Mrap2敲除制造技术

如本文所述，Mrap2对动物的体重增加进行负调控。因此，本文提供了与抑制Mrap2以提高细胞和/或动物的生长速率相关的细胞、动物(例如包含Mrap2修饰的动物)和方法，从而改进动物产品的生产。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】【专利说明】 相关申请的交叉引用 根据35U.S.C§119(e)，本申请要求2013年7月10日提交的美国临时申请号61/844， 666的权益，以引用的方式将其内容整体并入本文。 政府支持 本专利技术是在由国立卫生研究院授予的基金号NIHP30-HD18655和T32DK07699的联 邦基金的支持下完成。美国政府对本专利技术享有一定的权利。 序列表 本申请包含序列表，所述序列表已经以ASCII格式电子提交，并在此以引用的方式 将其整体并入。所述ASCII副本创建于2014年6月27日，命名为068570-078611-PCT_SL.txt， 大小为25,182字节。
本文所述的技术涉及敲除和转基因动物。
技术介绍
当为了例如食用或育种的目的饲养动物时，相关成本的显著贡献因素是使动物成 熟至所需大小和/或体重所花费的时间。动物越快达到所需的大小和/或体重，饲养动物的 相关成本就越低，并且生产功能性动物(functional animal)消耗的资源越少。畜牧业通常 通过以鼓励快速生长的方式控制饲料、环境和兽医护理，以寻求将这一时间最小化。此外， 动物饲料是使动物得以出售的主要成本，因此，力求提高的"饲料效率(动物生长的重量/所 消耗的食物重量)"，以降低家畜的成本。
技术实现思路
如本文所述，本专利技术人发现，与野生型动物相比，通过抑制动物中的Mrap2的水平 和/或活性，动物以非常快的速率增重。事实上，动物能够比野生型动物更快多达50%到达 成熟成体大小。进而，当限制至较少的饮食时，缺少Mrap2活性的动物能够与野生型动物生 长的同样快。因此，本文描述的是具有Mrap2修饰的细胞、包含这些细胞的动物、以及利用此 类动物以提供动物产品的更高效生产的方法。 -方面，本文描述的为包含Mrap2基因修饰的非人哺乳动物细胞，其中，该细胞不 表达可检测水平的功能性Mrap2。在一些实施方式中，该修饰包括Mrap2编码序列的缺失。在 一些实施方式中，该修饰包括Mrap2基因外显子3的缺失。在一些实施方式中，该修饰包括 Mrap2跨膜结构域的缺失。在一些实施方式中，该修饰包括Mrap2胞内结构域的缺失。在一些 实施方式中，该修饰包括SEQ ID NO: 1的至少一个氨基酸的突变(或编码此氨基酸的至少一 个核苷酸的突变，例如点突变、SNP等）。在一些实施方式中，对于修饰而言，细胞为杂合子。在一些实施方式中，对于修饰 而言，细胞为纯合子。在一些实施方式中，非人哺乳动物细胞属于选自于由猪、奶牛(cow)、 绵羊、兔和山羊所组成的组中的物种。 在一些实施方式中，修饰通过CRISPR、TALEN或ZFN核酸酶的作用产生。在一些实施 方式中，修饰通过重组酶的作用产生。在一些实施方式中，重组酶为ere重组酶。在一些实施 方式中，重组酶处于组织特异性启动子的控制下。在一些实施方式中，启动子对神经元或脑 组织而言是特异性的。在一些实施方式中，启动子为Siml启动子。 在一些实施方式中，修饰为工程化修饰，例如非天然存在的修饰。本文中使用的 "工程化的"是指人为操作的方面。例如，当通过人为操作将天然状态下未以该顺序连接在 一起的两个以上的序列直接彼此连接为工程化的多核苷酸时，可认为该多核苷酸是"工程 化的"。通过进一步的实例，当改变多核苷酸序列(例如通过缺失）以使该序列与天然发现的 不同时，可认为该多核苷酸为"工程化的"。如本领域技术人员所理解和惯常实践的，即使对 在先的本体(prior entity)进行实际操作，通常仍将工程化的多核苷酸的子代和拷贝称为 "工程化的"。 -方面，本文描述的为包含本文所述细胞的非人哺乳动物。一方面，本文描述的为 由本文所述细胞组成的非人哺乳动物。 一方面，本文描述的为敲除的非人哺乳动物，所述哺乳动物包含Mrap2基因修饰， 其中，所述哺乳动物不表达可检测水平的功能性Mrap 2。 在一些实施方式中，修饰包括Mrap2编码序列的缺失。在一些实施方式中，修饰包 括Mrap2基因外显子3的缺失。在一些实施方式中，修饰包括Mrap2跨膜结构域的缺失。在一 些实施方式中，修饰包含Mrap2胞内结构域的缺失。在一些实施方式中，修饰包括SEQ ID NO: 1的至少一个氨基酸的突变(或编码此氨基酸的至少一个核苷酸的突变，例如点突变、 SNP等）。在一些实施方式中，对于修饰而言，哺乳动物为杂合子。在一些实施方式中，对于修 饰而言，哺乳动物为纯合子。在一些实施方式中，非人哺乳动物为选自于由猪、奶牛、野牛 (bison)、马、绵羊、兔和山羊所组成的组中的物种。 在一些实施方式中，修饰通过CRISPR、TALEN或ZFN核酸酶的作用产生。在一些实施 方式中，修饰通过重组酶的作用产生。在一些实施方式中，重组酶为ere重组酶。在一些实施 方式中，重组酶处于组织特异性启动子的控制下。在一些实施方式中，启动子对神经元或脑 组织而言是特异性的。在一些实施方式中，启动子为Siml启动子。 -方面，本文描述的为生产用于屠体(carcass)用途的哺乳动物的方法，所述方法 包括：向本文所述的哺乳动物提供适于物种的食物，以及当所述哺乳动物达到供使用的期 望大小时，将所述哺乳动物屠宰。在一些实施方式中，对哺乳动物进行的屠宰比起野生型的 哺乳动物更早多达80%。在一些实施方式中，对哺乳动物进行的屠宰比起野生型的哺乳动 物更早多达50%。在一些实施方式中，向哺乳动物提供实质上自由取食的饲料。在一些实施 方式中，哺乳动物为猪。用于本文所述方法的哺乳动物的其它非限制性实例包括奶牛、马、 绵羊、山羊、兔和野牛等。 在一些实施方式中，对约75天龄至约125天龄的哺乳动物进行屠宰。在其它实施方 式中，对4月龄至8月龄(例如4个月、5个月、6个月、7个月、8个月或其间的任何时间）的哺乳 动物进行屠宰。在一些实施方式中，向哺乳动物提供限制水平的食物。在一些实施方式中， 食物的限制水平为提供至野生型的哺乳动物的水平的约60%至约95%。在一些实施方式 中，食物的限制水平为提供至野生型的哺乳动物的水平的约80%至约95%。在一些实施方 式中，哺乳动物为猪。在替代的实施方式中，哺乳动物为奶牛、马、绵羊、兔、山羊和野牛等。【附图说明】 图IA-图IB描绘了 Mrap2+小鼠的表型。图IA描绘了标准饲料(饲料，上侧面板:雄 性n = 9vs. 28vs. 15，雌性n= 12vs. 18vs. 10)或高脂饮食时(HFD，56天龄-95天龄，下侧面板， 与标准饲料曲线叠加：雄性n = IOvs. 8vs.10,雌性η = 7 vs . 12vs . 7)的Mrap+/+vs .Mrap+A vs.Mrap2+小鼠的体重曲线。对于两种性别而言，标准饲料和高脂饮食时的较大年龄（161 天-175天）与较小年龄（56天-95天）的Mrap +/+和Mrap+/-小鼠的体重曲线均显著不同。*p = 0.02，= 0.001，= 0.0003。图IB描绘了标准饲料饮食时的脂肪蓄积的图。上侧面板： Mrap+Avs.Mrap2-Λ中的白色脂肪组织(WAT)的重量(雄性和雌性，117天龄-122天龄，η分别 为5和4)。左下侧面板:MrapV+vs.Mrap〗+小鼠中的本文档来自技高网...

【技术保护点】
包含Mrap2基因修饰的非人哺乳动物细胞，其中，所述细胞不表达可检测水平的功能性Mrap2。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：约瑟夫·A·玛吉朱布，浅井真人，
申请(专利权)人：约瑟夫·A·玛吉朱布，浅井真人，
类型：发明
国别省市：美国;US