PLK4基因在急性髓系白血病治疗方面的应用制造技术

本发明专利技术属于生物医药技术领域，具体涉及PLK4基因在急性髓系白血病治疗方面的应用。本发明专利技术要解决的技术问题是为治疗急性髓系白血病提供一种新的分子靶点。PLK4在急性髓系白血病中的表达水平较健康人高；抑制PLK4能够有效地抑制白血病细胞的生长能力以及抑制Wnt/β

【技术实现步骤摘要】
PLK4基因在急性髓系白血病治疗方面的应用


[0001]本专利技术属于生物医药
，具体涉及PLK4基因在急性髓系白血病治疗方面的应用。

技术介绍

[0002]急性髓系白血病(acute myeloid leukemia，AML)是一类以髓系原始细胞过度增殖和分化阻滞为特点的血液系统恶性肿瘤，是成人急性白血病中最常见的类型。目前，急性髓系白血病主要的治疗方法为化疗。标准化疗为“7+3”方案，即采用7天阿糖胞苷联合3天柔红霉素等蒽环类药物进行化疗，但仍有40％的患者无法达到完全缓解。因此，进一步寻找用于治疗AML的特异性靶点有重要意义。
[0003]肿瘤细胞的一个特点是过度增殖。随着研究的不断深入，人们发现肿瘤细胞的细胞周期比正常细胞短，因而始终处于活跃的增殖状态。近年来，调控细胞周期的激酶成为研究一大热点。其中，一种Polo样蛋白激酶(Polo
‑
like kinase 4，PLK4)参与调控细胞周期，且在乳腺癌、结肠癌等多种肿瘤中表达异常，进一步的研究证明PLK4通过PI3K或ATR/CHEK1通路参与调控肿瘤细胞的转移、增殖、凋亡等生物学行为。但是，PLK4在急性髓系白血病细胞中的表达水平和作用机制尚未得到证实。

