本发明专利技术公开了利用氧化石墨烯-罗丹明-尿酸酶混合溶液检测尿酸的方法，该方法以氧化石墨烯-罗丹明-尿酸酶混合溶液为基液，利用荧光猝灭原理检测法检测尿酸含量，其中氧化石墨烯、罗丹明、尿酸酶的质量比为20:1:1.5。本发明专利技术检测灵敏度高，大幅提高了检测的可靠度。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及化学物质定量检测领域，具体涉及测量尿酸含量的方法，特别涉及利用氧化石墨烯-罗丹明-尿酸酶混合溶液检测尿酸的方法及该检测体系。
技术介绍
目前已报道的尿酸检测方法主要分成两大类，即色谱分析方法和化学分析方法。色谱法选择性高，可靠性好，但不适合常规检测，尤其不适合定期随时检测。化学分析方法又分两种，一是利用尿酸的还原性反应进行检测，其选择性低而很少使用；另一种是利用尿酸酶高专一性反应进行检测，其选择性显著优于利用尿酸还原反应的方法，尿酸在尿酸酶作用下生成尿囊素、H202和C02。酶法分因此分为直接法和间接法，直接法是直接跟踪尿酸酶作用下尿酸紫外吸收下降的测定方法，间接法是测定尿酸氧化产物h202的含量。然而，普通尿酸检测方法存在灵敏度较低，测量过程复杂的缺陷，有必要进行改性。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术提供了利用氧化石墨烯-罗丹明-尿酸酶混合溶液检测尿酸的方法及该检测体系。利用氧化石墨烯-罗丹明-尿酸酶混合溶液检测尿酸的方法。优选的，以氧化石墨烯-罗丹明-尿酸酶混合溶液为基液，利用荧光猝灭原理检测法检测尿酸含量。优选的，氧化石墨烯、罗丹明、尿酸酶的质量比为18?22:0.9?1.1:1.4?1.6。优选的，将待测试样加入氧化石墨烯-罗丹明-尿酸酶混合溶液并放置10分钟以上，然后利用荧光猝灭原理检测法检测尿酸含量。优选的，激发波长为480-500nmo本专利技术还提供尿酸检测体系，该体系为含有氧化石墨烯、罗丹明和尿酸酶的混合溶液。进一步，所述混合溶液中氧化石墨稀、罗丹明、尿酸酶的质量比为18?22:0.9?1.1:1.4 ?1.6。特别的，所述混合溶液中氧化石墨烯、罗丹明、尿酸酶的浓度分别为18_22mg/L、0.9-1.lmg/L、1.4-1.6mg/L0本专利技术的有益效果在于:本专利技术检测灵敏度高，大幅提高了检测的可靠度，另外本专利技术检测体系较为便宜，有助于降低检测成本。氧化石墨烯对罗丹明123有荧光猝灭作用，在一定范围内，氧化石墨烯浓度增加，罗丹明123的荧光猝灭强度线性下降，但随着氧化石墨烯浓度增加，猝灭强度趋于不变。分别测定T = 283、298、310K下，测定Stern-Volmer曲线。每个温度下Stern-Volmer曲线是一条直线，说明氧化石墨稀与罗丹明123形成复合物，其粹灭机制属于静态猝灭，即氧化石墨烯与罗丹明123形成新的复合物而导致罗丹明123的荧光猝灭。【附图说明】为了使本专利技术的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将结合附图对本专利技术作进一步的详细描述，其中:图1为实施例1不同浓度尿酸500?600nm波长下的焚光强度；图2为实施例1不同浓度尿酸最大发射的荧光强度；图3为实施例2光吸收随时间变化图；图4为实施例3最大发射峰荧光强度强度随时间变化图。【具体实施方式】以下将参照附图，对本专利技术的优选实施例进行详细的描述。实施例1:本实施例的尿酸检测体系含为含有氧化石墨烯、罗丹明123和尿酸酶的混合溶液，其中氧化石墨烯终浓度为20mg/L，罗丹明123终浓度为3nM，尿酸酶终浓度为1.5mg/L。本实施例检测尿酸的方法，首先将尿酸加入混合溶液中(尿酸的中浓度分别为0.07mM，0.10mM, 0.15mM，0.20mM, 0.24mM)，然后在 500nm 激发，扫描 500 ?600nm 波长下的体系的焚光强度。结果如图1所不，由图1可见，最大发射峰为520nm。以尿酸浓度为横轴，最大发射峰520nm波长下的荧光强度为纵轴得图2，由图2可知，随着体系中尿酸浓度增加，体系的荧光强度线性降低。