细胞核插入诱变选育高产光合制氢莱茵衣藻的方法技术

本发明专利技术涉及生物制氢技术，细胞核插入诱变选育高产光合制氢莱茵衣藻的方法。现有的莱茵衣藻产氢率低，限制了生物光合制氢技术的应用和发展。本发明专利技术对莱茵衣藻细胞核进行随机插入诱变而获得高产氢突变株方法如下：莱茵衣藻培养；莱茵衣藻细胞核转化载体和玻璃珠的准备；莱茵衣藻细胞核转化和转化子筛选；分析莱茵衣藻转化子产氢培养的产氢量和耗氧量；分析莱茵衣藻突变株中ｂｌｅ基因的整合及其表达；分析重组豆血红蛋白ｈｅｍＨ－１ｂａ基因对莱茵衣藻生长的影响。本发明专利技术的优点是方法是：获得的高产氢莱茵衣藻生物制氢产量是原有的７倍；为深入研究莱茵衣藻产氢代谢机理提供了良好的实验材料和良好的基础条件。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及生物制氢技术，具体地说是细胞核插入诱变选育高产光合制氢莱茵衣 藻的方法。
技术介绍
生物光合制氢是未来清洁能源可持续生产的重要途径之一，包括莱茵衣藻 (Chlamydomonas reinhardtii)在内的许多微型绿藻和蓝藻可以在缺氧的条件下诱导细胞 核内的氢酶(H2ase)基因表达，氢酶被运到叶绿体中，将光合作用中产生的H+和e_合成H2， 释放到细胞外，是利用太阳能持续生产氢气的理想模式。莱茵衣藻生长速度快，培养成本 低，氢酶活性高，是很有开发潜力的微藻光合制氢藻种。氢酶对氧气敏感而导致莱茵衣藻产 氢率低，是限制这一技术产业化的重要原因。现有技术已经对莱茵衣藻产氢代谢的过程和 培养条件有了比较深入的研究，但是莱茵衣藻的产氢代谢过程与光合电子传递、非光合电 子传递、淀粉代谢、呼吸代谢、发酵代谢和光合作用等多个代谢过程关系密切，其产氢量很 大程度上受这些代谢的影响，所以一直无法解决莱茵衣藻产氢率低的技术难题。现有的莱茵衣藻产氢率低，限制了生物光合制氢技术的应用和发展。为了减轻环境污染、促进人类社会长久持续发展、开发新的清洁能源，专利技术一种生 物制氢产量高的莱茵衣本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种细胞核插入诱变选育高产光合制氢莱茵衣藻的方法，步骤如下：　（１）莱茵衣藻培养：　　Ａ、选取细胞壁缺欠型莱茵衣藻藻种ｃｃ８４９；　　Ｂ、培养莱茵衣藻藻种：　　（ａ）莱茵衣藻培养条件：温度２５±１℃；日光灯光照强度１００～２００微摩尔光量子／平方米.秒；５０～１００ｍｌ三羟甲基氨基甲烷－乙酸－磷酸盐ＴＡＰ培养基液体培养，初始ｐＨ７．２，水平摇床转速１００～１３０ｒｐｍ，每５～６天１％接种继代培养；　　（ｂ）固体平板ＴＡＰ培养基：琼脂粉１．５％；挑取平板上的莱茵衣藻单克隆通过划０００ｒｐｍ离心５ｍｉｎ收集藻细胞，用０．５ｍｌ新鲜ＴＡＰ液体培养基重悬，涂在含腐草霉素和琼脂的ＴＡＰ培养基固体平板上，...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：吴双秀，王荣荣，许丽丽，黄瑞，王全喜，
申请(专利权)人：上海师范大学，
类型：发明
国别省市：31[中国|上海]