技术实现思路

[0004]本专利技术意在提供PLK4基因在急性髓系白血病治疗、诊断和药物筛选中的应用，以解决现有技术中的治疗急性髓系白血病的药物需要进一步开发的技术问题。
[0005]为达到上述目的，本专利技术采用如下技术方案：
[0006]PLK4基因在制备诊断急性髓系白血病的系统中的应用。
[0007]本方案还提供了PLK4基因在制备治疗急性髓系白血病的药物中的应用。
[0008]本方案还提供了PLK4基因在筛选治疗急性髓系白血病的药物中的应用。
[0009]进一步，PLK4基因在制备诊断急性髓系白血病的系统中的应用，所述系统包括序列如SEQ ID NO.1所示的正向引物和序列如SEQ ID NO.2所示的反向引物。
[0010]进一步，PLK4基因在制备治疗急性髓系白血病的药物中的应用，所述药物用于抑制PLK4基因的转录水平、或者抑制PLK4蛋白的表达水平、或者抑制PLK4蛋白的活性。
[0011]进一步，所述药物为PLK4基因抑制剂；所述PLK4基因抑制剂以PLK4基因为靶标制备，且对PLK4基因的转录水平具有抑制作用。
[0012]进一步，所述PLK4基因抑制剂为核酸分子；所述核酸分子包括双链RNA、短发夹RNA、反义寡核苷酸和小干扰RNA。
[0013]进一步，所述PLK4基因抑制剂为短发夹RNA；所述短发夹RNA的序列如SEQ ID NO.5所示。
[0014]进一步，PLK4基因在制备治疗急性髓系白血病的药物中的应用，所述药物为Wnt/β
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catenin信号通路调控物质。
[0015]进一步，所述的PLK4基因抑制剂的载体包括逆转录病毒、腺相关病毒、慢病毒、腺病毒、脂质体和囊泡中的任意一种。
[0016]综上所述，本技术方案的有益效果在于：
[0017]本专利技术通过公开数据库分析，发现并验证PLK4在急性髓系白血病中高表达，通过构建PLK4 shRNA来抑制细胞中PLK4的表达，通过PLK4靶向抑制剂抑制急性髓系白血病的增殖，进一步地抑制Wnt/β
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catenin信号通路。
[0018]与现有技术比，本专利技术有益效果如下。
[0019]本专利技术首次发现PLK4在急性髓系白血病中高表达，通过本专利技术提供的抑制剂能够明显抑制急性髓系白血病细胞的增殖，同时能够下调Wnt/β
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catenin信号通路。为进一步研究急性髓系白血病的发病机制以及PLK4基因的功能提供了新的思路。
附图说明
[0020]图1为实施例1的Bloodspot数据库中患者造血祖细胞(HSC)和急性髓系白血病细胞中PLK4的表达情况。
[0021]图2为实施例1的PLK4在正常人单个核细胞(PBMC)和急性髓系白血病细胞系(U937、NB4、HL
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60、THP1、KG1a)mRNA表达情况。
[0022]图3为实施例1的PLK4在正常人单个核细胞(PBMC)和急性髓系白血病细胞系(U937、NB4、HL
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60、THP1、KG1a)蛋白表达情况。
[0023]图4为实施例2的PLK4抑制剂在急性髓系白血病细胞系(THP1、KG1a)中对PLK4的mRNA和蛋白抑制效果。
[0024]图5为实施例3的在急性髓系白血病细胞系(THP1、KG1a)中抑制PLK4水平后对细胞增殖方面的影响。
[0025]图6为实施例4的抑制PLK4后Wnt/β
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catenin通路有关蛋白的表达情况。
[0026]图7为实施例5的PLK4与Wnt/β
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catenin通路有关蛋白的相互作用关系。
具体实施方式
[0027]下面结合实施例对本专利技术做进一步详细的说明，但本专利技术的实施方式不限于此。若未特别指明，下述实施例以及实验例所用的技术手段为本领域技术人员所熟知的常规手段，且所用的材料、试剂等，均可从商业途径得到。
[0028]实施例1：检测PLK4在急性髓系白血病中的表达情况
[0029]1实验方法
[0030]1.1Bloodspot数据库相关数据下载及分析
[0031]急性髓系白血病样本的基因表达数据来源于Bloodspot(http://servers.binf.ku.dk/bloodspot/)数据库。从数据库获取急性髓系白血病样本的基因表达数据，然后采用t检验方法来比较急性髓系白血病细胞和造血干细胞(Hematopoietic stem cells,HSC)之间PLK4基因表达水平的差异。
[0032]1.2健康人外周血单个核细胞的提取
[0033]采用密度梯度离心从健康人外周血中分离单个核细胞。首先，将用EDTA抗凝的外周血添加到Ficoll分离液表面，然后离心，650g
×
30min。离心后外周血被分成四层，收集乳
糜层的细胞，用磷酸盐缓冲盐水(PBS)洗涤2次。
[0034]1.3白血病细胞的培养
[0035]KG1a,THP
‑
1,NB4，HL60和U937细胞购买自中国科学院细胞库(Cell Bank of the Chinese Academy of Sciences)，并使用含10％南美胎牛血清、1％青霉素
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链霉素溶液(100U/mL)的RPMI
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1640培养基培养于含5％ CO2的37℃培养箱中。平均1天传代，以保持细胞对数生长。
[0036]1.4检测基因表达水平
[0037](1)RNA提取：首先，收集对数生长期的细胞，用PBS洗涤2次，本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.PLK4基因在制备诊断急性髓系白血病的系统中的应用。2.根据权利要求1所述的PLK4基因在制备诊断急性髓系白血病的系统中的应用，其特征在于，所述系统包括序列如SEQ ID NO.1所示的正向引物和序列如SEQ ID NO.2所示的反向引物。3.PLK4基因在制备治疗急性髓系白血病的药物中的应用。4.根据权利要求3所述的PLK4基因在制备治疗急性髓系白血病的药物中的应用，其特征在于，所述药物用于抑制PLK4基因的转录水平、或者抑制PLK4蛋白的表达水平、或者抑制PLK4蛋白的活性。5.根据权利要求4所述的PLK4基因在制备治疗急性髓系白血病的药物中的应用，其特征在于，所述药物为PLK4基因抑制剂；所述PLK4基因抑制剂以PLK4基因为靶标制备，且对PLK4基因的转录水平具有抑制作用。6.根据权利要求5所述的PLK4基因在制备治疗急性髓...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘北忠，陈姝羽，楚璇，万鹏，邵鑫，周紫薇，张红艳，王猛，
申请(专利权)人：重庆医科大学附属永川医院，
类型：发明
国别省市：