ZNF460在急性髓系白血病中的应用制造技术

本发明专利技术属于生物医学研究技术领域，具体涉及ZNF460在急性髓系白血病治疗方面的应用以及ZNF460基因抑制剂在制备抗白血病药物中的应用。本发明专利技术的目的在于提供一种治疗急性髓系白血病的策略及方法。本发明专利技术首次检测了白血病细胞中ZNF460的表达水平，发现ZNF460的高表达有促进白血病细胞增殖，抑制细胞凋亡和促进细胞周期的作用。制备ZNF460小分子抑制剂shRNA从而治疗白血病，抑制NF

【技术实现步骤摘要】
ZNF460在急性髓系白血病中的应用


[0001]本专利技术属于生物医药
，ZNF460基因在急性髓系白血病治疗中的应用。

技术介绍

[0002]急性骨髓性白血病(AML)是一种造血系统原始细胞的克隆性侵袭性增殖疾病，以无限增殖、分化受阻和凋亡为特征。AML是成人中最常被诊断的急性白血病形式。尽管近年来化疗和其他药物取得了重大进展，在一定程度上改善了治疗情况，但由于高复发率和耐药性，AML的治疗效果不佳，5年生存率为28.3％。此外，患者负担重，治疗副作用大也是严重的问题。目前对AML发病的分子机制研究不彻底，仍缺乏治疗AML的有效靶点。因此，必须阐明AML发病的分子机制，以改善现有的治疗策略或确定新的治疗目标。
[0003]锌指蛋白(ZNF)是最大的转录因子家族，其锌指结构域在调控、细胞分化和胚胎发育中发挥着重要作用。最近几年，越来越多的报告表明，锌指蛋白可以在癌症中作为一种致癌基因发挥作用。据之前的生信分析结果表明，ZNF460在AML中处于高表达水平，在以前的研究中，该基因的过度表达与结肠癌的不良后果和增强侵袭能力有关，在胰腺癌也发挥了恶性作用。然而目前为止，关于ZNF460基因在急性髓系白血病中的作用和分子机制还未见报道。

