【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种利用方波电击使得外源DNA整合进入莱茵衣藻染色体DNA的方法，特别是一种利用方波电击使得抗性DNA随机插入莱茵衣藻染色体DNA，构建随机插入的莱茵衣藻突变体文库的方法。
技术介绍
莱茵衣藻(Chlamydomonas reinhardtii)是一种真核单细胞绿藻，因其生长快、易培养，基因组小而且已被注释，生物技术手段相对成熟，细胞内生理过程的分子机制与高等动植物高度相似，因此是目前植物与动物共同的模式生物之一。采用正向遗传学插入突变手段研究表型与基因的关联性，并进一步揭示该基因的生物学功能，是目前较为直接与有效的研究手段。然而该手段的关键在于获得大量可以稳定遗传的DNA片段随机插入的突变体文库，一方面要求单克隆转化子的突变尽可能是单一插入引起，另外一方面要求DNA片段的转化尽可能获得较多的转化子，二者是相互矛盾体，前者要求在做随机插入突变的时候尽可能降低DNA的量，而提高转化子数目除了提高转化效率因素之外，增加DNA的量也可以提高转化子的数目，从而获得数目可观的突变体文库。因此，从提高DNA转化效率入手是目前构建莱茵衣藻突变体文库，或者...
【技术保护点】
一种利用方波电击进行莱茵衣藻高效建库的方法，其特征在于，莱茵衣藻在TAP液体培养基，23±0.5°C，连续光照，8000Lx光强下进行通气培养，经过转接后培养、处理，将抗性DNA片段经过方波电击转化，抗性DNA随机整合进入莱茵衣藻染色体中，经过过夜弱光恢复，涂布于抗性筛选平板，经过7天光周期培养，获得引起随机插入突变的突变体文库。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：王亮，范志月，杨丽婧，杨丰源，陆军，郑元林，
申请(专利权)人：江苏师范大学，
类型：发明
国别省市：江苏;32
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