基于m5C甲基化的结合蛋白ALYREF在肝癌中的应用制造技术

本发明专利技术涉及一种基于m5C甲基化的结合蛋白ALYREF在肝癌中的应用，属于生物医药领域。一种基于m5C甲基化的结合蛋白ALYREF在肝癌中的应用。本发明专利技术利用转录组测序技术探索了ALYREF在肝细胞癌组织和癌旁组织的表达差异；然后，通过体内外实验证实了沉默ALYREF表达对肝癌进展的抑制作用。转录组m5C甲基化测序结果表明，ALYREF缺乏会影响RNA中m5C的丰度和分布。本发明专利技术的研究结果表明，靶向ALYREF有助于提高肝细胞癌患者的治疗效果，为ALYREF介导的m5C修饰提供了新见解。修饰提供了新见解。修饰提供了新见解。

【技术实现步骤摘要】
基于m5C甲基化的结合蛋白ALYREF在肝癌中的应用


[0001]本专利技术涉及一种基于m5C甲基化的结合蛋白ALYREF在肝癌中的应用，属于生物医药领域。

技术介绍

[0002]肝细胞癌（英文名称hepatocellular carcinoma，英文缩写HCC）是最常见的原发性肝癌，占病例的75%～85%。肝细胞癌也是全球最常诊断的癌症之一。尽管肝切除术、经动脉化疗栓塞术、嵌合抗原受体工程T细胞免疫治疗和肝移植等肝细胞癌治疗方法多种多样，但肝细胞癌的总生存率仍不能令人满意，因此，开发更高效的治疗策略仍至关重要。
[0003]有研究表明，包括m5C甲基化（5
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甲基胞苷，英文名称5
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METHYLCYTIDINE）修饰在内的RNA修饰很可能参与了肝细胞癌的进展，从而可能为抑制肿瘤生长提供新方法。RNA修饰，例如甲基化、乙酰化和假尿苷修饰，被认为是转录后基因表达的重要调节方式。m5C甲基化修饰受m5C甲基转移酶、去甲基化酶及m5C甲基化结合蛋白的调控。m5C甲基转移酶和去甲基化酶分别是指能够催化特定RNA修饰的沉积和去除的蛋白质，而m5C甲基化结合蛋白主要识别并结合这些修饰。这三种类型的RNA修饰调节蛋白在许多生物活动中起着至关重要的作用。研究表明编码和非编码RNA的修饰在肝细胞癌的发病机制中起着重要作用，但RNA修饰如何被调节以及这些修饰如何影响肝细胞癌的增殖、侵袭和转移仍不清楚。深入了解致癌和肿瘤抑制RNA调节有助于开发新的肝细胞癌治疗手段。
[0004]近年来，越来越多的证据表明m5C修饰在包括肿瘤发生在内的许多生物过程中发挥作用。改进的检测技术使我们能够更深入地了解m5C的功能，已检测到超过10,000个位点。ALYREF被认为是一种位于细胞核中的m5C甲基化结合蛋白，可识别并直接与mRNA中的m5C位点结合，并促进RNA从细胞核输出到细胞质。ALYREF也参与输出和逆转录病毒RNA的复制。迄今为止，研究人员发现ALYREF的过度表达与膀胱癌、胶质母细胞瘤、神经母细胞瘤和肝细胞癌等恶性肿瘤密切相关。然而，需要更多的实验来支持这些结果，而ALYREF如何在肝细胞癌中发挥其致癌作用仍不清楚。
[0005]为了探索ALYREF在肝细胞癌中的作用，本专利技术目的在于提供一种基于m5C甲基化的结合蛋白ALYREF在肝癌中的应用。

