～60小时，得该高效角蛋白酶；所制备角蛋白广泛用于制革脱毛、水解角蛋白领域。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种角蛋白酶生产方法，特别涉及一种高效的角蛋白酶生产方法。
技术介绍
角蛋白酶(Keratinase)是一种可以特异性降解角蛋白的酶类，由细菌、放线菌和 真菌等多种微生物产生。羽毛作为家禽饲养和屠宰工业的副产物每年产量巨大，且蛋白质 和氨基酸含量丰富，是潜在的优良蛋白质资源。羽毛的合理利用一方面可以减少废弃物对 环境的污染，同时可以作为一种饲科蛋白质应用于畜禽的饲养。在传统利用羽毛过程中主 要采用酸碱水解。热降解等方法，前者存在污染环境问题，后者对能源消耗比较大，且可以 破坏部分氨基酸，降低了产品的营养价值。其他常见的角蛋白为动物的毛发，如牛毛、羊毛 和人发等，这类角蛋白质部分作为商业原料进行加工外，其余多作为废物处理，也造成了环 境的污染和蛋白资源的浪费。角蛋白酶能使角蛋白降解为多肽和氨基酸，既可用于农业肥 料的生产，又可作为畜禽的饲料蛋白源;角蛋白酶是皮肤真菌重要的侵袭因子，其在皮肤病 治疗方面的研究还有待于进一步挖掘。另外，角蛋白酶可"消化"导致疯牛病和人类克雅氏 症的毒蛋白，从而可应用于医疗和实验仪器的净化;它还可用于皮革脱毛鞣制，配制润露、 浴皂、洗发水和脱毛膏等美容品。
技术实现思路
本专利技术提高，选择牛磺酸促进生物代谢，微晶纤维素 使肠膜明串珠菌吸附到斜面培养基上，益智仁增加粘金黄杆菌健胃，补充微生物生长所需 的维生素 B1、维生素 B2、维生素 C、维生素 E及多种氨基酸、脂肪酸，冬瓜粉增加微生物排泄， 便于微生物繁殖，而魔芋粉吸收水分，便于粘金黄杆菌繁殖和生长得到高效角蛋白酶。 -种高效角蛋白酶生产方法，其特征在于包括如下步骤： 1) 采用涂布或划线的方法将肠膜明串珠菌接种到斜面培养基上，于18~37 °C复壮培 养18~36小时，得到复壮菌体； 2) 将复壮菌体接种到液体种子培养基中，于18~37°C，100~300rpm条件下培养18~ 36小时，得到发酵种子； 3) 将发酵种子按发酵培养基体积的5~15%接入发酵罐中，罐温18~37°C、罐压0.2~ 0.8kg/cm2，搅拌速率100~300rpm，通气量为1: 0.3~2.0，发酵培养时间18~60小时， 12000rpm离心15min后，收集沉淀物，水复溶解后，采用浓度35%的硫酸铵处理，盐析沉淀后 得到该角蛋白酶。 所述的每1000ml斜面培养基的成份为:食盐6~14g、酵母粉5~10g、蛋白胨5~15g、琼 脂粉10~19g、牛磺酸5-12g、微晶纤维素卜2g、余量为水;所述的每1000ml种子培养基的成份 为:食盐3~8g、酵母粉5~10g、蛋白胨5~15g、琼脂粉10~19g、益智仁2~3g、冬瓜粉1~2g、魔芋粉 1~3g，余量为水;所述的每1000ml发酵培养基的成份为:牛毛粉角蛋白10~15g、葡萄糖0.1~ 〇. 7g、酵母粉0.1~0.8g、蛋白胨0.1 g、氯化钙0.1 g，其余为水。 本专利技术的优势： (1) 牛磺酸可以促进营养物质代谢，从而提高粘金黄杆菌抗氧化能力，增强机体免疫 力;而且牛磺酸参与神经内分泌调节，增强粘金黄杆菌心肌收缩力； (2) 微晶纤维素使肠膜明串珠菌吸附到斜面培养基上； (3) 益智仁含挥发油、益智仁酮、维生素 B1、维生素 B2、维生素 C、维生素 E及多种氨基酸、 脂肪酸等，益智仁增加肠膜明串珠菌健胃； (4) 冬瓜粉增加微生物排泄，便于微生物繁殖； (5) 魔芋粉吸收水分，便于肠膜明串珠菌繁殖和生长； (6) 本专利技术所述的肠膜明串珠菌购买于上海铭睿生物科技有限公司； (7) 十二烷基磺酸钠增加微晶纤维素的分散，提高粘金黄杆菌的繁殖效率，苯甲酸钠和 膨润土增加十二烷基磺酸钠的分散； (8) 本专利技术所用的原料各个厂家均可实用，只要主要成分相似或相同均可。