技术实现思路

[0004]本专利技术意在提供ZNF460在制备诊断急性髓系白血病的系统中的应用，以解决现有技术中的纳米药物呈递系统难以有效避免巨噬细胞的吞噬作用和清除作用的技术问题。
[0005]为达到上述目的，本专利技术采用如下技术方案：
[0006]ZNF460在制备诊断急性髓系白血病的系统中的应用。
[0007]本方案还提供了ZNF460在制备治疗急性髓系白血病的药物中的应用。
[0008]本方案还提供了ZNF460在筛选治疗急性髓系白血病的药物中的应用。
[0009]本技术方案的原理以及优点在于：
[0010]专利技术人进行了大量实验性验证探究了ZNF460在急性髓系白血病中作用和机制，具体如下：
[0011](1)检测ZNF460在急性髓系白血病中的表达情况：首先利用TCGA和GTEx数据库中的数据分析ZNF460的基因表达水平。其次，利用实时荧光定量PCR(quantitative real time PCR，qRT
‑
PCR)，蛋白质印迹法(Western blotting)分析ZNF460在正常人单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells)和急性髓系白血病细胞系中基因和蛋白水平的表达差异。
[0012](2)ZNF460对白血病细胞增殖的影响：在高表达ZNF460的白血病细胞系中，使用慢病毒shRNA构建敲低ZNF460的稳定表达株。通过qRT
‑
PCR和Western blotting验证敲低效率，选择最优序列进行后续实验。在敲低ZNF460的白血病细胞中利用活细胞计数试剂盒(Cell Counting Kit
‑
8，CCK
‑
8)检测细胞的增殖能力。
[0013](3)ZNF460对细胞凋亡和细胞周期的影响：利用Western Blotting和流式细胞术(Flow cytometry，FCM)检测敲低ZNF460的白血病的凋亡情况和周期分布。
[0014](4)ZNF460对NF
‑
κB通路的影响：利用Western Blotting检测敲低ZNF460的白血病细胞NF
‑
κB通路相关蛋白的表达情况。
[0015]相对于现有技术，本技术方案提供了以ZNF460作为急性髓系白血病诊断标志物的诊断方案，以ZNF460作为靶点制备特异的抑制剂来治疗急性髓系白血病的治疗方式，以及以ZNF460作为药物作用靶点来筛选治疗急性髓系白血病的药物的技术方案。
[0016]进一步，ZNF460基因的表达水平用于表征急性髓系白血病细胞的增殖能力、表征急性髓系白血病细胞凋亡的受抑制程度、以及表征急性髓系白血病细胞的细胞周期受促进程度。
[0017]进一步，所述系统包括序列如SEQ ID NO.1所示的正向引物和序列如SEQ ID NO.2所示的反向引物。
[0018]进一步，所述药物用于抑制ZNF460基因的转录水平、或者抑制ZNF460蛋白的表达水平、或者抑制ZNF460蛋白的活性。
[0019]进一步，所述药物为ZNF460基因抑制剂；所述ZNF460基因抑制剂以ZNF460基因为靶标制备，且对ZNF460基因的转录水平具有抑制作用。
[0020]进一步，所述ZNF460基因抑制剂为核酸分子；所述核酸分子包括双链RNA、短发夹RNA、反义寡核苷酸和小干扰RNA。双链RNA(dsRNA)、短发夹RNA(shRNA)、反义寡核苷酸(ASO)、小干扰RNA(siRNA)都可以对基因的转录水平起到调控作用。
[0021]进一步，所述ZNF460基因抑制剂为短发夹RNA；所述短发夹RNA的序列如SEQ ID NO.5所示或者如SEQ ID NO.6所示。
[0022]进一步，治疗急性髓系白血病的药物为NF
‑
κB信号通路调控物质。
[0023]综上所述，本技术方案的有益效果在于：
[0024]本专利技术首次检测了急性髓系白血病细胞中ZNF460的表达水平，发现高表达的ZNF460有促进急性髓系白血病细胞增殖的作用，基于上述发现，可以将ZNF460作为急性髓系白血病的潜在诊断指标。
[0025]本专利技术首次报道了敲低ZNF460能够通过使急性髓系白血病细胞周期阻滞于G2/M期和促进细胞凋亡能力来抑制急性髓系白血病细胞的体外增殖。上述发现表明，ZNF460可以作为急性髓系白血病治疗的潜在靶点，可将ZNF460应用于新型抗急性髓系白血病的药物的筛选和测试中，为开发出新型治疗急性髓系白血病的药物创造了条件。
附图说明
[0026]图1为实施例1的实验结果(A：在TCGA数据库AML患者和GTEx、TCGA数据库中正常人样本键ZNF460的表达差异；B：在急性髓系白血病细胞系和正常人外周血单个核细胞中ZNF460基因的表达情况；C：在急性髓系白血病细胞系和正常人外周血单个核细胞中ZNF460蛋白的表达情况)。
[0027]图2为实施例2的实验结果(A为利用qRT
‑
PCR检测KG1a和U937细胞系的ZNF460在RNA水平的敲低效率；B为利用Western blotting检测KG1a和U937细胞系的ZNF460在蛋白水平的敲低效率；C为利用CCK
‑
8实验观察敲低ZNF460后KG1a和U937细胞增殖能力的变化情
况)。
[0028]图3为实施例3的敲低ZNF460后KG1a和U937细胞的凋亡率的FCM检测结果。
[0029]图4为实施例3的KG1a和U937细胞的凋亡相关蛋白的表达情况的Western blo本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.ZNF460在制备诊断急性髓系白血病的系统中的应用。2.根据权利要求1所述的ZNF460在制备诊断急性髓系白血病的系统中的应用，其特征在于，ZNF460基因的表达水平用于表征急性髓系白血病细胞的增殖能力、表征急性髓系白血病细胞凋亡的受抑制程度、以及表征急性髓系白血病细胞的细胞周期受促进程度。3.根据权利要求1或2所述的ZNF460在制备诊断急性髓系白血病的系统中的应用，其特征在于，所述系统包括序列如SEQ ID NO.1所示的正向引物和序列如SEQ ID NO.2所示的反向引物。4.ZNF460在制备治疗急性髓系白血病的药物中的应用。5.根据权利要求4所述的ZNF460在制备治疗急性髓系白血病的药物中的应用，其特征在于，所述药物用于抑制ZNF460基因的转录水平、或者抑制ZNF460蛋白的表达水平、或者抑制ZNF460蛋白的活性。6.根据权利要求5所述的ZNF460在制备治疗急性髓系白...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘北忠，邵鑫，钟梁，楚璇，万鹏，周紫薇，陈姝羽，王猛，张红艳，
申请(专利权)人：重庆医科大学附属永川医院，
类型：发明
国别省市：