实施例2:本实施例的尿酸检测体系中氧化石墨烯终浓度为20mg/L，罗丹明123终浓度为3nM，尿酸酶终浓度为1.5mg/L0检测时，首先向检测体系加入尿酸(终浓度为1.5mg/L)，然后在293nm激发，每间隔2.0min测定一次光吸收变化得图3，由图3可知2?12min内的吸光度与时间为线性相关。据此据算酶活性(每分钟消耗11111/^]\1尿酸的酶量为1单位)为0.21单位，在15min后，尿酸基本被尿酸酶氧化，因此在荧光体系中加入尿酸后，放置15min后检测。采用初速度法测定酶活性，在25°C用0.075mmol/L尿酸在pH 9.2硼酸盐缓沖液中在全自动酶标仪上测定293nm光吸收变化的初速度表示尿酸酶活性，按其摩尔消光系数11.5 (mmol/L) 1.cm 1校正尿酸储备液的浓度尿酸溶液每天配制，使用前在(25±0.5)°C下预热20min。尿酸酶反应体系共150 μ L，含尿酸溶液50 μ L，加入用50.0mmol/L的硼酸缓冲液(pH 9.2)稀释的裂解液100 μ L启动反应，间隔2.0或5.0min测定293nm光吸收变化，每份样品测定3次。用各突变体酶活性与其总蛋白浓度之比表示比活性。每分钟消耗1微摩尔尿酸的酶量为1单位。实施例3本实施例的尿酸检测体系中氧化石墨烯终浓度为20mg/L，罗丹明123终浓度为3nM，尿酸酶终浓度为1.5mg/L0检测时，首先向检测体系加入尿酸(终浓度为1.5mg/L)，然后在500nm激发，扫描500?600nm波长下的体系的焚光强度，以体系在520nm的焚光强度为纵轴，反应时间为横轴得图4，由图4可知，结果表明随着时间增加，该波长下的荧光强度逐渐增强，但在15min后，该波长下的荧光强度变化较小。因此，在氧化石墨烯-罗丹明-尿酸酶检测体系中，加入尿酸，放置15min后检测。由此可见，本专利技术检测灵敏度高，大幅提高了检测的可靠度。最后说明的是，以上实施例仅用以说明本专利技术的技术方案而非限制，尽管通过参照本专利技术的优选实施例已经对本专利技术进行了描述，但本领域的普通技术人员应当理解，可以在形式上和细节上对其作出各种各样的改变，而不偏离所附权利要求书所限定的本专利技术的精神和范围。【主权项】1.利用氧化石墨烯-罗丹明-尿酸酶混合溶液检测尿酸的方法。2.根据权利要求1所述利用氧化石墨烯-罗丹明-尿酸酶混合溶液检测尿酸的方法，其特征在于:以氧化石墨烯-罗丹明-尿酸酶混合溶液为基液，利用荧光猝灭原理检测法检测尿酸含量。3.根据权利要求1所述利用氧化石墨烯-罗丹明-尿酸酶混合溶液检测尿酸的方法，其特征在于:氧化石墨稀、罗丹明、尿酸酶的质量比为18?22:0.9?1.1:1.4?1.6。4.根据权利要求3所述利用氧化石墨烯-罗丹明-尿酸酶混合溶液检测尿酸的方法，其特征在于:将待测试样加入氧化石墨烯-罗丹明-尿酸酶混合溶液并放置10分钟以上，然后利用荧光猝灭原理检测法检测尿酸含量。5.根据权利要求4所述利用氧化石墨烯-罗丹明-尿酸酶混合溶液检测尿酸的方法，其特征在于:激发波长为480-500nm。6.氧化石墨烯-罗丹明-尿酸酶尿酸检测体系。7.根据权利要求6所述氧化石墨烯-罗丹明-尿酸酶尿酸检测体系，其特征在于:氧化石墨烯、罗丹明、尿酸酶的质量比为18?22:0.9?1.1:1.4?1.6。8.根据权利要求6所述氧化石墨烯-罗丹明-尿酸酶尿酸检测体系，其特征在于:所述混合溶液中氧化石墨稀、罗丹明、尿酸酶的浓度分别为18-22mg/L、0.9-1.lmg/L、1.4-1.6mg/L。【专利摘要】本专利技术公开了利用氧化石墨烯-罗丹明-尿酸酶混合溶液检测尿酸的本文档来自技高网...
【技术保护点】
利用氧化石墨烯‑罗丹明‑尿酸酶混合溶液检测尿酸的方法。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：廖娟，刘北忠，
申请(专利权)人：重庆医科大学附属永川医院，
类型：发明
国别省市：重庆;85
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