【具体实施方式】 下面通过举例介绍实施方式 实施例一 1) 采用涂布或划线的方法将肠膜明串珠菌接种到斜面培养基上，于18°c复壮培养18小 时，得到复壮菌体;所述的每l〇〇〇ml斜面培养基的成份为:食盐6g、酵母粉5g、蛋白胨5g、琼 脂粉l〇g、牛磺酸5g、微晶纤维素 lg、水为975g; 2) 将复壮菌体接种到液体种子培养基中，于18°C，100rpm条件下培养18小时，得到发 酵种子;所述的每l〇〇〇ml种子培养基的成份为:食盐3g、酵母粉5g、蛋白胨5g、琼脂粉10g、益 智仁2g、冬瓜粉lg、魔芋粉lg，水为981g; 3) 将发酵种子按发酵培养基体积的5%接入发酵罐中，罐温18°C、罐压0.2kg/cm2,搅 拌速率l〇〇 rpm，通气量为1:0.3，发酵培养时间18小时，12000rpm离心15min后，收集沉淀 物，水复溶解后，采用浓度35%的硫酸铵处理，盐析沉淀后得到该角蛋白酶；所述的每 1000ml发酵培养基的成份为:牛毛粉角蛋白10g、葡萄糖0. lg、酵母粉0. lg、蛋白胨0. lg、氯 化钙〇.lg，水为995g。 实施例二 1) 采用涂布或划线的方法将肠膜明串珠菌接种到斜面培养基上，于37 °C复壮培养36 小时，得到复壮菌体；所述的每l〇〇〇ml斜面培养基的成份为:食盐14g、酵母粉10g、蛋白胨 15g、琼脂粉19g、牛磺酸12g、十二烷基磺酸钠2g、苯甲酸钠 lg、微晶纤维素2g、膨润土 0.5g、 水950g; 2) 将复壮菌体接种到液体种子培养基中，于37°C，300rpm条件下培养36小时，得到发 酵种子;所述的每l〇〇〇ml种子培养基的成份为:食盐8g、酵母粉10g、蛋白胨15g、琼脂粉19g、 益智仁3g、冬瓜粉2g、魔芋粉3g，水为956g; 3) 将发酵种子按发酵培养基体积的15 %接入发酵罐中，罐温37°C、罐压0.8kg/cm2，搅 拌速率300rpm，通气量为1:2.0，发酵培养时间60小时，得到该角蛋白酶;所述的每1000ml发 酵培养基的成份为:牛毛粉角蛋白15g、葡萄糖0.7g、酵母粉0.8g、蛋白胨0.1 g、氯化f丐0.1 g， 水为992g。 实施例三 1) 采用涂布或划线的方法将肠膜明串珠菌接种到斜面培养基上，于28 °C复壮培养27 小时，得到复壮菌体;所述的每l〇〇〇ml斜面培养基的成份为:食盐10g、酵母粉7.5g、蛋白胨 1 〇g、琼脂粉15g、牛磺酸9g、微晶纤维素 1.5g、水为962g; 2) 将复壮菌体接种到液体种子培养基中，于28°C，200rpm条件下培养27小时，得到发 酵种子;所述的每l〇〇〇ml种子培养基的成份为:食盐5.5g、酵母粉7.5g、蛋白胨10g、琼脂粉 14.58、益智仁2.58、冬瓜粉1.58、魔芋粉28，余量为水968 8; 3) 将发酵种子按发酵培养基体积的10 %接入发酵罐中，罐温28 °C、罐压0.5kg/cm2，搅 拌速率200rpm，通气量为1:1.2，发酵培养时间39小时，12000rpm离心15min后，收集沉淀物， 水复溶解后，采用浓度35%的硫酸铵处理，盐析沉淀后得到该角蛋白酶;所述的每1000ml发 酵培养基的成份为：牛毛粉角蛋白12.5g、葡萄糖0.4g、酵母粉0.45g、蛋白胨O.lg、氯化钙 〇· lg，水为991g。 将该角蛋白酶按照专利20141014本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种高效角蛋白酶生产方法，其特征在于包括如下步骤：采用涂布或划线的方法将肠膜明串珠菌接种到斜面培养基上，于18～37 ℃复壮培养18～36小时，得到复壮菌体；2)将复壮菌体接种到液体种子培养基中，于18～37℃，100～300rpm条件 下培养18～36小时，得到发酵种子；3)将发酵种子按发酵培养基体积的5～15％接入发酵罐中，罐温18～37℃、 罐压0.2～0.8kg/cm2，搅拌速率100～300rpm，通气量为1∶0.3～2.0，发酵培养 时间18～60小时，得到该角蛋白酶。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：谢海涛，董景峰，谢来宾，陈佩，王鹏亭，柴行，周秋云，
申请(专利权)人：深圳市先康达生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44