技术实现思路

[0006]本专利技术的目的在于提供一种基于m5C甲基化的结合蛋白ALYREF在肝癌中的应用，本专利技术表明，靶向ALYREF有助于提高肝细胞癌患者的治疗效果，本申请为ALYREF介导的m5C修饰提供了新见解，为临床医生对于肝细胞肝癌病情分析提供了参考依据。
[0007]本专利技术基于m5C甲基化的结合蛋白ALYREF在肝癌中的应用的技术方案为：一种基于m5C甲基化的结合蛋白ALYREF在肝癌中的应用。
[0008]优选地，所述ALYREF的敲减与肝细胞癌细胞的凋亡呈正相关关系。
[0009]优选地，所述ALYREF敲减前后mRNA的m5C甲基化motif（保守序列）为CCAGCGCUG。
[0010]进一步优选地，所述ALYREF在肝细胞癌组织中较癌旁组织高表达。
[0011]进一步优选地，所述ALYREF的敲减与肝细胞癌细胞的生长呈负相关关系。
[0012]优选地，所述m5C甲基化位点的数量在3'UTR和5'UTR中最高。
[0013]优选地，降低肝癌细胞中ALYREF表达水平或者阻断肝癌细胞中ALYREF作用通路的分子或制剂在预防和/或治疗肝细胞癌中的应用。
[0014]有益效果：本专利技术利用转录组测序探索了ALYREF在肝细胞癌组织和癌旁组织的表达差异；然后，通过体内外实验证实了沉默ALYREF表达对肝癌进展的抑制作用。RNA的m5C甲基化测序结果表明，ALYREF缺乏会影响mRNA中m5C的丰度和分布。本专利技术的研究结果表明，靶向ALYREF有助于提高肝细胞癌患者的治疗效果，本申请为ALYREF介导的m5C修饰提供了新见解。
附图说明
[0015]图1为m5C相关调控蛋白在肝细胞癌组织和癌旁组织的表达水平；图2a为RT
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PCR检测在HepG2细胞中sh
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ALYREF
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1、sh
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ALYREF
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2和sh
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ALYREF
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3中ALYREF的mRNA水平变化；图2b为RT
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PCR检测在Huh7细胞中sh
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ALYREF
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1、sh
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ALYREF
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2和sh
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ALYREF
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3中ALYREF的mRNA水平变化；图3为HepG2细胞和Huh7细胞中sh
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NC、sh
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ALYREF
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1、sh
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ALYREF
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2和sh
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ALYREF
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3的蛋白水平变化；图4为HepG2细胞和Huh7细胞中sh
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NC、sh
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ALYREF两组的凋亡水平；图5a为背部注射sh
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NC和sh
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ALYREF的Huh7细胞的Balb/c裸鼠；图5b为sh
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ALYREF 和sh
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NC组处死裸鼠后，从裸鼠背部剥离的瘤体；图5c为肿瘤体积的动态变化图；图5d为Balb/c裸鼠第三周被处死后肿瘤的总重量；图6a为ALYREF敲减前后Huh7细胞中的m5C甲基化修饰变化图；图6b为ALYREF敲减前后HepG2细胞中的m5C甲基化修饰变化图；图6c为两组样品的甲基化位点序列图；图7a和图7b分别为M5C位点分别在sh
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ALYREF和sh
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NC的HepG2细胞和Huh7细胞中的密度图；图8a和图8b分别为sh
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ALYREF 和sh
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NC 在HepG2细胞和Huh7细胞中m5C位点在mRNA各个区域分布柱状图；图9a和9b分别为HepG2细胞和Huh7细胞中mRNA表达与m5C甲基化差异基因位点的关系图。
具体实施方式
[0016]下文将结合具体实施例对本专利技术的技术方案做更进一步的详细说明。应当理解，下列实施例仅为示例性地说明和解释本专利技术，而不应被解释为对本专利技术保护范围的限制。凡基于本专利技术上述内容所实现的技术均涵盖在本专利技术旨在保护的范围内。
[0017]实施例1一种基于m5C甲基化的结合蛋白ALYREF在肝癌中的应用。
[0018]实施例2一种基于m5C甲基化的结合蛋白在肝癌中的应用，ALYREF的敲减与肝细胞癌细胞
的凋亡呈正相关关系。
[0019]实施例3一种基于m5C甲基化的结合蛋白在肝本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种基于m5C甲基化的结合蛋白ALYREF在肝癌中的应用。2.根据权利要求1所述的基于m5C甲基的化结合蛋白ALYREF在肝癌中的应用，其特征在于：所述ALYREF的敲减与肝细胞癌细胞的凋亡呈正相关关系。3.根据权利要求1所述的基于m5C甲基化的结合蛋白ALYREF在肝癌中的应用，其特征在于：所述ALYREF敲减前后mRNA的m5C甲基化motif为CCAGCGCUG。4.根据权利要求2所述的基于m5C甲基化的结合蛋白ALYREF在肝癌中的应用，其特征在于：所述ALYREF在肝细胞癌组织中较癌旁组织高表达。5...

【专利技术属性】
技术研发人员：薛晨，顾心雨，鹿娟，李兰娟，
申请(专利权)人：浙江大学医学院附属第一医院，
类型：发明
国别省市：