一种莱茵衣藻外源基因表达系统及其构建生产PHB转基因藻的方法技术方案

本发明专利技术公开了一种莱茵衣藻外源基因表达系统及其构建生产ＰＨＢ的转基因藻的方法，由启动子、外源目的基因、筛选标记和莱茵衣藻受体藻株组成。利用该系统构建生产ＰＨＢ的转基因的方法：Ａ．受体藻株的选择与培养；Ｂ．ＰＨＢ生物合成关键酶基因的克隆；Ｃ．ＰＨＢ生物合成关键酶莱茵衣藻表达载体，Ｄ．通过珠磨法、基因枪法或电激法，从真养产碱杆菌分离出的ＰＨＢ生物合成关键酶基因导入莱茵衣藻中，经过筛选和分子检测获得生产ＰＨＢ的二价或转基因衣藻。利用光合作用产生的乙酰辅酶Ａ为底物，在ｐｈｂＡ、ｐｈｂＢ和ｐｈｂＣ基因编码的ＰＨＢ合成关键酶的共同作用下，合成聚β－羟基丁酸。方法易操作、成本低廉、产物易分离、安全，解决了白色污染的问题。

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
一种莱茵衣藻外源基因表达系统，它包括强启动子、外源目的基因、终止子、筛选标记和莱茵衣藻受体藻株，首先是转基因受体藻的筛选与培养，选择莱茵衣藻作为受体藻，采用Ｔｒｉｓ－ａｃｅｔａｔｅ－ｐｈｏｓｐｈａｔｅ培养基，在光照～９０μＥ／ｍ↑［２］．ｓ的条件下，通气培养至对数生长后期，藻细胞浓度达到１０↑［８］－１０↑［９］ｃｅｌｌｓ／ｍＬ时，离心收集；其次是含有筛选标记基因表达盒的外源基因表达载体构建：　　　　Ａ、外源基因莱茵衣藻细胞核表达载体的构建，该载体含有ＲＢＣＳ２启动子或Ｈｓｐ７０Ａ－ＲＢＣＳ２合成启动子、ＲＢＣＳ２终止子和ｂｌｅ基因筛选标记表达盒，通过基因枪法、珠磨法或电激法将外源基因导入莱茵...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：胡章立，王潮岗，宋艳茹，
申请(专利权)人：深圳大学，
类型：发明
国别省市：94[中国|深圳]