米曲霉原生质体的制备方法技术

本发明专利技术公开一种丝状真菌米曲霉原生质体的制备方法，涉及生物工程中原生质体制备的方法技术领域。该方法包括：米曲霉的培养，收集菌丝、酶解等。采用本发明专利技术方法，原生质体产量可达1.5×107个/mL，并且再生率可达90％，对米曲霉基因改造奠定了基础。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种米曲霉原生质体制备方法，属于生物工程

技术介绍
米曲霉是一种好气性真菌，属于半知菌亚门、曲霉属，其菌丝一般呈黄绿色，产孢量大且含多核，其生长周期中缺乏有性生殖过程。米曲霉是一类能生产复合酶的菌株，生产的酶类包括纤维素酶、淀粉酶、糖化酶、蛋白酶等，因此米曲霉在酿造、饲料、食品等工业领域占据非常重要的地位，其中包括在米酒、酱油、商业酶以及医用蛋白生产中应用十分广泛。另外，米曲霉具有高效的蛋白分泌表达能力，其异源蛋白表达水平与真核蛋白的优秀表达系统毕赤酵母的表达水平相当。1989年美国食品与药品管理局(FDA)和美国饲料公司协会公布米曲霉是一种安全的微生物菌种(Generally Recognized as Safe foodingredients’GRAS级)。以米曲霉为生产菌株，已具有成熟的发酵及后处理技术，因此常作为基因表达、蛋白分泌研究和异源蛋白表达的理想对象。在实际生产中，米曲霉的产酶能力往往欠佳。如果能对米曲霉进行人工改造以提高其酶活，将会在一定程度上提高生产效率，降低成本；利用基因工程技术，构建米曲霉遗传转化系统如基因工程菌株和高效的外源本文档来自技高网...

【技术保护点】
米曲霉原生质体的制备方法，其特征在于，步骤如下：1)将107个米曲霉孢子接种于液体培养基中，于30℃充分震荡培养20小时；液体培养基为G‑P培养基，其组分为：蛋白胨1％，葡萄糖0.5％，磷酸二氢钾0.5％，硝酸钠0.1％，硫酸镁0.05％，余量为水；2)用擦镜纸过滤收集菌丝，用灭菌水清洗菌丝并将菌丝水分除去；3)将菌丝放入酶液中，酶解2‑4个小时；所述酶液配制：每取蜗牛酶1g及Yatalase裂解酶0.8g,以0.8mol/L氯化钠为溶剂，调pH6.0定容至100mL，混匀备用；4)收集原生质体。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：曾斌，郝庆，刘华，
申请(专利权)人：江西科技师范大学，
类型：发明
国别省市：江西;36